闻颖，邓宝成，刘沛（中国医科大学附属第一医院传染科，辽宁沈阳110001）



CCR5-D32杂合性对HIV-1感染者高效抗逆转录病毒治疗病毒学反应与免疫学反应影响的meta分析

闻颖，邓宝成，刘沛
（中国医科大学附属第一医院传染科，辽宁沈阳110001）

摘要：目的评价趋化因子受体5-D32（CCR5-D32）杂合性对HIV-1感染者高效抗逆转录病毒治疗病毒学反应与免疫学反应的影响。方法在PubMed，Web of Science和China Biology Medicine数据库检索，文献收索至2015年10月1日。结果按照入选标准，有11篇文献入选病毒学反应分析，4篇文献入选免疫学反应分析。CCR5-D32杂合性人群病毒学反应较高免疫学反应也较高病毒学反应亚组分析，在至少1年的观察期以及具有稍高的HIV RNA检测门槛的研究中，CCR5-D32杂合性与较高的病毒学反应具有相关性。由于文献少，免疫学反应分析中无法进行亚组分析。结论CCR5-D32杂合性人群病毒学反应较高。其与免疫学反应的相关性由于文献偏少仍需进一步证实。

关键词：CCR5-D32杂合性；高效抗逆转录病毒治疗；病毒学反应；免疫学反应；meta分析

从1996年高效抗逆转录病毒治疗（highly active antiretroviral therapy，HAART）的应用，人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）感染患者的HIV病毒复制得到控制，带来了免疫学重建以及临床预后的改善[1]。然而，在部分患者中，HAART治疗的有效性受到多种因素的影响，如病毒变异、患者依从性、HAART治疗方案、HIV疾病分期等。然而，宿主因素对HAART的疗效也发挥重要作用。趋化因子受体5（C-C chemokine receptor 5，CCR5）是HIV进入CD4+T靶细胞的关键表面受体[2]。全世界普遍流行的HIV-1亚型C（C-HIV），即为CCR5嗜性。趋化因子受体5-D32（CCR5-D32），是CCR5等位基因32个碱基缺失，其可编码功能缺失的CCR5。CCR5-D32纯合子（CCR5 D32/D32）的个体是非常稀少的（白人中大约占1%），该类人群对HIV感染具有天然抵抗力[3-4]。此外，CCR5-D32杂合子（CCR5 wt/D32）的个体，CD4+T靶细胞的CCR5表达也是减少的，导致该类人群对CCR5嗜性的HIV感染易感性大大降低[5]。在HIV感染疾病的自然进程中，CCR5 wt/D32人群较CCR5野生型（CCR5 wt/wt）人群进展缓慢，这可能与CCR5 wt/D32人群HIV病毒载量较低和CD4+T细胞计数较高有关[6-7]。在HAART药物种类有限的众多地区，明确CCR5-D32杂合性对HIV-1感染者HAART病毒学反应与免疫学反应的影响十分重要。然而迄今为止的这方面研究尚无定论，一些研究认为两者有相关性[8-15]，另一些研究却否定该种联系[16-18]，主要是这些研究采用的入选标准不同。不同的HAART药物方案、评估时间点、初治或复治的背景、HIVRNA的检测门槛都可能对结果产生影响。因此，应用meta分析通过增加样本量、减少偏倚来对该结果进行分析，以明确CCR5-D32杂合性是否对HIV-1感染者HAART病毒学反应与免疫学反应产生影响，并对上述的影响因素进行分析，以指导临床更好的评价HIV患者HAART后的疗效。

1　资料与方法

1.1检索策略

计算机检索PubMed，Web of Science and China Biology Medicine（CBM）数据库，收索从建库至2015年10月1日文献；英文检索词：（“CCR5”或“chemokine receptor 5”）和（“HIV”或“Human Immunodeficiency Virus”或“AIDS”）和（“antiretroviral”或“HAART”）；中文检索词：趋化因子受体5和人类免疫缺陷病毒或艾滋病和抗病毒治疗。

1.2纳入标准与排除标准

纳入标准：①HIV病人使用HAART治疗；②治疗方案是HAART，而非单药治疗；③研究CCR5-D32的杂合性；④研究类型为：队列研究、病例对照研究或横断面研究，内容涉及CCR5-D32异质性对HAART病毒学反应与免疫学反应的影响。排除标准：①与先前文章类似；②数据不全；③缺乏对照；④meta分析、综述或评论文章。

1.3文献提取

由闻颖，邓宝成，刘沛3位作者独立提取文献数据，并共同检查汇总。从11篇文献中提取以下数据：第一作者、出版年限、种族、国家、样本大小、CCR5-D32测序方法、HIVRNA检测门槛、评估时间点、是否初治、HAART方案。对HAART启动时的CD4+T计数与HIVRNA也要进行评估。同时采用（Sacks Quality Assessment Checklist，SQAC）量表对纳入文献进行质量评价（0～50分）。

1.4统计学方法

采用STATA 11.0统计学软件（StataCorp，College Station，TX）进行数据分析，应用95%可信区间的优势比（odds ratios，ORs）评估CCR5-D32杂合性对HAART病毒学反应与免疫学反应的影响。针对HIVRNA检测门槛、评估时间点、是否初治、HAART方案进一步进行亚组分析。P<0.05为差异有统计学意义。存在异质性的资料，应用随机效应模型，否则应用固定效应模型分析。应用Egger’s和Begger’s检验明确有否发表偏倚。同时进行敏感性分析。

2　结果

2.1检索流程与纳入文献特征

首先，应用上述关键词收索到1 139篇文献；然后，根据标题与关键词，1 083篇文献被剔除；剩余的56篇文献经详阅摘要与全文后，45篇文献被剔除；最后，11篇文献入组CCR5-D32杂合性对HAART病毒学反应影响[8-10，11-17]，文献筛选流程图（见图1），且其中仅4篇文献入组CCR5-D32杂合性对HAART免疫学反应影响[9-10、12-13]。出版年限从1998年到2010年。所有文献CCR5基因分型的DNA样本均来自患者的外周血。CCR5基因分型方法为PCR限制性片段长度多态性分析、DNA测序、聚丙烯酰胺。

图1　文献筛选流程图

凝胶分析和琼脂糖凝胶分析。共检测到CCR5 的3种基因分型：CCR5 wt/wt、CCR5 wt/D32、CCR5 D32/D32。其中2例CCR5 D32/D32的患者未纳入meta分析中[10，17]。应用哈代-温伯格平衡定律（The Hardy-Weinberg equilibrium，HWE）检验基因型的分布，未发现偏倚（P >0.05）。样本大小从107例到1 174例，主要为高加索人群。入选文献特征，见附表。在CCR5 wt/wt与CCR5 wt/D32两组患者中，比较HAART启动时的CD4+T计数及HIVRNA水平，有9篇文献的HAART启动时的CD4+T计数及HIVRNA水平无差异；而在2篇文献中[8-9]，CCR5 wt/ D32患者有较低的HIVRNA水平与较高的CD4+T计数。有10篇文献HAART启动时的CD4+T计数小于350 cells/μl，仅1篇文献HAART启动时的CD4+T计数大于350 cells/μl[15]。

附表　纳入研究的基本特征

2.2CCR5-D32杂合性与HAART病毒学反应的相关性与亚组分析

在纳入的11篇文献中，病毒学反应定义为，低于检测门槛。由于文献的异质性明显（P<0.05），应用随机效应模型。结果表明，CCR5 wt/D32人群对HAART的病毒学反应较高（1.35，P=0.000），见图2。针对HIVRNA检测门槛进行的亚组分析表明，在HIVRNA检测门槛为400 copies/ml的8篇文献中病毒学反应较高（95%CI=1.15～1.38，P=0.000），而采用更低的检测门槛的3篇文献中缺乏该联系（1.51，P=0.076），见图3A。针对评估时间点进行的亚组分析表明，在至少进行1年评估的9篇文献中病毒学反应较高（0.000），而在仅观察6个月的2篇文献中缺乏这种联系见图3B。此外，进一步亚组分析表明，病毒学反应与初治或经治1.26，95%CI=1.14～1.40，P=0.000）无关；与HAART方案（PI方案或各种方案）也无关1.07~1.36，P=0.002；P= 0.000）。

2.3CCR5-D32杂合性与HAART免疫学反应的相关性

在纳入CCR5-D32杂合性对HAART免疫学反应影响的4篇文献中，所采用的免疫学反应定义是不同，包括：CD4+T计数增加了50 cells/μl，CD4+T计数增加100 cells/μl，CD4+T计数增加到200 cells/μl以上，CD4+T计数增加到200 cells/μl以上。该文献评估时间点也不同，见附表。由于文献的异质性不明显（P>0.05），故应用固定效应模型。结果表明，CCR5 wt/D32人群对HAART免疫学反应较高（见图4。由于文献少，免疫学反应无法进行亚组分析。

2.4发表偏倚评价与敏感度分析

Begger’s漏斗图形状对称，见图5；Egger’s线性回归结果表明，无论是针对病毒学反应（t =1.7，P= 0.123），还是针对免疫学反应的研究（t=-0.74，P= 0.537），均提示发表偏倚小。敏感度分析结果排除了单个文献对的统计学影响。

图2　CCR5-D32杂合性与HAART治疗病毒学反应的相关性

图3　A：CCR5-D32杂合性与HAART治疗病毒学反应相关性的HIVRNA检测门槛亚组分析；B：评估时间亚组分析

图4　CCR5-D32杂合性与HAART治疗免疫学反应的相关性

图5　A：CCR5-D32杂合性与HAART治疗病毒学反应的相关性发表偏倚评价；B：CCR5-D32杂合性对HAART治疗免疫学反应的相关性发表偏倚评价

3　讨论

本研究发现：①CCR5 wt/D32人群对HAART的病毒学反应较高；该联系主要体现在至少1年的观察期以及具有稍高的HIV RNA检测门槛的研究中，且独立于HAART启动时的CD4+T计数及HIVRNA水平这两个已知的预测因素，既往未见此类报道；②CCR5-D32杂合性人群对HAART的免疫学反应较高。由于文献少，免疫学反应无法进行亚组分析；③在高加索人群中，10%～25%的患者为CCR5 wt/D32，这与已发表文献一致[19]。

到目前为止，尽管CCR5-D32杂合性对HIV-1感染者HAART病毒学反应与免疫学反应的影响尚无定论，尚缺乏这方面相关的meta分析文章，但重要的是没有文献提出CCR5 wt/D32的劣效性。Kasten等[13]认为，在基线HIVRNA、CD4+T计数没有统计学差异的前提下，CCR5 wt/D32杂合性人群病毒学反应与免疫学反应均较高。而Brumme等认为，单变量分析表明CCR5 wt/D32杂合性人群病毒学反应较高，但调整基线因素如依从性等的多元回归分析差异无统计学意义[8]。本文研究结果，即CCR5 wt/ D32人群对HAART病毒学反应较高，可能与NSI/R5转换SI/X4的过程延缓以及细胞表面CCR5与嗜淋巴细胞受体4[chemokine（C-X-C motif）receptor 4，CXCR4]表达同时减少有关[20]。CCR5 wt/D32人群对HAART的病毒学反应较高，该联系一方面体现在至少1年的观察期，揭示了CCR5 wt/D32这一宿主因素有利于HAART后的持久病毒学应答。另一方面体现在稍高的HIV RNA检测门槛，揭示CCR5 wt/D32这一宿主因素有利于HAART后HIV储存库衰减缓慢患者的病毒学抑制[21]。新近研究表明，CCR5 wt/D32人群由于HIVRNA转录受到抑制，HIV储存库复制水平较低[22]。需要指出：①在本研究中，病毒学反应与初治或经治无关，这与先前文献不一致[23]；该文献指出经治患者SI/X4增强，可能降低CCR5 wt/D32这一宿主因素的有利作用；②在本研究中，病毒学反应与HAART方案（PI方案或各种方案）无关，与先前文献不一致[24]，该文献指出PI方案联系着更高的病毒学应答。

虽然样本量偏小及回顾性的meta分析可能使本研究存在一定限制，但本研究却首次针对CCR5-D32杂合性对HIV-1感染者HAART病毒学反应与免疫学反应影响进行meta分析，且根据纳入标准，纳入文献的质量得到了保证。数据提取、分析的准确性也得到了保证。敏感性分析与出版偏倚评价保证了统计结果的可靠性。

综上所述，CCR5-D32这一宿主因素是HAART后病毒学应答的有利预测因子。CCR5-D32这一宿主因素与HAART后免疫学应答也有一定联系，但需更多文献加以证实。

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（张蕾编辑）

Effects of CCR5-D32 heterozygosity on virological and immunological responses to highly-active antiretroviral therapy in HIV-1-infected patients:a meta-analysis

Ying Wen,Bao-cheng Deng,Pei Liu
(Department of Infectious Diseases,the First Affiliated Hospital,China Medical University,Shenyang,Liaoning 110001,China)

Abstract:Objective To evaluate the effect of C-C chemokine receptor 5-D32 (CCR5-D32) heterozygosity of HIV-1-infected patients on the virological and immunological responses to highly-active antiretroviral therapy (HAART).Methods A literature search on the articles published before October 1,2015 was conducted in the PubMed,Web of Science and China Biology Medicine databases.Results Eleven studies on virological response and only four studies on immunological response were eligible for inclusion.Populations with CCR5-D32 heterozygosity had stronger virologicaland immunological1.04-1.31；P = 0.009) responses to HAART.There was a significant association between CCR5-D32 heterozygosity and stronger virological response in studies that involved at least one year of observation and a high threshold of detection for HIV RNA.Due to an insufficient number of eligible studies,further subgroup analyses of immunological responses could not be performed.Conclusions Stronger virological response has been found in the populations with CCR5 -D32 heterozygosity.The association of CCR5 -D32 heterozygosity with immunological response still needs further confirmation.

Keywords:CCR5-D32 heterozygosity; highly-active antiretroviral therapy; virological response; immunological response; meta-analysis

[通信作者]闻颖，E-mail：wenying666466@163.com；Tel：15840210638

收稿日期：2015-11-17

文章编号：1005-8982（2016）06-0069-06

DOI:10.3969/j.issn.1005-8982.2016.06.015

中图分类号：R512.91

文献标识码：B