郭占领　李娟娟　杨　青,2△

(1复旦大学生命科学学院生物化学系　上海　200438;2云南天然产物与生物制药协同创新中心　昆明　650091)

鼠源吲哚胺2,3-双加氧酶活性检测方法的建立

郭占领1李娟娟1杨青1,2△

(1复旦大学生命科学学院生物化学系上海200438;2云南天然产物与生物制药协同创新中心昆明650091)

【摘要】目的建立鼠源吲哚胺2,3-双加氧酶 (mouse indoleamine 2,3-dioxygenase,mIDO) 活性检测方法。方法利用基因工程方法表达纯化重组mIDO (recombinant mIDO,rmIDO),建立酶水平mIDO活性检测体系;构建过表达mIDO的小鼠Lewis肺癌 (Lewis lung cancer,LLC) 细胞株,建立细胞水平mIDO活性检测体系。比较L-1-甲基色氨酸 (L-1-methyl tryptophan,L-1-MT) 在酶及细胞水平上对mIDO及人源IDO (human IDO,hIDO)的抑制作用,测定抑制类型、抑制常数Ki值及半数抑制浓度 (IC50) 值。 结果L-1-MT对mIDO和hIDO均有抑制作用,抑制类型及抑制常数Ki值相似,但IC50值在酶水平及细胞水平上均有差异。 结论mIDO酶活性检测体系是筛选IDO抑制剂的有效工具,与hIDO酶活性检测体系联用,能反映种属差异,可更好地利用小鼠模型来替代人类进行IDO抑制剂治疗疾病的研究。

【关键词】吲哚胺2,3-双加氧酶;鼠源;人源;活性检测体系;L-1-甲基色氨酸

吲哚胺2,3-双加氧酶 (indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)是哺乳动物中催化色氨酸沿着犬尿氨酸途径 (kynurenine pathway) 代谢的第一个限速酶[1],也是细胞内一种含亚铁血红素的单体胞质蛋白酶,最早被发现于1967年[2],广泛分布于人和动物的细胞和组织中[3]。人源IDO (human IDO,hIDO)蛋白由403个氨基酸组成,相对分子质量(Mr)为45 324[4],鼠源IDO (mouse IDO,mIDO)蛋白由407个氨基酸组成,Mr为45 639,通过序列比对发现,mIDO与hIDO有62%的同源一致性[5]。mIDO与hIDO具有相似的催化色氨酸代谢的生化功能,二级结构特征基本相似,但也存在差异,尤其是α-螺旋部分,它们在对不同底物的选择性、pH耐受性以及抑制剂的抑制效力上也有差异[6]。……