高亚星，彭丽娟，蒋选利*

(1.贵州大学 农学院，贵州 贵阳 550025；2.贵州大学 烟草学院,贵州 贵阳 550025；3.贵州大学 贵州省烟草品质研究重点实验室,贵州 贵阳 550025)

8种药剂对烟草黑胫病菌室内毒力测定

高亚星1，彭丽娟2,3，蒋选利1*

(1.贵州大学 农学院，贵州 贵阳 550025；2.贵州大学 烟草学院,贵州 贵阳 550025；3.贵州大学 贵州省烟草品质研究重点实验室,贵州 贵阳 550025)

为筛选出防治烟草黑胫病菌效果较好的药剂，采用生长速率法对8种药剂进行了室内毒力测定。结果表明：化学药剂58%甲霜·锰锌(WP)、72%烯酰·丙森锌(WP)、80%代森锰锌(WP)和生物农药1%申嗪霉素(SC)对烟草黑胫病菌菌丝生长有较好的抑制效果。其中以1%申嗪霉素(SC)效果最好，其EC50为0.5276 μg/mL；58%甲霜·锰锌(WP)、80%代森锰锌(WP)和72%烯酰·丙森锌(WP)效果次之，EC50分别为2.6328 μg/mL、3.0775 μg/mL和5.8530 μg/mL，除50%氯溴异氰尿酸(SP)外，其余7种药剂均随使用剂量的增大抑制效果增强。

烟草黑胫病；1%申嗪霉素；EC50

烟草黑胫病(Tobacco Black Shank)是由烟草疫霉变种(P.nicotianaeBreda de Haan var.nicotianaeWaterhouse)引起的一种毁灭性土传真菌病害，极易与烟草青枯病混发[1]。该病1896年在印度爪哇首次被报道后迅速波及至世界各大烤烟产区，我国于1950年在黄淮地区首次发现该病害[2]，主要引起烤烟整株萎蔫死亡，其根、茎和叶等各个部位均可受害，危害大田较重，苗床期发病情况相对较轻[3]。胡吉凤等人[4]调查了贵州烟草黑胫病在威宁、开阳、天柱3个气候区的发生情况，结果显示发病率及危害程度呈逐渐加重。葛永怡等人[5]调查了毕节市烟草黑胫病发生情况，结果发现毕节市东部地区的黑胫病发生比较普遍，海拔较高的西部地区发病较轻。

目前，防治烟草黑胫病行之有效的方法主要有种植抗病品种、栽培技术管理及化学防治等方面，胡重怡等人[6]的研究表明贵州省现主栽品种主要有K326、云烟85、贵烟11、红花大金元，其中贵烟11抗烟草黑胫病，王雷[7]的研究表明K326抗性强，云烟85为中感品种，红花大金元为感病品种。利用化学药剂防治具有及时和高效等特点，尤其在病害大流行时期较为突出，是目前防治烟草黑胫病不可或缺的主要途径。

根据化学药剂的发展史在某种意义上能够看出烟草黑胫病药剂防治的历史[8]。最初针对烟草黑胫病使用硫酸铜(Cupricsulfate) 、王铜(Copper oxychloride)及波尔多液( Bordeaux mixture)等保护性铜制剂，到以甲霜灵为代表的具有内吸作用的杀菌剂，再到现在的兼内吸及保护作用的甲霜灵·锰锌杀菌剂，在烟草黑胫病的防治过程中起到了至关重要的作用，随着这些药剂的长时间大面积使用给生产上也带来了严重的抗药性问题[8-14]。生物药剂相对化学药剂而言成本高、见效慢，但是环境因素影响较小。为了提高烤烟产量与品质，筛选出高效、低毒低残留、低价位的药剂，本文选用8种药剂对烟草黑胫病菌进行了室内毒力测定，旨在筛选出对该病抑菌效果较好的药剂，以期控制烟草黑胫病的发生与流行。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 供试标本

K326典型发病菌株。

1.1.2 供试培养基

燕麦培养基[15]:用于烟草黑胫病菌的分离纯化及保存；10%V8蔬菜汁培养基[15]:用于室内毒力测定。

1.1.3 供试药剂

本文供试药剂名称、剂型、生产厂家及浓度梯度见表1。

1.2 方法

1.2.1 病原菌分离纯化

对样品进行拍照后摘去叶片，用自来水冲洗干净后用无菌牛皮纸袋包裹，并进行编号，记录采集地点及日期。将样品病株按郑小波[15]常规分离方法分离，将茎秆剖开，从碟片状的病健交界处取3 mm×3 mm的髓部组织块接种于燕麦培养基上，在28℃恒温培养箱中黑暗培养4 d后，根据菌落形态、颜色及菌丝形态初步判断有隔无隔，无隔菌丝进行镜检后纯化，将纯化的病原菌接种于装有燕麦培养基的斜面试管中室温保存。

1.2.2 8种药剂对烟草黑胫病菌的室内毒力测定

采用菌丝生长速率法测定[16]。在实验室无菌条件下用无菌水菌将各药剂稀释成所需要的5个浓度梯度，各药剂分别与V8培养基按1∶9混合均匀后倒入灭菌的培养皿中，每个浓度梯度重复3次，制成系列浓度梯度的含药培养基，无菌水为对照，冷却凝固。将培养7 d的烟草黑胫病病菌用直径7 mm的打孔器沿菌落同一圆周打取菌饼，将菌饼接种到不同浓度含药平板中央，菌丝面朝下，每平板接种1块，每种浓度1个处理，每个处理3次重复，放置在28℃恒温培养箱中黑暗培养7 d。用十字交叉法测量各供试药剂不同浓度处理的菌落生长直径，取平均值后计算抑制率。

表1 供试药剂及浓度梯度Tab.1 The tested fungicides and concentration gradie

1.2.3 数据处理分析

将生长抑制率转换成抑制机率值，采用农药室内生物测定数据处理系统软件[17]处理计算毒力回归方程Y=A+B*X，抑制中浓度(EC50)及相关系数R。Y代表抑制率转换的机率值，A代表斜率，斜率越大说明在一定时期内越容易产生抗药性，B代表一个常数，X代表药剂浓度对数。

2 结果与分析

2.1 不同浓度药剂对烟草黑胫病菌丝的抑菌作用

由表2可知，除T7外的7种药剂在对应的浓度梯度范围内均对烟草黑胫病有较好的抑菌作用。7种药剂随剂量增加抑制率明显上升，菌落直径逐渐减小，药剂质量与抑制率呈正相关。T7随浓度增加菌落直径逐渐增大，浓度与抑制作用之间成负相关关系。T2、T3、T4和T6随浓度增加抑制率均达到90%以上，T1、T5和T8效果均在20%～80%之间，其中T8在浓度为0.3125 μg/mL～0.625 μg/mL之间效果变化不大。T7浓度在250 μg/mL～500 μg/mL之间菌落直径差异不大，浓度在200 μg/mL时菌落直径超过对照菌落直径，停止抑菌作用，不仅没有抑制作用反而有促进菌丝生长作用。

2.2 8种对烟草黑胫病菌室内毒力测定

由表3可知，供试的8种药剂对烟草黑胫病的毒力回归方程分别相关系数r分别为0.9906、0.9553、0.9368、0.9983、0.9853、0.9985、0.5336和0.9571，可见除T7外线性关系均表现良好,各药剂的毒力回归方程的相关系数均在0.9以上,说明回归方程拟合程度较高。其中T8的抑制中浓度(EC50)最低，为0.5276 μg/mL。其次是T1，EC50值为2.6328 μg/mL，T3 EC50值为 3.0775 μg/mL，T2 EC50值为5.8530 μg/mL。结果表明：T1、T2、T3和T8效果相对较好。T5和T7相比差异显著，可能作用机理不同所致，说明供试菌株对这两种药不敏感。T6分别与T5、T1、T2、T3、T4和T8无差异显著。T1、T2、T3、T4和T8均在同一水平，差异不显著。

表2 8种药剂对烟草黑胫病菌抑制作用Tab.2 Inhibition of eight kinds of fungicides to Phytophthora nicotiance

3 结论与讨论

本文选用8种药剂对烟草黑胫病菌进行室内毒力测定，EC50值是药物安全性指标，旨在说明所选药剂防治烟草黑胫病菌效果，该值越小说明药剂效果越好，由小到大顺序为：1%申嗪霉素(SC)(0.5276 μg/mL)<58%甲霜·锰锌(WP)(2.6328 μg/mL)<80%代森锰锌(WP)(3.0775 μg/mL)<72%烯酰·丙森锌(WP)(5.8530 μg/mL)<30%甲霜·噁霉灵(AS)(24.9082 μg/mL)<52.5%噁酮·霜脲氰(WG)(107.8243 μg/mL)<70%噁霉灵(WP)(293.0293μg/mL)<50%氯溴异氰尿酸(SP)(9074.5566 μg/mL)。1%申嗪霉素(SC)效果最好，抑制中浓度(EC50)最低，其次是58%甲霜·锰锌(WP)、80%代森锰锌(WP)和72%烯酰·丙森锌(WP)。

表3 8种药剂对烟草黑胫病菌的毒力测定Tab.3 eight kinds of fungicides indoor virulence levels were tested to Phytophthora nicotiance

注:表中数据后标不同小写字母者表示在0.05水平上差异显著。

本实验选用的8种药剂除50%氯溴异氰尿酸(SP)外，其余7种药剂对烟草黑胫病菌菌丝生长均有较好的抑制作用。58%甲霜·锰锌(WP)是一种安全性较高，具有内吸保护性作用的化学杀菌剂，生产上用于防治烟草黑胫病较为常见，但是因甲霜灵对病原菌作用位点较单一加之长期大面积使用已经使病原菌易对其产生抗药性[13,19]。72%烯酰·丙森锌(WP)和80%代森锰锌(WP)同样表现出较好的抑菌效果,因此建议同58%甲霜·锰锌(WP)轮换使用，避免引起抗药性。

1%申嗪霉素(SC)属于生物药剂，该药剂高效、低毒、广谱，并且与环境相容性好[18]，本实验中1%申嗪霉素(SC)抑制菌丝生长的效果优于同甲霜灵复配的58%甲霜·锰锌(WP)，目前未有文献报道1%申嗪霉素(SC)防治烟草黑胫病田间试验，所以大面积推广该药防治烟草黑胫病还需进一步田间小区试验。朱流红等人[20]选用1%申嗪霉素对烟草黑胫病菌进行了研究，但效果相较还存在一定差异，原因可能是菌株来源不同，导致病原菌对该药剂的敏感性不同，还有可能是选用培养基不同，所含利于病原菌生长的营养物质不同所致。50%氯溴异氰尿酸(SP)是在农药商家推荐下进行试验，但效果最差，促进菌丝生长可能与药剂浓度及菌种致病性强弱有关。

[1] Waterhouse G M. Key to the species of Phytophthora de Bary[J].MycologicalPape, 1963(92): 1-22.

[2] 陈瑞泰,朱贤朝,王智发,等.全国16个主产烟省(区)烟草侵染性病害调研报告[J]].中国烟草科学,1997,18(4):1-7.

[3] 王益平,刘 森,夏 木,等.烟草黑胫病研究进展[J].现代农业科技,2013,(22):129-131.

[4] 胡吉凤,桑维钧,刘健锋,等.贵州省不同气候区烟草黑胫病的发生情况调查[J].贵州农业科学,2013,41(11):96-99.

[5] 葛永怡,陈 雪,李 祝,等.毕节市烟草黑胫病的发生情况及其病原菌鉴定[J].贵州农业科学,2012,40(12):108-110.

[6] 胡重怡,蔡刘体.利用ISSR分析贵州部分烟草品种(系)的遗传关系[J].中国烟草科学,2011,32(03):28-31.

[7] 王 雷.福建省三明市烟草黑胫病发生特点与防治研究[D].北京:中国农业科学院,2010.

[8] 汪汉成,李文红,冯勇刚,等.烟草黑胫病化学防治的历史与现状[J].中国烟草学报,2011,17(05):96-102.

[9] 陈继峰.甲霜灵防治烟草黑胫病[J].烟草科技,1986,01(21):64.

[10] 沈元户,陈士平,张维芬,等.53%金雷多米尔-锰锌WG防治大田烟草黑胫病初报[J].贵州农业科学,2004,32(2):51-52.

[11] 李梅云,祝明亮.烟草黑胫病菌对甲霜灵的抗性测定[J].中国农学通报,2006,22(9):377-379.

[12] 李梅云,祝明亮,杨春梅,等.烟草两种病害抗药性形成和发展的影响因素[J].云南农业大学学报(自然科学版),2010,25(6):791-796.

[13] 刘 刚.烟草黑胫病菌对甲霜灵具有较大的抗药性风险[J].四川农业科技,2008(04):42.

[14] 李 斌,龚国淑,姚 革,等.烟草黑胫病化学防治研究进展[J].广西农业科学,2008,39(3):331-334.

[15] 郑小波.疫霉菌及其研究技术[M].北京:中国农业出版社,1997:15-25.

[16] 慕立义.植物化学保护研究方法[M].北京:中国农业出版社,1994:76-81.

[17] 司升云,蔡定军,吴仁峰,等.农药室内生物测定数据处理系统[CP/DK].武汉市蔬菜科学研究所,2006.

[18] 方运玲,孙 爽,申 阅,等.微生物源农药申嗪霉素的研制与应用[J].农药学学报,2014,16(04):387-393.

[19] 刘 铭.甲霜灵与其他杀菌剂复配对烟草黑胫病菌联合毒力测定[J].安徽农业科学,2011,39(19):11496-11498.

[20] 朱流红,安启菲,吴轶凡,等.烟草黑胫病菌对7种杀菌剂的敏感性[J].山地农业生物学报,2016,35(1):18-22.

Toxicological Test of Eight Fungicides to Tobacco Black Shank

GAOYa-xing1，PENGLi-juan2，3JIANGXuan-li1*

(1.CollegeofAgriculture,Guiyang,Guizhou550025，China；2.CollegeofTobacco，GuizhouUniversity，Guiyang,Guizhou550025，China;3.GuizhouKeyLaboratoryforTobaccoQuality,GuizhouUniversityGuiyang,Guizhou550025，China)

In order to screen out effective fungicides to control tobacco black shank pathogen, eight fungicideswere tested by plate growth rate method. The results showed that the chemicalsof 58% ridomil-MZ (WP), 72% acryloxyethyl-zinc, 80% mancozeb (WP) and the biological pesticideof 1% phenazine-1-carboxylic (SC) had better inhibitory effectontobacco black shank pathogen. The 1% phenazine-1-carboxylic (SC) had the best inhibitory effect and itsEC50was 0.5276 μg/mL, followed by 58% ridomil-MZ, 80% mancozeb (WP) and 72% acryloxyethyl-zinc (WP) with theEC50of 2.6328 μg/mL, 3.0775 μg/mL and 5.8530 μg/mL, respectively. For these seven fungicides, the inhibitory effect increases withtheincreasingofthe using dosage,exceptfor 50% chlorobromoiso cyanurate acid (SP).

Tobacco Black Shank；1% phenazine-1-carboxylic (SC)；EC50

2016-08-06；

2016-09-27

遵义市烟草科技项目“抗菌肽对烤烟青枯病的防治技术研究”[201405]。

蒋选利(1960-)，男，汉族，教授，博导，主要研究方向：植物病理学的教学与研究；E-mail：jxl3237@163.com。

S432.1

A

1008-0457(2016)06-0031-04 国际

10.15958/j.cnki.sdnyswxb.2016.06.005