孔丽颖,李　翔,李才运,刘晓东,李　月

(新疆农业大学 农学院,农业生物技术重点实验室,新疆 乌鲁木齐　830052)



棉花GbCBF2基因的克隆、互补表达载体的构建及遗传转化

孔丽颖,李翔,李才运,刘晓东,李月

(新疆农业大学 农学院,农业生物技术重点实验室,新疆 乌鲁木齐830052)

摘要：为研究棉花CBF2基因在植物抗逆中的作用,构建了pCAMBIA1300-AtCBF2P-GbCBF2-AtCBF2T植物互补表达载体,并对拟南芥cbf2突变体进行遗传转化。以新海16 cDNA为材料,采用PCR的方法克隆4个棉花CBF2基因,同时克隆拟南芥CBF2基因启动子AtCBF2P和终止子AtCBF2T,并将这些基因与pBluescript SK载体连接,构建pBluescript SK-AtCBF2P-GbCBF2-AtCBF2T中间过渡载体,用SacⅠ和BamHⅠ双酶切中间载体,获得AtCBF2P-GbCBF2-AtCBF2T核心片段,将此片段插入到pCAMBIA1300表达载体中,构建pCAMBIA1300-AtCBF2P-GbCBF2-AtCBF2T植物互补表达载体。以拟南芥cbf2突变体为材料,采用农杆菌介导的方法进行遗传转化,获得转棉花CBF2基因群体。获得转基因株系后,将为筛选出棉花的CBF2抗冻负调控基因及棉花抗逆分子育种奠定基础。

关键词：棉花;CBF2基因;互补表达载体;遗传转化

棉花是我国重要的经济作物和纺织品工业原料,棉花生产对我国经济和农业的发展起到重要的作用。新疆由于独特的光热条件,已成为我国最主要的产棉区。然而由于新疆地域辽阔,区域气候变化剧烈,经常因春、秋季气温不稳定,导致棉花苗期和吐絮期遭遇低温冷害,严重影响棉花产量,使棉花减产20%~60%[1]。为避免低温冷害,北疆播种早中熟棉花品种,播种期会进行一定时间的推迟,打顶时间也会适当提前,然而产量就会受到限制。因此,若能培育出耐寒棉花品种,延长生长周期,可有效提高新疆棉花的单产和总产,这对于保障我国棉花这一战略物资的安全和促进新疆经济发展具有重要的战略意义。……