张立伟　刘芳芳　于利　王爱梅



·实验研究·

顺铂对离体培养小鼠耳蜗毛细胞钙蛋白酶表达的影响*

张立伟1刘芳芳1于利1王爱梅1

【摘要】目的观察顺铂对离体培养小鼠耳蜗毛细胞钙蛋白酶(calpain)表达的影响，探讨顺铂致耳蜗毛细胞凋亡的机制。方法取出生后3 d的昆明小鼠300只(600耳)，分离出耳蜗基底膜600条，体外培养24 h后，随机分为对照组和4、8、16 μg/ml顺铂组，每组150条；对照组加入2ml新鲜培养基，顺铂组分别加入2 ml含不同浓度顺铂(4、8、16 μg/ml)的新鲜培养基，再继续培养24 h后，应用Hoechst 33258荧光染色观察耳蜗毛细胞凋亡情况，并应用免疫荧光染色和免疫印迹(Western blot)技术检测calpain 1(μ-calpain)和calpain 2(m-calpain)在耳蜗毛细胞的表达。结果4、8、16 μg/ml顺铂组耳蜗毛细胞凋亡率分别为15.63%±0.20%、38.40%±2.64%和64.24%±0.05%，均高于对照组(5.55%±0.12%)，呈现明显的量效关系；不同浓度顺铂组μ-calpain和m-calpain的表达均较对照组明显增强(P<0.01)，且m-calpain的表达随顺铂浓度的增高而明显增强(P<0.01)。结论顺铂可通过calpain通路诱导小鼠耳蜗毛细胞凋亡，从而发挥毒性效应。

【关键词】顺铂；耳蜗；毛细胞；钙蛋白酶；小鼠

钙蛋白酶(calpain)为一种钙离子依赖性的半胱氨酸蛋白酶，可参与细胞骨架重构、信号传导、细胞凋亡与坏死等多种生理病理过程[1]。生理状态下，细胞内的calpain主要以无活性的酶原形式存在，仅少部分被激活，以维持机体的正常活动；在病理状态下，钙离子浓度的异常增高可持续激活calpain，进而降解细胞骨架、膜蛋白以及各种激酶和转录因子，最终诱导细胞凋亡和坏死。文献报道，在体情况下，顺铂导致成年BALB/c小鼠听功能下降的同时伴耳蜗calpain的高表达，提示calpain介导了顺铂对成年BALB/c小鼠的耳毒性损伤[2]。在离体情况下，顺铂是否也能诱导耳蜗calpain的高表达目前为止尚不明确。……