沈雪梅　李　晶　张　刚　崔宏晓　刘丽慧　姚军虎　徐秀容

(西北农林科技大学动物科技学院，杨凌712100)

改良低温螯合法分离家兔小肠绒毛和隐窝细胞及分离效果鉴定

沈雪梅李晶张刚崔宏晓刘丽慧姚军虎徐秀容*

(西北农林科技大学动物科技学院，杨凌712100)

摘要：本试验旨在研究家兔小肠绒毛和隐窝细胞的分离方法，为深入研究小肠上皮结构与功能提供体外模型。试验以新西兰白兔为试验材料，在不同螯合剂浓度[5、10、15、20、25 mmol/L 乙二胺四乙酸(EDTA)]和螯合温度(4、25 ℃)下分离小肠绒毛和隐窝细胞，检测所分离细胞团的产量、形态、细胞活率、完整性。结果表明：1)各螯合条件下分离的绒毛和隐窝细胞形态完整，基因组DNA与总RNA完整；2)螯合温度越高且EDTA浓度越大时，细胞富集率越高，但对细胞毒害作用也越强，4 ℃、5 mmol/L EDTA条件下绒毛和隐窝细胞富集率分别为7.75%和1.01%，绒毛相对完整率和隐窝细胞相对活率分别为91.67%和93.48%；25 ℃、25 mmol/L EDTA条件下绒毛和隐窝细胞富集率则分别高达17.89%和4.99%，但绒毛相对完整率和隐窝细胞相对活率仅为4.25%和5.17%；3)综合分析后确定，4 ℃、10 mmol/L EDTA条件下分离效果最佳；4)在最佳条件下所分离隐窝富集物的溶菌酶和α-防御素的相对表达量极显著高于绒毛富集物(P<0.01)，显示细胞纯度较高；且隐窝细胞经培养9 h后溶菌酶和α-防御素的相对表达量未发生显著变化(P>0.05)，显示细胞依然具有较高活力。由此可见，改良的低温螯合法适用于家兔小肠绒毛和隐窝细胞的高效分离。

关键词：隐窝；绒毛；肠上皮细胞；螯合剂；家兔

小肠是机体消化吸收的重要部位，其功能与肠上皮细胞密切相关，单层柱状上皮细胞覆盖在肠腔组成小肠的上皮，上皮弯曲折叠有序地排列成绒毛和隐窝，其中上皮凸向肠腔形成的叶状结构为绒毛，下陷至固有层形成的指套状结构为隐窝[1]。……