侯 萍 李剑平

1例O型纠B型疑难血型鉴定分析

侯 萍 李剑平

目的 探讨初筛和复检不符的疑难血型1例并对其进行分析。方法 采用血清学方法和分子生物学方法联合对1例复检的血型进行疑难血型鉴定。结果 血清学检测结果证实为有B抗原，但不能证实是否是B抗原减弱还是B亚型，分子生物检测结果证实为B型，两种方法均证实为B型，非O型。结论 ABO血型的正确定型与临床输血安全有着紧密的联系，错误的血型定型会使该献血者在输血时发生输血反应，严重者甚至可危及受血者生命。因此对初筛有所怀疑的血型必须进行复检，正确定型。

疑难血型；鉴定；分析

ABO血型的正确定型与临床输血安全有着紧密的联系，错误的血型定型会使该献血者在输血时发生输血反应，严重者甚至可危及受血者生命。本研究在复检1名初筛为O型的献血者ABO血型时，发现正定型抗B血清与献血者红细胞发生弱凝集，怀疑其可能是B抗原减弱或者是ABO亚型，为进一步确认该献血者的ABO血型，进行了一系列的血型血清学和分子生物学试验，现报道如下。

1 病例简介

献血者，女，35岁，辽宁省凤城市人，已婚，2014年4月在本站采血车进行无偿献血300 mL。各项检测指标合格。纸板法在室温下红细胞与抗A和抗B血清均不凝集，定为O型，然后检验科复检发现红细胞与抗B血清发生弱凝集，遂送本科室进行疑难血型鉴定。

2 方法

2.1 血清学检测

2.1.1 试剂与仪器 抗A、抗B试剂、抗AB、抗H、人ABO血型反定型用红细胞试剂盒（上海血液生物医药有限责任公司，批号：20130406，43700，20130408，20145310），抗A、抗B试剂、人ABO血型反定型用红细胞试剂盒（北京金豪制药股份有限公司，批号：2013063014，2014043010）。KUBOTA细胞洗涤离心机（日本久保田公司）。

2.1.2 ABO血型鉴定、血型物质测定、吸收放散试验ABO血型正反定型、血型物质测定、吸收放散试验方法均参考相关操作进行[7]，具体方法如下。

（1）ABO血型正反定型 正定型每管加1滴抗A、抗B、抗AB、和抗H试剂，同时分别加1滴患者3%～5%的红细胞；反定型每管分别加2滴患者血清和1滴反定型Ac、Bc、Oc及患者自身细胞，离心，判读结果。

（2）血型物质测定 制备倍量稀释的抗体。用抗A检查A型分泌型，抗B检查B型分泌型；混合2滴稀释后的抗体与1滴3%～5%的含有相应抗原的红细胞盐水，室温中和15 min，离心判读结果，检查是否为A、B分泌型。

（3）吸收放散试验 吸收试验：抗A、抗B标准血清倍比稀释测效价；取患者洗3次后的亚基红细胞与等量的抗血清混合，4℃放置1 h，离心，吸取上清液，即为吸收液，吸收液做效价与相应的抗A、抗B标准血清对比。

放散试验：取上述离心后压积细胞加入1/2容积的生理盐水，56℃水浴放散7～10 min，离心，上清液即为放散液，用A和B型红细胞鉴定抗体，确定受检者血型。

2.2 分子生物学检测

2.2.1 样本DNA提取 用血液DNA提取试剂盒(北京天根公司)从献血者血液样本中提取DNA，并用核酸蛋白测定仪测定DNA浓度和纯度，试验严格按照DNA提取试剂盒使用说明书进行操作。

2.2.2 ABO血型的聚合酶链反应-序列特异性引物基因分型（PCR-SSP） 采用天津秀鹏公司人红细胞ABO血型基因检测试剂盒，按照试剂盒操作说明书严格进行操作，首先配制dNTP-Buffer工作液，然后配制Buffer-酶-样本混合液，混匀并离心Buffer-酶-样本混合液，分别向每个引物孔（1～8孔）各加10 μL的混合液，每孔再分别加15～20 μL石蜡油，用密封膜封好PCR反应板；反应板顶部置PCR密封压力垫，关上PCR仪，启动PCR程序。结束后将PCR产物转移到2.5%琼脂糖凝胺电泳，电泳150 V，15 min，紫外光拍照记录。

3 结果

3.1 血清学检测结果 献血者红细胞在室温下与上海和北京的抗B凝集均较弱为2+，同时与抗AB的凝集更弱为镜下mf，与抗H凝集则高达4+，正定型出现定型困难；反定型献血者血浆与Ac凝集为4+，与Bc、Oc及自身均不凝集，反定型为B型。血型物质测定为分泌型，有B物质。经吸收放散试验证明其红细胞上有B抗原，没有A抗原。见表1～表5。

表1 ABO血型正反定型结果

表2 血型物质测定结果

表3 受检者与抗A血清吸收试验结果

表4 受检者与抗B血清吸收试验结果

表5 放散试验结果

3.2 分子生物学检测结果 根据PCR-SSP检测试剂盒提供的参考等位基因和图1电泳结果判定该献血员基因型B/O 2。该结果符合其血清型。见图1。

图1 PCR-SSP电泳图注：1：O 1；2：非O 1；3：O 2；4：非O 2；5：B；6：非B；7：A 2；8：非A 2

4 讨论

本例B型献血者由于红细胞表面B抗原极弱，在采血车采用纸板法定型极易误定为O型。该献血者在进行血型血清学鉴定时，发现正定型抗B凝集减弱，抗AB凝集极弱，造成血型定型困难，为进一步鉴定该献血者血型，我们又进行了血型物质和吸收放散试验，结果证明，有B抗原存在，暂定B型，但不排除B亚型的可能性，

由于血清学技术存在一定的局限性，有时导致一些疑难血型标本难以准确判定。因此，通过采用分子生物学技术可以准确地对正、反定型不一致的标本进行定型[1-2]。所以，本研究对本例血清学存在B抗原，但不能确定是B抗原减弱还是B亚型的标本进行了分子生物学的基因检测，经进一步分子生物学试验证实基因型为B/O 2，该结果显示为B型，与血清学结果基本一致，同时排除了B亚型的可能性，证实为B抗原减弱的B型献血者。

血型的正确鉴定对于献血者和用血者都具有重要的临床意义，是保证安全输血的关键。本例为1名已婚的女性献血者，因此，如果该献血者为O型血，与非O型血的男士生子，可能会有发生新生儿溶血病的风险，因此该献血者血型的正确定型尤为重要。另外，作为用血者，血型不合的血液输注也会引起急性溶血性输血反应的可能性[3]。

据文献报道[4-5]，血型鉴定发生错误的原因，有47%由于人为错误造成，因此在日常工作中，发现正反定型不一致时，一定要引起高度重视。就医疗系统而言，有15%是检测人员没执行严格查对制度和医疗技术操作规程造成[6]。就血站而言，随着无偿献血人员的逐渐增多，血型错定或者一些疑难血型的风险就逐渐加大，因此，除了要求采血车工作人员增加责任感和严格按照操作规程进行检测外，对有疑问的血型一定要复检，复检采用血清学方法，如果不能证实是否是抗原减弱或者亚型，还需进一步的分子生物学试验进行确证，保证血型的准确无误，进而保证输血安全。

[1] 李彤彤，黄娴，王维.国内异常ABO血型的鉴定研究进展[J].检验医学与临床，2013，10（14）：1889-1890.

[2] 万小春，李雪群，严凤好.从检出8例弱B型探讨ABO血型正反定型的重要性[J].中外健康文摘，2011，8（16）：208-209.

[3] 兰炯采，负中桥，陈静娴．输血免疫血液学实验技术[M]．北京：人民卫生出版社，2011:49-140．

[4] 刘萍，李荣国，王志梅,等.街头献血车ABO血型初检错误的原因分析及预防[J].中外健康文摘，2009,6（32）：115.

[5] 李瑞丽，秦强国，张颖,等.2010年无偿献血者ABO血型检测结果分析[J].中国医药指南，2011，9（14）：70.

[6] 陈岩.血型鉴定错误的原因分析[J].中外健康文摘，2013，10（25）：12.

10.3969/j.issn.1009-4393.2016.13.007

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