任守凤，刘文权，曹国梅，梁韶晖，潘长旺

（温州医科大学　基础医学院寄生虫学教研室，浙江　温州　325035）



重组登革病毒1-4型包膜蛋白EDIII的融合表达和免疫学特性研究

任守凤，刘文权，曹国梅，梁韶晖，潘长旺

（温州医科大学基础医学院寄生虫学教研室，浙江温州325035）

［摘 要］目的：构建含登革病毒（DENV）1-4型包膜蛋白（E蛋白）EDIII区的融合蛋白，并通过动物实验分析该融合蛋白的免疫机制。方法：通过生物信息学分析获得具有广泛代表性的DENV 1-4型EDIII区的氨基酸序列；将编码DENV 1-4型EDIII区的基因序列通过GS linker进行串联后插入原核表达载体pColdIII的多克隆位点，并将构建的重组质粒pColdIII-EDIII转化至大肠杆菌BL21（DE3）；通过SDS-PAGE及Western blot法鉴定目的蛋白表达，采用镍柱亲和层析法纯化目的蛋白。将纯化的蛋白免疫BABL/c小鼠，初次免疫之后再加强免疫2次。通过ELISA法检测血清中的抗体效价和细胞因子的分泌情况来评价其免疫效应。结果：重组蛋白EDIII免疫小鼠后可以诱导产生高滴度的特异性抗体，抗体效价为1︰40 000。抗原刺激小鼠脾淋巴细胞可以诱导Th1和Th2细胞免疫应答。结论：成功表达了含DENV 1-4型E蛋白EDIII的融合蛋白，并通过动物实验证实该融合蛋白能诱导小鼠产生特异性的体液和细胞免疫应答，为DENV四价重组疫苗的研制奠定了基础。

［关键词］登革病毒；包膜蛋白；融合表达；四价疫苗

登革病毒（dengue virus，DENV）是一种单链正义RNA病毒，有4种血清型（DENV-1、DENV-2、DENV-3、DENV-4）［1］，主要通过埃及伊蚊和白纹伊蚊在人际间进行传播［2］。感染后主要引起登革热、登革出血热和登革休克综合征［3］。据WHO统计，全世界有超过36亿人生活在登革热流行区，每年感染DENV的人数超过5千万，其中有近3万人死亡［4］。……