张雨超，郝瑞栋，徐建青

1.温州医科大学，温州 325014； 2.复旦大学附属公共卫生临床中心，上海 201508



·综述·

CRISPR/Cas9技术在感染性疾病中的应用

张雨超1,2，郝瑞栋2，徐建青1,2

1.温州医科大学，温州 325014； 2.复旦大学附属公共卫生临床中心，上海 201508

成簇的规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白9〔clustered regularly interspaced short palindromic repeat (CRISPR)/CRISPR-associated protein 9 (Cas9)，CRISPR/Cas9〕是一种新兴的基因编辑技术，与以前的三大基因编辑技术——归巢核酸内切酶、锌指核酸酶和转录激活因子样效应物核酸酶技术相比，其在靶向特异性、操作简便性、治疗彻底性、应用广泛性等方面具有更大的优势和发展潜力。艾滋病、乙型肝炎、疟疾等感染性疾病的治疗一直是医学上的重大难题，科学家正努力尝试利用CRISPR/Cas9技术解决这些医学难题。本文主要综述了CRISPR/Cas9技术在这些感染性疾病中应用的研究进展。

成簇的规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白9；共价闭合环状DNA；锌指核酸酶；转录激活因子样效应物核酸酶；单导向RNA

成簇的规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白9〔clustered regularly interspaced short palindromic repeat (CRISPR)/CRISPR-associated protein 9(Cas9)，CRISPR/Cas9〕系统是细菌和古细菌在长期进化过程中形成的一种免疫防御机制，用来抵御噬菌体等外源DNA的入侵[1]。它可诱导靶基因组位点发生DNA双链断裂(double-strand break，DSB)以促进基因组编辑。CRISPR 衍生RNA(CRISPR-derived RNA，crRNA)通过碱基配对与反式激活crRNA(trans-activating crRNA，tracrRNA)结合形成RNA双链，后者指导Cas9蛋白在crRNA引导序列的靶定位点切断DNA双链。在缺乏修复模板时，DSB通过非同源末端连接(non-homologous end joining，NHEJ)重新连接，导致插入/缺失(insertion-deletion，InDel)突变。

1　CRISPR/Cas的研究背景

大多数CRISPR/Cas系统存在一种最简单且具有单一效应的DNA核酸内切酶——Cas9，它通过两种小RNA(crRNA和tracrRNA)被引导至其病毒DNA靶位[1]。……