吕兆勇,赵春梅,薛仁镐

(1.聊城市人民医院，山东 聊城　252000;2.青岛农业大学 生命科学学院,山东 青岛　266109)



葡萄逆境胁迫诱导启动子的克隆及表达分析

吕兆勇1,赵春梅2,薛仁镐2

(1.聊城市人民医院，山东 聊城252000;2.青岛农业大学 生命科学学院,山东 青岛266109)

摘要：为了研究葡萄抗逆基因(CAN70200.1)的表达特性,采用PCR技术从葡萄中克隆了CAN70200.1基因上游一段长度为1 354 bp的启动子片段,命名为PCAN。采用PlantCARE和PLACE启动子在线预测工具分析表明,PCAN启动子序列具有CAAT-box、TATA-box基本的顺式作用元件和一些参与非生物胁迫、光和植物激素应答相关的顺式作用元件。为验证启动子的表达特性,将PCAN启动子连接到pCAMBIA1391Z载体GUS基因的上游,构建成植物表达载体p1391Z-CAN,并通过农杆菌介导法转化烟草,经PCR鉴定,获得转基因植株。对转基因烟草植株进行逆境胁迫处理发现,在干旱处理120 min后,PCAN启动子活性达到最强;而4 ℃低温处理30~60 min时,PCAN启动子活性达到最强,表明PCAN启动子具有低温和干旱胁迫诱导表达特性。

关键词：葡萄;PCAN启动子;胁迫诱导表达;GUS检测

植物基因的表达调控主要发生在转录水平,由启动子和与之相互作用的转录因子共同完成,受到多种顺式作用元件和反式作用因子的相互协调作用。启动子是一段位于结构基因5′端上游区的DNA序列,能活化RNA聚合酶,使之与模板DNA准确地结合,并具有转录起始的特异性。启动子按照转录方式可以分为:组成型、组织特异型和诱导型启动子[1]。植物受到逆境(低温、高盐、干旱等)胁迫时会产生相应的应答反应,以降低或消除逆境胁迫给植物带来的危害。……