阳燕　杨英明,2　胡涛,2

1.口腔疾病研究国家重点实验室　华西口腔医院牙体牙髓病科（四川大学） 成都 610041；2.口腔疾病研究国家重点实验室　华西口腔医院预防科（四川大学） 成都 610041

原核微生物基因敲除策略的研究进展

阳燕1杨英明1,2胡涛1,2

1.口腔疾病研究国家重点实验室华西口腔医院牙体牙髓病科（四川大学） 成都 610041；2.口腔疾病研究国家重点实验室华西口腔医院预防科（四川大学） 成都 610041

基因敲除是一项20世纪80年代末发展起来的新型分子生物学技术，在微生物领域的机制和功能研究中，具有极其重要的意义。经过数十年的发展，基因敲除技术从最传统的同源重组策略发展出λRed重组系统、CreloxP重组系统等方法，近年又诞生了成簇的规律间隔的短回文重复序列/Cas9等基于核酸内切酶原理的高效打靶技术，将微生物基因功能研究推向新的高度和方向。本文就这些应用于原核微生物的基因敲除策略的原理、现状和前景等研究进展作一综述。

基因敲除；聚合酶链反应；连接诱变技术；λRed重组系统；Cre-loxP重组系统；成簇的规律间隔的短回文重复序列/Cas9技术

This study was supported by Special Prophase Project on National 973 Program（2012CB526707） and National Natural Science Foundation of China（81100746，81400507）.

［Abstract］Gene knockout is a new molecular technique that developed in 1980s which has plays crucial roles in the microbiology functional and basic research. Through the development of several decades，gene knockout technique has been evolved from traditional homogenous recombination to λRed recombination and Cre-loxP system. Recently，the clustered regulatory interspaced short palindromic repeat/Cas9 system has been thought to be a very promising methods for microbiology manipulation for its' convenience and effectiveness based on the activity of endonuclease. This review will focus on the gene deletion technique that has been applied in the microbiology research from the mechanism，application and prospect.

［Key words］gene knockout；polymerase chain reaction；ligation mutagenesis；λRed recombination；Cre-loxP recombination；clustered regularly interspaced short palindromic repeat/Cas9

基因敲除又称基因打靶，是一种通过一定途径使基因去除或失活的遗传工程技术，为定向改造细菌和真菌等微生物提供了重要的技术支撑，不仅克服了传统诱变方法的盲目性和偶然性，而且经改造的基因能进行稳定地复制遗传，是微生物遗传工程研究的重大飞跃。随着微生物基因组全序列的诠释和功能基因定位以及分子生物学技术的进步，以基因敲除对微生物进行基因功能的研究发展日益迅速。……