施晓鋆， 陈士岭， 郑海燕， 王乐乐， 吴雅琴

(1.贵阳市第二人民医院 妇产科， 贵州 贵阳　550081； 2.南方医科大学南方医院 妇产科生殖中心， 广东 广州　510515)



冷冻胚胎印记基因H19的DNA甲基化状态研究*

施晓鋆1， 陈士岭2， 郑海燕2， 王乐乐2， 吴雅琴2

(1.贵阳市第二人民医院 妇产科， 贵州 贵阳550081； 2.南方医科大学南方医院 妇产科生殖中心， 广东 广州510515)

[摘要]目的： 比较研究常规慢速冷冻和玻璃化冷冻后的人类早期胚胎印记基因H19的DNA甲基化状态，初步了解低温冷冻对胚胎基因印记的影响。方法： 收集胚胎移植术后正常受精的低质量的第3天胚胎152个，进行冷冻、复苏，其中常规慢速冷冻胚胎78个，玻璃化冷冻胚胎74个，另收集70个新鲜未冷冻胚胎作为对照；记录3种类型单个胚胎Bisulfite-PCR扩增个数，采用结合重亚硫酸盐限制性酶分析法检测胚胎印记基因H19的DNA甲基化状态。结果： 慢速冷冻胚胎、玻璃化冷冻胚胎及新鲜未冷冻胚胎的单个胚胎Bisulfite-PCR扩增分别成功40、53、58个；慢速冷冻胚胎、玻璃化冷冻胚胎及新鲜未冷冻胚胎H19基因的平均甲基化程度分别为(44.8±6.4)%、(47.5±5.6)%及(46.7±6.0)%，异常甲基化率分别为10.0%(4/40)、13.2%(7/53)及3.4%(2/58)；3组胚胎的甲基化程度和异常甲基化率比较，差异无统计学意义(P>0.05)。结论： 低温冷冻不增加人类胚胎甲基化异常的发生率。

[关键词]胚胎研究； 胚胎移植； 甲基化； 生殖技术,辅助； 印记基因，H19； 慢速冷冻； 玻璃化冷冻

辅助生殖技术(ART)不同于自然妊娠的过程，较多的学者关注ART出生后代的甲基化等表观遗传学风险。有研究认为卵细胞、早期胚胎是DNA甲基化易于变化的敏感时期，药物促排卵、体外培养等技术环节可能影响甲基化的擦除、重建和维持，从而诱发配子、胚胎出现印记基因甲基化异常[1]。国……