贺旭英 马敬仓

山东省菏泽市疾病预防控制中心免疫规划科，山东菏泽274010

菏泽市2015年麻疹疑似病例血清学和病毒学检测分析

贺旭英 马敬仓▲

山东省菏泽市疾病预防控制中心免疫规划科，山东菏泽274010

目的分析2015年本地麻疹疑似病例实验室检测特点，提高应对麻疹疫情的能力，为消除麻疹工作提供技术支持。方法对2015年1～12月报告的麻疹疑似病例采集血清学和病毒学标本，采用ELISA法检测血清标本麻疹IgM抗体，采用实时荧光RT-PCR法检测麻疹病毒核酸，核酸检测阳性的标本进行病毒分离。结果2015年报告MLI 400例，血清标本、病毒学标本采集率分别为86.25%，8.75%；血清标本检测麻疹IgM阳性率为50.61%（166/328）；风疹IgM阳性率为4.60%（15/326）；不同县区麻疹IgM阳性率在34.44%～92.96%之间，不同县区风疹IgM阳性率在0.00%～33.33%之间。病毒学标本中，麻疹病毒核酸检出率为65.52%，分离1株麻疹病毒，为H1a型；各县区均有麻疹发病；不同月份麻疹IgM阳性率在0.00%～75.00%之间，阳性率高峰在4月份。结论为控制麻疹病毒流行，仍要继续落实以提高麻疹疫苗接种率为重点的技术措施。

麻疹；血清；病毒；消除；基因

麻疹是最具有传染性的人类疾病之一，可常年发生，但正常的峰值时间是发生在干燥季节或晚冬、早春，大的流行间隔为2～4年，无动物宿主以及无症状携带者，麻疹病毒为单一类型，基因型稳定，并且无基因重组的证据。在1963年麻疹减毒活疫苗取得许可证以前，据估计，每年全球因麻疹导致死亡的人数超过200万人，随着疫苗覆盖率不断增长，因麻疹发病而导致的死亡下降，在2000～2014年间，常规疫苗覆盖率从72%增加到85%，对应的死亡病例从55万人下降到12万人。在2000年，联合国大会通过了“千年发展目标”，其中第四个目标是在2015年前，降低儿童死亡率2/3，而麻疹疫苗覆盖率为评价这个进展的3个指标之一；同年，世界卫生大会确定了2015年前的3个里程碑控制目标，2012年又通过了“全球疫苗行动计划”，目标是在2015年前在世界卫生组织（World Health Organization，WHO）的四个区域中实现消除麻疹［1，2］。随着消除麻疹工作的不断进展，WHO提出了消除麻疹工作的验证原则、程序和三条验证标准，突显了麻疹实验室检测在麻疹监测系统（Measles Surveillance System，MSS）中的基础作用［3］。2015年，菏泽市麻疹病例出现上升趋势，为提高麻疹诊断的特异性，掌握麻疹病毒学特点，提高应对麻疹疫情的能力，对全市400例麻疹疑似病例（measles-like illnesses，MLI）标本的血清学检测、病毒学检测结果进行了分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

菏泽市2015年MSS数据库来自中国疾病预防控制系统/麻疹监测信息报告管理系统；各县区疾病预防控制机构免疫规划专业人员通过该系统用户端口将个案调查信息、实验室检测结果录入，最终形成当年数据库。

1.2 病例调查依据及诊断分类

依据《全国麻疹监测方案（2014）》工作要求，对报告的MLI开展调查；根据免疫史、临床表现及实验室检测结果，对MLI分类为实验室确诊病例、临床诊断病例、排除麻疹风疹病例。

1.3 标本采集

各县区疾病预防控制机构免疫规划专业人员对2015年报告的MLI进行调查，并采集标本，采集时间要求在MLI病例出疹后4～28 d内，标本包括静脉血和（或）咽拭子。负责标本采集，采集静脉血约2mL，常规分离血清量后约0.5～1.0 mL，咽拭子采集后保存在3 mL麻疹病毒保存液中，均在-20℃保存，并及时运送至市级麻疹实验室。其中，病毒保存液配制与分装：5%牛血清的MEM维持液（pH7.0）：200 mL；Eagl ME溶液（无菌）165.5mL；3%谷氨酰胺（无菌）2.0mL；1万单位的青链霉素20.0 mL；7.5%碳酸氢钠（无菌）约2.5mL（至pH7.0为止）；新生小牛血清（无菌）10.0mL；将以上配制好的液体用带外螺旋盖的无菌4.0 mL的血清管分装成20mL/支。储存：将分装好的病毒保存液置-20℃，临用前解冻。

1.4 检测方法

分别采用ELISA法、实时荧光RT-PCR法检测麻疹/风疹IgM抗体、病毒核酸；对病毒核酸阳性标本，及时送山东省疾病预防控制中心麻疹实验室进行病毒分离、鉴定，操作过程参见WS296-2008麻疹诊断标准［4］。

1.5 实验室检测仪器与试剂

Stepone-PlusTM Real-Time PCR System（美国ABI公司），Anthos 2010酶标仪（奥地利Anthos仪器公司）。麻疹/风疹IgM抗体检测试剂盒由珠海海泰公司生产；麻疹病毒RNA提取试剂盒为QIAGEN公司生产，麻疹病毒核酸检测试剂盒为江苏硕世生物科技有限公司生产。

1.6 统计学方法

样本率的χ2分析采用PASW Statistics 18处理，双侧检测水准α=0.05，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 麻疹、风疹实验室确认比例

在全市400例MLI中，麻疹236例，风疹16例，排除病例148例。在麻疹病例中，经实验室确诊的病例的百分构成比为70.76%（167/236）；在风疹病例中，经实验室确诊的病例的百分构成比为81.25%（13/16）。

2.2 全市及县区标本采集

全市血清标本、病毒学标本采集率分别为86.25%、8.75%；各县区血清标本采集率在72.22%～100.00%之间，差异有统计学意义（χ2=30.89，v=8，P＜0.05）；各县区病毒学标本采集率在0.00%～23.08%之间，差异有统计学意义（χ2=30.89，v=8，P＜0.05）。经核查，328例MLI采集到合格的血清标本，29例MLI采集到合格的病毒学标本。见表1。

表1 菏泽市各县区标本采集情况统计

2.3 麻疹/风疹IgM检测

对328例血清标本开展麻疹IgM检测，阳性率为50.61%（166/328）；对326例血清标本检测风疹IgM，阳性率为4.60%（15/326）；不同县区麻疹IgM阳性率在34.41%～92.96%之间（χ2=69.31，v=8，P＜0.05），不同县区风疹IgM阳性率在0.00%～33.33%之间（χ2= 54.96，v=8，P＜0.05），差异均有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 菏泽市2015年各县区血清学检测结果统计

2.4 麻疹/风疹病毒核酸检测与病毒分离

共有5个县区采集到29例合格病毒学标本，分别为曹县、单县各1例，巨野县17例，鄄城县7例，东明县3例，经检测，麻疹核酸阳性19例，阳性率为65.52%（19/29），其中曹县标本中未检出，单县阳性1例，巨野县阳性8例，鄄城县阳性7例，东明县阳性3例；省级麻疹实验室在阳性标本中，只分到麻疹病毒1株，证实为H1a型。风疹核酸阳性0例，阳性率为0（0/19），无风疹病毒分离结果。

2.5 不同月份麻疹/风疹IgM检测情况

不同月份麻疹IgM阳性率在0.00%～75.00%之间（χ2=16.43，v=11，P=0.126），阳性率高峰在4月份；不同月份风疹IgM率在0.00%～50.00%之间（χ2=98.12，v=11，P=0.000），阳性检出率分布于2～6月份，差异具有统计学意义（P＜0.05），见表3。

表3 菏泽市2015年不同月份麻疹/风疹IgM检测分布

2.6 不同年龄组麻疹IgM检测情况

MLI病例年龄在5个月～45岁。不同年龄组麻疹IgM阳性率在13.79%～86.96%，差异有统计学意义（χ2=27.63，v=1，P=0.000）。低年龄组如＜8月龄、8月龄、9～11月龄、1岁的阳性数构成比较多，而20岁以上成人组的阳性数构成比相对也较高。见表4。

表4 不同年龄组麻疹IgM检测结果

2.7 全市及不同县区排除病例报告发病率

根据麻疹/风疹IgM抗体、病毒核酸检测结果，在400例MLI中，共排除148例，报告发病率为1.79/10万；各县区排除病例在3～60例之间，报告发病率在0.28/ 10万～8.26/10万之间，见表5。

表5 菏泽市2015年排除病例报告发病率统计

3 讨论

3.1 全球2010～2015年血清、病毒序列检测及排除病例概况［5-7］

在2000年，为了对麻疹监测提供高质量的实验室支持，WHO建立了“全球麻疹风疹实验室网络（Global Measles and Rubella Laboratory Network，GMRLN）”，其在证实消除麻疹的过程中发挥着关键作用。WHO提出的实验室操作指标有四个方面：在国家层面上，排除的非麻疹/非风疹的病例发病率；为开展实验室证实而采集血清标本的疑似病例的百分构成比；经实验室证实的病毒传播链条的百分构成比，要求有充足的病毒学标本（即：充足的病毒学监测）；血清检测结果在4 d内报告的百分构成比。根据每月度报告的基于病例监测的数据，在2010～2015年度，全球血清标本检测数量稳定上升，共有742 187个标本开展了麻疹IgM检测，并报告了27 832个病毒序列。在2015年，有160个国家报告了基于病例监测的数据，采集了160 644个血清标本，其中有146 625个标本开展了麻疹IgM检测，阳性率为31%，有112 461个标本开展了风疹IgM检测，阳性率为12%。

为支持病毒学监测，WHO建立了标准方案，用以监测全球基因型分布和跟踪麻疹病毒、风疹病毒传播。在2010～2015年度，共有27 023个麻疹病毒序列提交到WHO麻疹核酸数据库。在目前已知麻疹病毒共有24个基因型中，全球范围内2005～2014年间仅检测到13个基因型，而在2010～2015年度，检测到8个基因型，分别是B3、D3、D4、D6、D8、D9、G3、H1，最近5年发生传播的麻疹病毒的基因型数量进一步减少。

从总体上看，全球大部分实验室的基于病例证实的标本采集运行指标、实验室结果报告的及时性满足要求，但在2015年，排除病例的报告发病率存在不足，有62个（32%）国家没有能力报告排除病例的发病率，有46个（24%）国家报告的排除病例的发病率＜1/10万，有20个（10%）国家报告的排除病例的发病率在1/10万～2/10万之间，有67个（34%）国家报告的排除病例的发病率＞2/10万。

3.2 国内麻疹血清学、病毒学检测现状与菏泽市实验室检测评价

国内MLI标本类型主要以血清标本为主，病毒学标本相对较少。在2011～2013年，我国每年报告的MLI数量约在3.46万人～7.84万人，血清标本采集率达到90.37%～97.30%，在麻疹病毒分子水平监测方面，H1a基因亚型所占的比例在98.92%～97.28%，其他类型极少［8-11］。国内不同地区报告的麻疹和风疹IgM抗体阳性率差别较大，刘刚等［12］报道2013年4～7月深圳市检测血清标本210份，麻疹IgM抗体阳性率为73.33%，检测咽拭子标本217份，麻疹病毒核酸阳性率为82.03%；单竹周等［13］报道2011～2014年黔东南州检测血清标本705例，麻疹IgM阳性率为1.99%，风疹IgM抗体阳性率为4.68%，各年龄组分布差异；吕燕等［14］报道2013年济南市检测血清样本817例，麻疹IgM阳性率为54.71%，在21份麻疹核酸阳性病毒学检出本土流行野毒株H1a基因型。樊亚丽［15］报道2011～2013年驻马店市检测血清标本680份，麻疹IgM抗体阳性率为4.12%，风疹IgM阳性率为2.06%。张伟宏等［16］报道2014年银川市麻疹IgM抗体阳性率为25.1%（53/211），麻疹病毒核酸阳性率为30.3%（64/ 211），并分离到11株麻疹病毒，为H1a。与上述地区相比较，菏泽市2015年血清标本麻疹IgM阳性阳性率为50.61%，风疹IgM阳性率为4.60%，病毒学标本有19例麻疹核酸阳性，并检出麻疹病毒H1a基因型，表明，全市麻疹流行强度要高于风疹流行强度，这一特点也与全球2010～2015年间麻疹IgM阳性率高于风疹IgM阳性率相一致［7］。

从不同月份的检测结果分析，菏泽市几乎全年都有麻疹病例出现，但5～9月份为发病高峰期，病例数急剧增加，10月份发病逐渐下降；在地域分布方面，麻疹病毒在九县区都存在传播，其中巨野县检出最高。这种检测结果差异可能与当地麻疹、风疹流行强度、标本质量等因素有关，反映了不同县区的麻疹控制工作的不平衡性。

在全市排除病例的报告发病率方面，2015年报告发病率为1.79/10万，仍不足2/10万，不同县区的报告发病率在0.28/10万～8.26/10万，提示，全市麻疹监测的质量仍有待提高，各县区的监测能力不平衡，应予以改善。

3.3 菏泽市麻疹控制工作的重点探讨

本调查研究表明，2015年菏泽市全年麻疹继续发生，但各县区发病率各不相同，低年龄组和成人均有发病人群。根据麻疹控制工作现状，加强麻疹疫苗预防接种工作仍是重点，要继续落实国家有关的消除麻疹的技术策略，在借鉴外地经验的基础上，通过建立完善预约、提醒机制，增加服务频次等方式方法，重点提高麻疹疫苗及时接种率，加强免疫规划政策的宣传力度，提高社会公众参与免疫规划的积极性、主动性［17］。

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［3］World Health Organization.Framework for verifying elimination ofmeaslesand rubella［J］.Wkly EpidemiolRec，2013，88（9）：89-100.

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［9］王慧玲，毛乃颖，张燕，等.中国2010年麻疹/风疹实验室网络运转情况分析［J］.中国疫苗和免疫，2013，19（3）：217-221.

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［11］马超，苏琪茹，郝利新，等.中国2012～2013年麻疹流行病学特征与消除麻疹进展［J］.中国疫苗和免疫，2014，20（3）：193-199.

［12］刘刚，林少杰，庄春燕.深圳市麻疹病毒学检测结果分析［J］.医学动物防制，2015，31（12）：1319-1320.

［13］单竹周，潘雪雪，王芳，等.黔东南州2011年-2014年麻疹、风疹疑似病例IgM抗体检测结果分析［J］.中国卫生检验杂志，2015，25（23）：4109-4111.

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［15］樊亚丽.2011年-2013年驻马店市麻疹、风疹疑似患者IgM抗体检测结果分析［J］.中国卫生检验杂志，2015，25（9）：1391-1393.

［16］张伟宏，晋博烜，谭玉臻，等.2014年银川市麻疹监测病例的检测与分析［J］.现代预防医学，2016，43（5）：931-933.

［17］石晓娟，周莉薇，张颖，等.宁夏麻疹疫苗及时接种率分析［J］.现代预防医学，2015，42（15）：2717-2719.

Analysis on the serological and viral detection of measles-like illnesses of Heze City in 2015

HE Xuying MA Jingcang
Department of Enlarged Program on Immunization，Heze Center for Disease Control and Prevention in Shandong Province，Heze 274010，China

Objective To analyze the characteristics of laboratory testing ofmeasles-like illnesses，to improve the ability in dealingwithmeasles epidemic，and to provide technical support for the elimination ofmeasles.M ethods The MLI serological and virological specimenswere tested respectively formeasles IgM antibody through ELISA method，and for measles virus nucleic acid through real-time fluorescence RT-PCRmethod，nucleic acid detection of positive samples for virus isolation.Results 400 cases ofMLIwere reported in 2015.With the collecting rates of blood serum specimens and pathogen specimen of the MLIwas 86.25%and 8.75%，measles IgM positive rate in detection of serum specimens was 50.61%（166/328），and rubella IgM positive rate was 4.60%（15/326）.Themeasles IgM positive rates in different counties were between 34.44%and 92.96%，the rubella IgM positive rates in different counties between 0.00%and 33.33%.In the pathogenic samples，themeasles virus nucleic acid detection rate was 65.52%，1 strain ofmeasles virus was isolated，H1a conformed；There weremeasles reported in all counties and districts.Themeasles IgM positive rates in differentmonthswere between 0.00%and 75.00%with the peak of positive rate in April.Conclusion To control the prevalence ofmeasles virus，we still need to continue to implement the technicalmeasures to improve the vaccination rate ofmeasles vaccine.

Measles；Serum；Virus；Elimination；Gene

R511；R181.3

B

1673-9701（2016）18-0116-05

2016-04-12）

▲通讯作者