王小特++曹怡

[摘要] 目的 探讨E3泛素连接酶（EDD）基因在SKOV3/DDP细胞顺铂耐药中的作用。 方法 采用RT-PCR和Western blot检测人卵巢癌SKOV3细胞和SKOV3/DDP细胞内EDD表达水平的差异。通过转染EDD-siRNA沉默EDD的表达后，噻唑蓝法检测顺铂对SKOV3/DDP细胞增殖的影响，Annexin V-FITC/PI双染法检测顺铂对细胞凋亡的影响；Western blotting检测髓样细胞白血病-1（Mcl-1）和细胞周期检测点激酶2（CHK2）蛋白表达水平。 结果 SKOV3细胞EDD的表达水平显著低于卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP（P < 0.05）。EDD-siRNA转染24 h后，EDD mRNA和蛋白表达水平均显著低于未转染组（P < 0.05）；SKOV3/DDP细胞IC50值显著降低（P < 0.05），Mcl-1蛋白的表达受到抑制（P < 0.05），而CHK2无明显变化（P > 0.05）。 结论 EDD-siRNA能沉默EDD基因，降低Mcl-1蛋白的表达水平，增强顺铂对SKOV3/DDP细胞的促凋亡作用，降低SKOV3/DDP细胞对顺铂的耐药性，有效恢复SKOV3/DDP细胞顺铂敏感性。

[关键词] EDD；卵巢癌；顺铂耐药；细胞凋亡

[中图分类号] R737.31 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2015）09（b）-0020-05

卵巢癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，其最主要的治疗策略是肿瘤细胞减灭术联合铂类药物为基础的化疗法，然而铂类耐药的形成是目前肿瘤治疗过程中的主要障碍之一，因此，研究卵巢癌细胞的耐药机制对卵巢癌提供新的治疗方法具有十分重要的作用。E3泛素连接酶（E3 isolated by differential display，EDD）包括一个羟基末端的连接酶（HECT）泛素连接酶域，是果蝇肿瘤抑制因子hyd的人同源因子[1]，位于染色体8q22.3上，这个染色体区域通常与顺铂耐药具有一定的联系[2]。EDD在卵巢癌、乳腺癌和胃癌中均存在过表达的现象[3-6]，高表达的EDD蛋白可作用于钙整合素结合蛋白1和细胞周期检测点激酶2（checkpoint kinase 2，CHK2），上调DNA损伤通路相关基因的表达，增强DNA损伤修复能力，增加顺铂等化疗药物的耐药性[7-9]，DNA损伤通路的大部分基因与铂类等化疗药物敏感性降低之间有一定的联系[10]。……