唐汉庆　韦　祎　卢　兰　陈　桦　李晓华　朱晓莹　劳传君

(右江民族医学院，广西　百色　533000)



铁皮石斛对小鼠端粒酶活性及抗衰老能力的影响

唐汉庆韦祎1卢兰2陈桦3李晓华朱晓莹劳传君

(右江民族医学院，广西百色533000)

〔摘要〕目的探讨铁皮石斛对小鼠端粒酶活性及抗衰老能力的影响。方法清洁级雄性昆明种小鼠100只随机分为正常对照组、模型组、铁皮石斛低剂量组、中剂量组、高剂量组共5组。每组20只。对铁皮石斛低剂量组、中剂量组、高剂量组按125、250、500 mg/kg分别给予铁皮石斛灌胃，对照组灌胃相同体积的生理盐水。每天1次，连续30 d。然后检测活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、脑脂褐素(LF)及端粒酶活性。结果与对照组比较，模型组ROS、MDA和LF水平升高或显著升高(P<0.05或P<0.01)，SOD、GSH-Px和端粒酶活性均显著降低(P<0.01)。与模型组比较，各剂量组SOD、GSH-Px和端粒酶活性均升高或显著升高(P<0.05或P<0.01)，ROS、MDA和LF水平下降或显著下降(P<0.05或P<0.01)。结论铁皮石斛增强抗氧化酶和端粒酶活性，提高抗氧化能力，可能是其抗衰老的机制之一。

〔关键词〕铁皮石斛；抗衰老；端粒

铁皮石斛为兰科石斛属多年生草本植物，是我国传统的名贵中药材，道家经典《道藏》将其列为中华“九大仙草”之首，现代药理学研究表明具有抗疲劳、提高免疫力、抗氧化、抗衰老、降血压、抗肿瘤、防辐射性损伤等作用〔1～4〕。铁皮石斛抗氧化和抗衰老作用是相互联系的，关于机体的衰老机制，有研究认为与体内自由基增多及端粒酶活性的变化有关〔5,6〕，本实验拟观察铁皮石斛对衰老小鼠的抗氧化和抗衰老作用及机制。

1材料与方法

1.1动物与分组清洁级雄性昆明种小鼠100只，体重(22.06±2.1)g，北京维通利华实验动物技术有限公司提供，实验动物生产许可证号：SCXK(京)2013-0005。动物在安静环境下分笼饲养，室温控制在(23±1)℃范围内，相对湿度60%～70%，小鼠以基础饲料常规饲养，自由饮水，小鼠适应性饲养1 w后，随机数字表法分为5组：对照组、模型组、铁皮石斛低剂量组、中剂量组、高剂量组。每组20只。

1.2主要试剂与仪器D-半乳糖(北京化学试剂公司)；铁皮石斛胶囊(广西浙商投资有限公司)；超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)、脑脂褐素(LF)检测试剂盒(均由南京建成生物工程研究所提供)；端粒酶活性检测试剂盒(美国 BPB 公司)；台式高速低温离心机(Z360K型，德国HERMLE公司);电子天平(AE160型，瑞士Mettler公司);分光光度计(722型，上海精密科学仪器有限公司)；荧光分光光度计(F-3000型，日本日立)；电动玻璃匀浆机(DY-89型，宁波新芝公司)；PCR仪(7900HT型,ABI公司)；酶标仪(MK3型，Thermo Labsystem 公司)。

1.3动物造模与给药参照中华人民共和国卫生部《保健食品检验与评价技术规范(2003)》抗氧化功能检验方法D-半乳糖腹腔注射造模，取80只进行造模，造模后分为模型组、铁皮石斛低剂量组、中剂量组、高剂量组4组，余下为对照组。铁皮石斛胶囊用蒸馏水溶解，配成浓度为50 mg/ml的溶液。根据人体推荐用量25mg/ml设立相当于人体推荐用量的 5、10、20倍3个剂量即铁皮石斛低剂量组、中剂量组、高剂量组(剂量分别为125、250、500 mg/kg)。低、中、高剂量组分别以上述3个相应剂量标准折合成给药体积数，模型组和对照组给予等体积的生理盐水。每天灌胃1次，连续30 d。

1.4指标检测取静脉血2 ml，离心(4℃，1 000 r/min,10 min),分离血清,-70℃冻存。采用比色法测定血清ROS，二硫代二硝基苯甲酸法测定GSH-Px活性 ，黄嘌呤氧化酶法测定血清SOD活性；硫代巴比妥酸法测定MDA；PCR-ELISA 法检测血清端粒酶活性。另取大鼠脑组织液氮中冻存，检测前用生理盐水制备成10% 匀浆，离心(4℃，3 000 r/min,15 min)，取上清荧光法测定LF含量。均严格按说明书操作进行检测。

1.5统计学处理采用SPSS13.0软件行单因素方差分析及t检验。

2结果

2.1SOD和GSH-Px活性检测结果与对照组比较，模型组SOD和GSH-Px活性均显著下降(P<0.01)。与模型组比较，低剂量组SOD和GSH-Px活性有升高趋势，但差异没有统计学意义(P均>0.05)；中剂量组SOD和GSH-Px活性升高(P<0.05)；高剂量组SOD和GSH-Px活性显著升高(P<0.01)。见表1。

2.2ROS、MDA和LF检测结果与对照组比较，模型组ROS、MDA和LF水平升高或显著升高(P<0.05或P<0.01)；与模型组比较，低剂量组ROS、MDA和LF水平有下降趋势，但差异没有统计学意义(P均>0.05)；中剂量组ROS、MDA和LF水平下降(P<0.05)；高剂量组ROS、MDA和LF水平下降或显著下降(P<0.05或P<0.01)。见表1。

2.3端粒酶活性检测结果与对照组端粒酶活性(78.68± 6.24)比较，模型组显著降低(42.56± 3.21，P<0.01)。与模型组比较，低剂量组端粒酶活性升高(56.65± 5.65，P<0.05)，中剂量组(70.24± 5.38)和高剂量组显著升高(72.35±6.12，P<0.01)。

表1各组SOD、GSH-Px活性、ROS、MOA和LF结果比较(x±s，n=20)

组别SOD(U/ml)GSH-Px(U/ml)ROS(ng/L)MDA(mol/L)LF(μg/g)对照组185.25±14.2196.21±7.8621.31±5.965.62±1.1248.36±7.22模型组92.16±7.152)34.22±4.222)50.25±8.652)20.32±2.022)68.21±8.861)低剂量121.11±9.2453.68±4.9634.22±7.5615.22±1.6862.26±8.23中剂量163.74±10.813)75.22±5.843)26.11±6.363)8.06±1.523)52.38±7.983)高剂量172.42±11.954)91.24±7.234)20.35±6.144)5.66±1.064)50.54±7.623)

与对照组比较：1)P<0.05，2)P<0.01；与模型组比较：3)P<0.05，4)P<0.01

3讨论

D-半乳糖注射造模是常用的制备衰老模型的方法，其机制是D-半乳糖通过半乳糖氧化酶催化生成醛糖和过氧化氢，产生大量ROS和超氧自由基，大量超氧自由基使体内脂质过氧化反应加强〔7〕，脂质过氧化可以产生大量MDA，MDA能交联蛋白和 DNA,促使LF的大量形成，加重过氧化损伤〔8,9〕，氧化损伤可引起机体细胞功能损害及抗氧化酶如SOD、GSH-Px活性降低，导致衰老的发生。

SOD和GSH-Px是人体内主要的抗氧化酶。SOD能特异性地清除体内氧自由基，把氧自由基歧化生成过氧化氢〔10〕，然后通过GSH-Px将过氧化氢转化为水从而发挥抗氧化作用。本实验结果表明D-半乳糖注射造模，已引起模型动物体内氧化损伤，这是衰老发生的重要环节，本文提示铁皮石斛可从提高抗氧化能力、减少氧化产物生成以及增强抗氧化酶活性方面发挥延缓衰老作用。

由于氧化损伤可引起机体细胞功能的损害，导致细胞凋亡，从而使机体表现出衰老的特征。近年相关研究〔11〕结果表明端粒酶使细胞寿命延长，显示其在抗衰老方面的良好前景。端粒酶活性的高低在一定程度上反映了机体抗衰老能力的高低〔12〕，本实验结果提示铁皮石斛除了提高抗氧化能力、增强抗氧化酶活性外，还可以增强端粒酶活性，对铁皮石斛抗衰老的机制值得继续研究。

4参考文献

1高正,杨兵勋,陈立钻.铁皮石斛的应用进展〔J〕.中国现代应用药学杂志,2008；25(8):693-5.

2吕圭源,颜美秋,陈素红.铁皮石斛功效相关药理作用研究进展〔J〕.中国中药杂志,2013；38(4):489-93.

3王崇道，强亦忠，崔凤梅.铁皮枫斗晶对小鼠辐射损伤的防护作用〔J〕.辐射防护,2004；24(6):403-5,408.

4秦秋荣，刘庆军，张国庆.铁皮枫斗颗粒对放射损伤小鼠存活情况及肺病理组织学改变的影响〔J〕.中国血液流变学杂志,2008；18(3):332-4,348.

5Cox LS,Mason PA.Prospects for rejuvenation of aged tissue by telomerase reactivation〔J〕.Rejuvenation Res,2010；13(6):749-54.

6Lee SW,Clemenson GD,Gage FH.New neurons in an aged brain〔J〕.Behav Brain Res,2012；227(2):497-507.

7Greiner JF,Müller J,Zeuner MT,etal.1,8-Cineol inhibits nuclear translocation of NF-κB p65 and NF-κB-dependent transcriptional activity〔J〕.Biochim Biophys Acta,2013；1833(12):2866-78.

8Alpertunga B,Kara M,Abudayyak M,etal.Effects of prochloraz on DNA damage,lipid peroxidation and antioxidant system in vitro〔J〕.Toxicol Mech Methods,2014;24(4):268-75.

9Cui Y,Han Y,Yang X,etal.Protective effects of quercetin and quercetin-5',8-disulfonate against carbon tetrachloride-caused oxidative liver injury in mice〔J〕.Molecules,2013；19(1):291-305.

10Karakiulakis G,Roth M.Muscarinic receptors and their antagonists in COPD:anti-inflammatory and antiremodeling effects〔J〕.Mediators Inflamm,2012；2012:409580.

11Yamada-Fukunaga T,Yamada M,Hamatani T,etal.Age-associated telomere shortening in mouse oocytes〔J〕.Reprod Biol Endocrinol,2013；11:108.

12Boccardi V,Barbieri M,Rizzo MR,etal.A new pleiotropic effect of statins in elderly:modulation of telomerase activity〔J〕.FASEB J,2013；27(9):3879-85.

〔2014-12-30修回〕

(编辑赵慧玲/曹梦园)

〔中图分类号〕R-331

〔文献标识码〕A

〔文章编号〕1005-9202(2016)08-1809-03；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.08.008

通讯作者：劳传君(1981-)，男，讲师，主要从事人体结构与功能研究。

基金项目：广西高校科学技术研究项目(2013YB182)

1海南医学院2惠州市第四人民医院

3惠州卫生职业技术学院

第一作者：唐汉庆(1976-)，男，副教授，博士，主要从事尼族医药和疾病中西医结合基础研究。