王静怡，范翠芳，孙艳梅，谢明花，王素青

(1武汉大学公共卫生学院，武汉430071；2武汉大学人民医院)



子痫前期患者足月分娩后胎盘组织中PGRN mRNA及蛋白表达变化

王静怡1，范翠芳2，孙艳梅2，谢明花1，王素青1

(1武汉大学公共卫生学院，武汉430071；2武汉大学人民医院)

摘要：目的观察子痫前期患者足月分娩后胎盘组织中颗粒蛋白前体(PGRN)mRNA及蛋白的表达变化，并探讨其意义。方法 子痫前期产妇20例，其中轻度子痫前期10例(轻度组)、重度子痫前期10例(重度组)，另选健康产妇10例为对照组。各组胎盘娩出后取胎盘组织，采用real-time PCR法检测胎盘组织中的PGRN mRNA，采用免疫组化法检测PGRN蛋白。结果对照组、轻度组、重度组胎盘组织中PGRN mRNA相对表达量分别为1±0.083 474、0.578 398±0.110 795、0.360 415±0.164 284，轻度组、重度组与对照组相比，P均<0.05。对照组、轻度组、重度组胎盘组织中PGRN蛋白相对表达量分别为87 466 413.2±14 162 957.0、59 561 837.0±4 370 396.7、56 734 851.3±3 060 036.0，轻度组、重度组与对照组相比，P均<0.05。结论 子痫前期产妇胎盘组织中PGRN mRNA及其蛋白表达低于正常，PGRN低表达可能与子痫前期的发生有关。

关键词：妊娠并发症；子痫前期；颗粒蛋白前体；胎盘组织

子痫前期可能造成孕妇多脏器功能衰竭，引起不良妊娠结局，危害母儿健康[1]。子痫前期的特征性病理改变是胎盘血管内皮细胞损伤与功能障碍。炎症反应是造成血管内皮细胞损伤的主要原因，可导致胎盘发育不良，与胎盘形成不良密切相关[2]。研究[3]表明，TNF-α可能是造成子痫前期患者血管内皮细胞损伤的主要因子之一。颗粒蛋白前体(PGRN)是TNF-α的拮抗剂，可阻断TNF/TNFR介导的NF-κB、MAPK信号转导途径活化，抑制炎症相关基因表达，在机体生长发育、损伤修复和细胞增殖等方面发挥重要作用[4~6]。目前关于PGRN在子痫前期发病中的作用报道较少。为此，本研究观察了子痫前期产妇胎盘组织中PGRN mRNA及蛋白的表达变化，现报告如下。

1资料与方法

1.1临床资料2014年4~8月于武汉大学人民医院住院分娩的子痫前期[7]产妇20例，其中轻度(轻度组)、重度(重度组)各10例。轻度组于孕(28.1±2.4)周确诊，重度组于孕(27.1±1.8)周确诊。另选健康产妇10例为对照组，均无其他内外科及产科合并症。三组一般资料具有可比性，见表1。三组产妇胎盘娩出即刻在胎盘中央附近的绒毛膜板下取胎盘绒毛组织两块，一块置于-80 ℃冰箱保存；另一块样品1 cm3大小，用无菌生理盐水冲洗后，放入4%多聚甲醛中固定，常规乙醇脱水，石蜡包埋，室温保存。

表1　三组一般资料比较

1.2胎盘组织中PGRN mRNA检测采用real-time PCR法。常规TRIzol提取胎盘组织RNA，逆转录合成cDNA，进行PCR反应。PGRN上游引物序列为5′-ACACTGTGTGTGACCTGATCCAGAG-3′，下游引物序列为5′-CGACTGTAGACGGCAGCAGGTA-3′；内参β-actin上游引物序列为5′-GGACTTCGAGCAAGAGATG-3′，下游引物序列为5′-AGCACTGTGTTGGCGTACG-3′。PCR反应条件：95 ℃预变性10 min，95 ℃变性15 s，60 ℃退火20 s，72 ℃延伸30 s，共40个循环。每个样品做3个平行样，以2-ΔΔCt表示目的基因相对表达量。

1.3胎盘组织中PGRN蛋白检测采用免疫组化法。光镜下(400×)每张切片随机挑选10个区域，以细胞内出现棕黄色颗粒为PGRN表达阳性。用Image Pro Plus6.0软件进行分析，以累积光密度值(IOD)代表选定区域的蛋白表达量。

2结果

2.1各组胎盘组织中PGRN mRNA表达比较对照组、轻度组、重度组胎盘组织中PGRN mRNA相对表达量分别为1±0.083 474、0.578 398±0.110 795、0.360 415±0.164 284，轻度组、重度组与对照组相比，P均<0.05。

2.2各组胎盘组织中PGRN蛋白表达比较对照组、轻度组、重度组胎盘组织中PGRN蛋白相对表达量分别为87 466 413.2±14 162 957.0、59 561 837.0±4 370 396.7、56 734 851.3±3 060 036.0，轻度组、重度组与对照组相比，P均<0.05。

3讨论

多项研究表明，子痫前期的病理基础是血管内广泛、过度炎症反应导致的内皮细胞损伤。Redman等[8]首次提出正常妊娠孕妇本身存在轻微的炎症反应，而子痫前期为过度的炎症反应。Greer等[9]发现患有妊娠高血压疾病的孕妇外周血中活化的中性粒细胞增多，导致母体血管内皮损伤及功能障碍。国外研究[10]表明，早期应用小剂量阿斯匹林可降低高危孕妇子痫前期的发生率。有学者[11]发现，子痫前期产妇胎盘组织中TNF-α表达量高于健康产妇，TNF-α可能是造成子痫前期患者血管内皮细胞损伤的主要因子之一。

PGRN在富含上皮细胞的组织与器官中广泛分布，在脾、肾上腺、生殖器官(卵巢、附睾)中表达最强[12]。PGRN能与TNF-α直接结合，从而扰乱TNF/TNFR相互作用[13]。有学者[14]认为PGRN是TNFR的一种配体，是TNF-α信号途径的拮抗剂，在小鼠关节炎的病理过程中扮演重要角色，提出PGRN有望成为治疗TNF-α相关疾病的一个新的靶点。

本研究分别检测了健康孕妇及子痫前期产妇胎盘组织中的PGRN mRNA及蛋白，结果显示，轻度、重度子痫前期产妇胎盘组织中PGRN mRNA及蛋白相对表达量低于健康产妇，提示子痫前期的发病可能与PGRN低表达有关。我们推测，PGRN可能通过作用于TNF-α参与子痫前期的发生。PGRN作为TNF-α生理条件下的拮抗剂，可以阻断TNF/TNFR信号转导通路，当PGRN表达减少，TNF/TNFR信号转导通路活化增强，导致血管内皮细胞受损，进而诱发子痫前期。本研究中轻度组与重度组PGRN表达差异无统计学意义，这一结果提示PGRN表达量下降也可能是承载PGRN表达的滋养层细胞发生凋亡所致。有研究表明子痫前期本身与滋养细胞的凋亡有关，子痫前期孕妇胎盘滋养细胞凋亡显著增加，胎盘细胞凋亡与疾病严重程度呈正相关。究竟是滋养细胞本身的凋亡导致PGRN表达减少还是PGRN本身不表达，还有待进一步证实。

结合上述研究结果，我们认为，PGRN表达下调可能与子痫前期的发病有关，对于其具体机制及如何通过调控PGRN表达预防或控制子痫前期，尚需进一步研究。

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(收稿日期：2015-09-28)

中图分类号：R714.25

文献标志码：B

文章编号：1002-266X(2016)07-0062-02

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.07.023

通信作者：王素青(E-mail: swang2099@whu.edu.com)