王庆华，王生存，李　斌，刘　春，吴刘成，王　旭，彭晓清 ，邵义祥*

(1.南通大学实验动物中心，江苏南通 226001； 2.南通大学附属医院儿科，江苏南通 226001)



蛋白磷酸酶2A的Cβ亚基在胚胎成纤维细胞凋亡过程中的作用

王庆华1，王生存1，李斌2，刘春1，吴刘成1，王旭1，彭晓清1，邵义祥1*

(1.南通大学实验动物中心，江苏南通 226001； 2.南通大学附属医院儿科，江苏南通 226001)

摘要：为探究蛋白磷酸酶2A的Cβ亚基在胚胎成纤维细胞(MEFs)凋亡过程中的作用，用Cβ+/-的杂合子雄鼠与雌鼠1∶2配对，取胚胎期12.5 d(E12.5)的胚胎制备MEFs，用PCR、RT-PCR和Western blot方法进行基因型鉴定。同时对P3代MEFs利用流式分选技术检测其细胞凋亡和细胞周期的变化，并采用Western blot检测抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。结果采用胰酶消化方法成功获得了MEFs，DNA、RNA和蛋白水平鉴定显示获得了3对3的野生型和Cβ基因敲除MEFs。流式分选发现Cβ基因敲除MEFs和野生型之间细胞分裂期前期(M1期)细胞分别为53.95%±2.81和46.94%±4.17，细胞分裂期后期(M2期)细胞分别为21.14%±2.53和29.83%±3.25。但Bcl-2的蛋白表达量和mRNA表达量没有显著差异。 结果表明，虽然蛋白磷酸酶2A的Cβ亚基的缺失并不会导致小鼠胚胎死亡，但Cβ亚基的缺失会轻微影响胚胎成纤维细胞(MEFs)的细胞周期。

关键词：胚胎成纤维细胞；细胞凋亡；细胞周期

细胞凋亡又称程序性细胞死亡，是由细胞所处局部环境的生理性或病理性刺激引起的一种受基因调控的有序的细胞非炎症性死亡，是基因调控下的一种主动性死亡过程，在调节细胞分裂及组织器官发育上起着重要的作用。Bcl-2家族是调控细胞凋亡关键的因子，其抑制凋亡是通过抑制细胞膜上脂质过氧化物的形成[1]，控制内质网上钙离子的释放[2]，降低线粒体膜通透性并增加其摄取钙离子[3]，抑制细胞色素C释放或直接抑制促凋亡因子[4]发挥作用的。……