石　禹，吉宏张，包小峰

(南通大学1.附属第三人民医院临床药学室、2．药学院，江苏南通　226006)



N末端Strep蛋白标签表达载体的构建和应用

石禹1，2，吉宏张2，包小峰2

(南通大学1.附属第三人民医院临床药学室、2．药学院，江苏南通226006)

中国图书分类号: R341; R345．57; R374; R394．2; R977. 6

摘要:目的构建携带N末端Strep( NS)蛋白标签的表达载体;在表达载体中构建衣原体RNA聚合酶亚基重组蛋白并表达。方法采用PCR的方法，通过引物引入NS蛋白标签和新的多克隆位点替代pET21c-DH质粒中原有的T7蛋白标签和多克隆位点，选择新引入的Not I酶切位点进行PCR产物的环化自连，转化DH-5α细菌后筛选阳性菌株，PCR法和基因测序法鉴定新构建的表达载体;在新构建表达载体的BamH I和Sal I位点之间分别插入衣原体RNA聚合酶核心酶的α、β、β'亚基，获得表达NS-α、NS-β、NS-β'融合蛋白的表达载体，转化表达菌株ArcticExpress，筛选阳性表达菌株，并用考马斯亮蓝染色、Western blot等法鉴定融合蛋白的表达情况。结果成功构建了携带NS蛋白标签的pET21c-NSMCS载体，并成功将其应用于衣原体RNA聚合酶核心酶亚基融合蛋白的构建及表达。结论获得稳定表达NS-α、NS-β、NS-β'融合蛋白的表达载体，为研究衣原体基因转录调控奠定了良好的基础。

关键词:Strep蛋白标签;表达载体;融合蛋白;克隆; RNA聚合酶;衣原体

包小峰( 1979－)，男，博士，教授，硕士生导师，研究方向:衣原体转录调控与抗衣原体化合物，通讯作者，E-mail: baoxi@ ntu．edu．cn

蛋白标签是指利用DNA体外重组技术与目标蛋白基因融合表达的一种多肽或蛋白，常用于目标蛋白的构建、表达、检测、示踪及纯化［1］。在重组蛋白研究过程中，通常使用亲和性标签(如His、GST、Strep)等。……