荣季冬， 李 玲， 龙仙萍， 邓文文， 石 蓓

(遵义医学院第一附属医院心血管内科，贵州 遵义 563003)

慢病毒载体介导的降钙素基因相关肽转染对心脏干细胞活力的影响*

荣季冬， 李 玲， 龙仙萍， 邓文文， 石 蓓△

(遵义医学院第一附属医院心血管内科，贵州 遵义 563003)

目的： 探讨携带降钙素基因相关肽(CGRP)的慢病毒体外转染对大鼠c-kitpos心脏干细胞(c-kit+CSCs)活力的影响。方法: 无菌条件下取出SD大鼠的心耳，采用酶消化法结合免疫磁珠法获取c-kit+CSCs，并通过流式细胞术鉴定；将携带目的基因的重组慢病毒载体(Lv-EGFP-CGRP)及空病毒载体(Lv-EGFP)分别转染至c-kit+CSCs，实验分为3组： Lv-EGFP-CGRP-CSCs组、Lv-EGFP-CSCs组和CSCs组；在荧光显微镜下观察转染情况，采用流式细胞技术测定其转染率，采用ELISA测定各组培养上清液中CGRP的浓度，采用CCK-8法检测慢病毒转染对c-kit+CSCs活力的影响。结果: 成功分离培养获取c-kit+CSCs，流式细胞术鉴定显示其高表达c-kit(为91.0%)，低表达CD45及CD34；成功转染慢病毒的大鼠c-kit+CSCs可表达绿色荧光，48 h后可稳定表达，感染复数(MOI)值为20时，荧光显微镜观察及流式细胞术结果均显示转染率达80%以上；ELISA结果示，Lv-EGFP-CGRP-CSCs组细胞上清液CGRP分泌量较Lv-EGFP-CSCs组和CSCs组增加(P<0.01)； CCK-8检测细胞活力的结果显示，慢病毒转染不影响c-kit+CSCs的活力。结论: 携带CGRP的慢病毒载体可成功转染至c-kit+CSCs，转染Lv-EGFP-CGRP后的c-kit+CSCs可合成和分泌CGRP蛋白至上清液中，且转染后c-kit+CSCs的活力未受影响。这为基因工程细胞疗法治疗心肌梗死提供了新的理论及实验依据。

降钙素基因相关肽； 慢病毒载体； 心脏干细胞； 细胞活力

c-kit+心脏干细胞(c-kitposcardiac stem cells，c-kit+CSCs)具有心脏组织的特异性，有向心肌细胞、血管平滑肌细胞及内皮细胞定向分化的潜能，被认为可能是细胞移植治疗心肌梗死最理想的种子细胞[1-3]。但干细胞移植治疗心肌梗死仍面临着诸多问题，如移植存活率低，在体内增殖、分化为有功能的细胞少，使其修复心肌的能力受到限制，远达不到预期疗效。……