张　洁　周方舟　曹新冉　任宏生　楚玉峰　王爱红　董　波　赵　鹏

(山东大学附属省立医院营养科，山东　济南　250021)



原癌基因c-jun在毒胡萝卜素内酯诱导小鼠胚胎成纤维细胞凋亡中的作用

张洁周方舟1曹新冉1任宏生2楚玉峰2王爱红1董波1赵鹏1

(山东大学附属省立医院营养科，山东济南250021)

〔摘要〕目的探讨原癌基因c-jun在毒胡萝卜素内酯(TG)诱导的小鼠胚胎成纤维细胞凋亡中的作用及机制。方法应用TG处理野生型(c-jun+/+)，基因敲除型(c-jun-/-)和基因重组型(c-jun Re)小鼠胚胎成纤维细胞后观察细胞生存率；流式细胞术(FACS)和DNA染色进行细胞凋亡分析；蛋白免疫印迹技术分析蛋白c-jun、caspase-12及内质网应激反应分子伴侣Grp78、 Gadd153和α-tubulin的表达；共聚焦显微镜观察内质网染色及形态。结果不同浓度TG处理3组细胞4 h后观察细胞生存率，TG在50 nmol/L及100 nmol/L时3组细胞生存率出现差异，c-jun+/+与c-jun-/-组较 c-jun Re组生存率减低(P<0.05);TG未处理与处理均未影响c-jun蛋白的表达，c-jun-/-无c-jun蛋白表达，c-jun Re高表达c-jun蛋白；FACS与DNA染色结果显示，TG处理后c-jun-/-组较c-jun Re组DNA含量增高(P<0.05)，并在c-jun-/-组出现典型的凋亡细胞亚二倍体DNA；荧光显微镜下观察细胞DAPI染色，与c-jun Re组比较c-jun-/-组DNA染色弱且模糊紊乱；在c-jun+/+与 c-jun-/-组中12 h比24 h caspase-12蛋白表达低(P<0.05)，与c-jun+/+组比较，c-jun-/-组caspase-12蛋白表达明显增高(P<0.05)，而在c-jun Re组几乎无caspase-12蛋白表达；经TG处理后，内质网应激反应分子伴侣Grp78和Gadd153，c-jun Re组此两种标识物的表达明显低于其在c-jun-/-组中的表达，并发现了内质网构造在两种细胞中的不同样式，c-jun Re组相比c-jun-/-组内质网结构更加完整丰富宽广。结论TG可以引起小鼠成纤维细胞出现细胞凋亡。c-jun基因表达的不同改变了细胞凋亡的程度，这种改变是通过细胞对内质网应激反应的介导。c-jun基因的表达在TG诱导的小鼠成纤维细胞凋亡中起保护作用。

〔关键词〕c-jun基因；毒胡萝卜素内酯；内质网应激；细胞凋亡

1心内科2ICU

第一作者：张洁(1985-)，女，硕士，主治医师，主要从事心脏病的临床与基础研究。

c-jun是一种核内原癌基因，c-jun氨基末端激酶(JNK)的活化是通过c-jun氨基末端残基磷酸化实现的，一旦被激活，胞质中的JNK移位到细胞核中〔1〕。激活的JNK可进一步使核内c-jun等转录因子活性增强，主要以c-jun为底物并提高激活蛋白(AP)-1的转录活性。内质网应激是调节细胞生存和死亡的重要过程，内质网中的分子伴侣提供有利于蛋白质折叠的特殊环境。起主导作用的内质网伴侣结合蛋白/葡萄糖相关蛋白质78 kD蛋白(BiP/Grp78)在储存内质网Ca2+中起着重要……