赵　艳,宋　军,杨发树,张艳红,张凤枰,刘耀敏,范秀丽

(通威股份有限公司水产畜禽营养与健康养殖农业部重点实验室,成都　610041)



微波辅助蛋白质水解-反相高效液相色谱法测定罗非鱼皮中的羟脯氨酸

赵艳,宋军,杨发树,张艳红,张凤枰,刘耀敏,范秀丽

(通威股份有限公司水产畜禽营养与健康养殖农业部重点实验室,成都610041)

摘要：为测定罗非鱼(Oreochromis niloticus)皮中羟脯氨酸含量，建立了微波辅助蛋白质水解-反相高效液相色谱法。实验采用9-芴基甲氧基羰酰氯(FMOC-Cl)为衍生试剂，应用ZORBAX SB-C18色谱柱，以0.05 mol/L的醋酸钠溶液和甲醇为流动相进行梯度洗脱，DAD检测器在262 nm处进行检测，外标法定量。结果显示，羟脯氨酸线性关系良好，相关系数为0.999 9，回收率92.00%～103.25%，相对标准偏差2.53%～3.61%，检出限为0.2 mg/g。

关键词：微波辅助蛋白质水解；反相高效液相色谱法；罗非鱼皮；羟脯氨酸

羟脯氨酸(hydroxyproline，HYP)是胶原蛋白的主要组成成分，不属于20种常见的氨基酸。目前，常见的三种胶原蛋白是Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型，其中Ⅰ型胶原蛋白是动物皮的主要成分之一，它含有大量的脯氨酸和羟脯氨酸(HYP)。羟脯氨酸约占胶原蛋白中氨基酸总量的10%，而在其它蛋白质中含量甚微，这使得它几乎成为胶原蛋白所特有的成分，因而可通过测定羟脯氨酸含量来计算胶原蛋白的含量，从而确定胶原蛋白的总体水平[1]。

目前，测定羟脯氨酸的方法有多种，包括分光光度法[2-3]、毛细管电泳法[4-5]、离子色谱法[6]、高效液相色谱法[7-9]和高效液相色谱串联质谱法[10-12]等，其中以高效液相色谱法最为常用。……