贺辉+陈燕红+苏国强

【摘要】 目的 观察应用RNAi技术下调局部粘着斑激酶（FAK） 基因表达对SW620细胞侵袭及转移能力的影响。方法 利用前期构建的针对FAK基因有效的短发夹RNA （shRNA ）序列的慢病毒表达载体， 包装慢病毒并感染人结肠癌细胞SW620。运用免疫印记（Western-blot）从蛋白水平检测FAK基因的表达， Transwell小室模型分别检测敲减FAK基因表达对SW620细胞的侵袭及转移能力的影响。结果 用慢病毒敲减FAK后的大肠癌细胞， 蛋白水平FAK表达明显下调， SW60细胞的侵袭及转移能力均受到明显抑制。结论 下调FAK的表达水平， 能明显抑制大肠癌SW620细胞的侵袭及转移能力。

【关键词】 慢病毒；局部粘着斑激酶；SW620；人结肠癌细胞；短发夹RNA

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.14.212

Influence by RNAi down-regulated FAK gene on invasion and metastasis ability in colorectal cancer cell SW620 MAO He-hui， CHEN Yan-hong， SU Guo-qiang. Department of Surgery， Xiamen City Maternal and Child Health Care Hospital， Xiamen 361003， China

【Abstract】 Objective To observe influence by RNAi down-regulated focal adhesion leinase （FAK） gene on invasion and metastasis ability in colorectal cancer cell SW620. Methods Lentivirus packaging was made by expression vector of short hairpin RNA （shRNA） sequence established for FAK gene， and human colon cancer cell SW620 was infected. Western-blot was applied to detect FAK gene expression from protein level， and Transwell cell model was used to detected influence by FAK gene knock-down expression on invasion and metastasis ability in SW620. Results In colorectal cancer cell after FAK gene knock-down by lentivirus， protein FAK expression was reduced， while invasion and metastasis ability in SW620 were obviously suppressed. Conclusion Invasion and metastasis ability in colorectal cancer cell SW620 can be remarkably suppressed by down-regulated FAK expression.

【Key words】 Lentivirus； Focal adhesion leinase； SW620； Human colon cancer cell； Short hairpin RNA

大肠癌主要以手术和化疗治疗， 但是对复发转移患者， 传统治疗疗效较差， 近年来， 靶向治疗成为研究热点。FAK作为细胞传导中的重要信号分子， 参与细胞增殖、转移， 如果可以抑制FAK基因的表达， 理论上能降低肿瘤的增殖活性、侵袭及转移能力。既往研究提示， 抑制细胞内FAK基因表达， 可明显降低乳腺肿瘤及卵巢肿瘤细胞的侵袭和转移能力 [1， 2]。前期试验中成功构建了FAK shRNA重组慢病毒质粒， 并制备相应的慢病毒感染人大肠癌细胞SW620[3]， 下调其FAK基因表达， 观察对大肠癌细胞SW620侵袭、转移能力的影响， 为动物体内实验打下基础。现报告如下。

1 材料与方法

1. 1 材料 人大肠癌细胞株SW620由厦门大学李博安教授惠赠；Tranwell小室购自Millipore公司；Trizol、Lipofectamine 2000购自Invitrogen公司；RNase-free购自大连宝生公司；RPMI-1640培养基、胎牛血清等购自Hyclone公司；细胞培养板及计数板均购自Costar公司。……