翟玉山,彭　磊,杨永庆,邓宇晴,程光远,郑艳茹,徐景升

(农业部福建甘蔗生物学与遗传育种重点实验室,福建农林大学,福建 福州　350002)



甘蔗条纹花叶病毒HC-Pro、P3N-PIPO、CP和VPg基因酵母双杂交诱饵表达载体的构建及自激活检测

翟玉山,彭磊,杨永庆,邓宇晴,程光远,郑艳茹,徐景升

(农业部福建甘蔗生物学与遗传育种重点实验室,福建农林大学,福建 福州350002)

摘要：为探索甘蔗条纹花叶病毒与甘蔗的互作机制,利用酵母双杂交技术筛选与SCSMV互作的甘蔗因子基因,利用PCR技术克隆了SCSMV的HC-Pro、P3N-PIPO、CP和VPg的编码区,构建到酵母双杂交诱饵载体pGBKT7上,获得了pGBKT7-HC-Pro、pGBKT7-P3N-PIPO、pGBKT7-CP 和pGBKT7-VPg4个诱饵载体。结果显示,将重组质粒转化酵母Y2HGold酵母菌株后,酵母菌株在SD/-Trp平板上生长良好,表明重组诱饵质粒表达产物对酵母细胞无毒性;在SD/-Trp/X-α-gal平板上长出白色菌落未变蓝,在SD/-Leu、SD/-Trp/-Ade、SD/-Trp/-His和SD/-Trp/X-α-gal/AbA平板上不能生长,表明重组诱饵质粒表达产物对MEL1、ADE2、HIS3和AUR1-C报告基因无自激活作用。构建的诱饵表达载体可以作为诱饵用于文库筛选,为探索SCSMV侵染机制和发病机理奠定了基础。

关键词：甘蔗条纹花叶病毒;HC-Pro;P3N-PIPO;CP;VPg;诱饵载体;酵母双杂交

甘蔗(SaccharumofficinarumL.)是我国和全世界主要的糖料作物和能源作物。甘蔗花叶病(Sugarcane mosaic disease,SMD)是严重危害甘蔗生产的病毒性病害之一,严重影响甘蔗的产量和品质。甘蔗感病后,病株叶片出现黄绿相间的斑纹、分蘖减少、生长缓慢、节间变短、品质下降,产量损失可达3%~50%[1-3]。SMD最早于1892年在爪哇被发现[4],在20世纪20年代,SMD几乎摧毁了阿根廷、巴西和美国的甘蔗产业[5-6]。甘蔗花叶病的病原主要……