栀子金花丸有效成分含量测定的研究进展

2016-02-12刘喜纲

天津药学 2016年6期

关键词：小檗金花黄素

肖娅，刘喜纲

(河北省中药研究与开发重点实验室，承德医学院中药研究所，承德 067000)

综述

栀子金花丸有效成分含量测定的研究进展

肖娅，刘喜纲*

(河北省中药研究与开发重点实验室，承德医学院中药研究所，承德 067000)

栀子金花丸是《中国药典》收录的清热泻火药，由8味中药以药材原粉入药，有效成分较多。近年来该制剂中的有效成分的含量测定逐渐被诸多学者广泛研究，其中栀子苷、黄芩苷、盐酸小檗碱、大黄蒽醌类等成分研究相对较多，主要采用HPLC法、毛细管电泳法、UPLC法、单波长法或多波长HPLC法测定，测定一种或多种有效成分的含量。本文系统的综述了栀子金花丸中多种有效成分含量测定方法的研究进展，为其体内药动学过程的研究和质量评价提供依据。

栀子金花丸，有效成分，黄芩苷，栀子苷，盐酸小檗碱，大黄蒽醌类

栀子金花丸由栀子、黄芩、黄连、黄柏、大黄、金银花、知母、天花粉8味药材组成，收载于《中国药典》2015年版一部[1]。临床用于治疗牙龈肿痛，口舌生疮，咽喉肿痛，目赤眩晕，肺胃热盛，吐血衄血，大便秘结等病症。药理研究表明，该制剂中有效成分有黄芩苷、栀子苷、盐酸小檗碱、大黄蒽醌类、西红花苷-1、知母皂苷BⅡ、芒果苷等成分。近年来，多位研究者对黄芩苷、盐酸小檗碱及大黄蒽醌等成分进行了测定，其中有单一成分或多种成分含量的测定。本文拟对其有效成分含量测定方法进行综述，以期通过多定量指标完善、提高栀子金花丸的质量标准，检测有效成分含量变化，从而有效控制产品的质量。

1 栀子金花丸中单味药材的含量测定

1.1 黄芩药材的含量测定黄芩苷是药材黄芩的主要有效成分，关于栀子金花丸中黄芩苷含量测定方法的研究报道有很多，大多采用HPLC法，也有采用毛细管电泳法进行测定的。刘元媛[2]等采用超声法提取栀子金花丸中黄芩苷，再用HPLC法测定含量，采用Hypersil ODS(200 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱，以甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2)为流动相，检测波长280 nm，柱温25 ℃，平均回收率为100.4%(RSD为1.2%)；林辉[3]改进了黄芩苷测定的流动相系统，采用甲醇-水-冰醋酸(45∶55∶1)为流动相，避免了使用含有磷酸的溶液损坏泵头的问题，在检测波长为274 nm，柱温40 ℃下，黄芩苷在2.072～10.360 μg的范围内线性关系良好(r=0.999 6)，平均回收率为97.87%(RSD为0.55%)。为了减少样品用量，降低分析成本，杨慧文等[4]采用毛细管电泳法测定栀子金花丸中黄芩苷的含量，采用未涂层弹性融硅石英毛细管柱(60 cm×75 μm，有效长度52 cm),40 mmol/L的硼砂溶液(pH 9.0)为运行缓冲液，检测波长280 nm，黄芩苷的平均回收率为96.7%(RSD为2.15%)。

为了更全面反映栀子金花丸的质量，牛德斌[5]对丸剂中黄芩药材所含的多种有效成分进行测定，以HPLC法测定黄芩苷和汉黄芩苷的含量。采用Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以甲醇-0.3 %冰醋酸溶液(43∶57)为流动相，检测波长为275 nm，流速为1 ml/min，柱温35 ℃，黄芩苷和汉黄芩苷的平均回收率分别为98.85%(RSD为1.63%)、97.56%(RSD为1.95%)。黎晓玲等[6]采用HPLC同时测定栀子金花丸中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素4种成分的含量，以Agilent Zorbax SB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)为色谱柱，流动相为乙腈-0.1 %磷酸，梯度洗脱，检测波长为278 nm，流速为1.0ml/min，柱温为30 ℃，黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素及汉黄芩素的平均回收率分别为98.40%(RSD为0.45%)、98.66%(RSD为1.41%)、98.88%(RSD为1.48%)和98.97%(RSD为1.45%)。

1.2 栀子药材的含量测定栀子金花丸处方中栀子的量较大，其有效成分是栀子苷和西红花苷-1。《中国药典》2015年版[1]中关于栀子金花丸中栀子苷的含量测定标准是用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以乙腈-水(11∶89)为流动相，检测波长为238 nm。王晓可等[7]采用毛细管电泳法，以未涂层弹性融硅石英毛细管柱(60 cm×75 μm ID，有效长度52 cm)；以25 mmol/L硼砂+25 mmol/L SDS+4 mmol/L磺丁基-β-环糊精+8%(体积分数)甲醇为缓冲液，检测波长238 nm，以维生素B1为内标，结果栀子苷在21.0～63.0 μg/ml的浓度范围内线性关系良好(r=0.999 9)，加样回收率100.5%(RSD为0.56%)。严安定等[8]建立用HPLC法同时测定不同品种栀子药材及栀子金花丸中栀子苷含量方法，采用Hypersil ODS色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，乙腈-水(15∶85)为流动相，检测波长为238 nm，结果栀子苷与其相邻杂质峰能完全分离，栀子苷在2.5～80 μg/ml质量浓度范围内线性关系良好(r=0.999 6)，平均加样回收率为100.05%(RSD为1.58%)。

栀子药材中含量较多的另一类成分是西红花苷，其是一类特殊的水溶性类胡萝卜素，有控制心血管系统疾病、抑制肿瘤细胞增值、保护神经和肝脏的作用。其中西红花苷-1含量最高(含量约为栀子药材中总西红花苷的87%)，因此西红花苷-1含量的高低可能会对制剂的药理活性具有一定影响。于是陈阳等[9]采用UPLC法，选用Acquity UPLC BEH Shield RP C18(50 mm×2.1 mm，1.7 μm)色谱柱，以乙腈-水为流动相，进行梯度洗脱，在440 nm检测波长下，测得西红花苷-1的线性范围为2.5～40.0 μg/ml，计算西红花苷-1峰面积的RSD为2.13%，回收率为98.5%，由此表明该方法准确、快速、重复性好。

1.3 黄连药材的含量测定处方中黄连的主要有效成分是盐酸小檗碱，王晓可等[10]采用未涂层弹性融硅石英毛细管柱(60 cm×75 μm×52 cm)，以0.2 mol/L磷酸二氢钠溶液-无水乙醇(50∶50)(pH 5.50)为缓冲液，检测波长265 nm，结果栀子金花丸中所含盐酸小檗碱的浓度在11.0～44.0 mg/ml的范围内线性关系良好(r=0.999 3)，平均回收率为100.0%(RSD为1.21%)。

1.4 大黄药材的含量测定大黄是处方中的主药，所含有效成分较多。杨跃龙[11]采用RP-HPLC法对栀子金花丸中大黄药材的大黄素和大黄酚进行测定，色谱柱为Dikma C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)，流动相为甲醇-水-冰醋酸(80∶20∶1)，检测波长为254 nm，柱温为25 ℃。大黄素、大黄酚的平均回收率分别为99.20%(RSD为0.4%)、99.30%(RSD为0.2%)。

1.5 黄柏药材的含量测定处方中的黄柏药材，其化学成分主要有生物碱类、甾醇类、柠檬苷素类及其他。而盐酸黄柏碱为黄柏中的特有成分，目前在黄连及小檗属多种植物中尚未发现。黄丽玫等[12]建立了专属于含黄柏及其复方制剂的质量评价方法。其研究以盐酸黄柏碱为指标，采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)，以Diamonsil-C18柱，用乙腈-0.1%磷酸水溶液洗脱，在284 nm的波长下检测到盐酸黄柏碱峰的拖尾因子为0.86，且与其他组分峰的分离度大于1.5，测得其平均回收率为100.8%，RSD为0.62%，结果表明该方法准确可靠。

1.6 知母药材的含量测定药材知母所含化学成分种类较多，主要有甾体皂苷、双苯吡酮类、黄酮类、木质素类、有机酸等。芒果苷是主要的双苯吡酮类成分，是知母中主要的抗炎、抗病毒和抗氧化成分。为进一步评价栀子金花丸制剂的质量，温金莲等[13]采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)对制剂中知母所含的芒果苷进行了测定，以Diamonsil-C18柱为色谱柱，采用乙腈-磷酸水洗脱系统，在258 nm的波长下检测，其平均回收率为99.0%，回收率合格，该方法可以准确测定芒果苷的含量。知母中所含的皂苷类成分也很重要，知母皂苷及其苷元均具有较好的抗衰老、抗血小板聚集等作用，知母皂苷BⅡ被认为是知母中含量最高的皂苷类成分，叶志欣等[14]通过采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器法(HPLC-ESLD)测定知母皂苷BⅡ的含量来评价该制剂的质量。该方法采用Diamonsil-C8色谱柱，以乙腈-水系统洗脱，在蒸发光散射检测器下检测到知母皂苷BⅡ的拖尾因子为1.04，与其他组分峰的分离度大于1.5，平均加样回收率合格。该方法可以准确、无干扰的测定知母皂苷BⅡ的含量。

2 同时测定栀子金花丸中多味药材的含量

2.1 同时测定两味药材的含量黄燕萍等[15]采用HPLC建立了同时测定黄芩苷和栀子苷含量的方法，采用Agilent TC-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为甲醇-0.5%冰乙酸溶液，梯度洗脱，检测波长239 nm，柱温为室温。该方法所得样品提取率高、回收率、重复性及稳定性好，平均加样回收率分别为101.15%(RSD为2.82)、100.56%(RSD为2.57)。左银风[16]改进了流动相系统，以Dik-ma Kromasil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)为色谱柱，流动相采用乙腈-0.1%磷酸溶液，梯度洗脱，柱温为30 ℃，检测波长为240 nm，在上述色谱条件下，测得黄芩苷与栀子苷的分离度均符合要求且峰形较好，栀子苷、黄芩苷的平均回收率分别为97.06%(RSD为1.09%)、97.92%(RSD为1.17%)。

大黄中主要有效成分是蒽醌类，包括大黄素、大黄酚、大黄酸、大黄素甲醚、芦荟大黄素等。雷小红[17]采用高效液相色谱法测定栀子金花丸中黄芩和大黄药材中黄芩苷、大黄素、大黄酚的含量。以Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)为色谱柱，流动相为甲醇-0.4%磷酸溶液，梯度洗脱，检测波长为254 nm，柱温为室温。结果黄芩苷回收率为100.2%(RSD为1.5%)，大黄素回收率为99.7%(RSD为1.2%)，大黄酚回收率为100.0%(RSD为1.2%)。

郭小龙等[18]在《中国药典》栀子苷含量测定标准的基础上，增加了盐酸小檗碱的含量测定，Thermo Hypersil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以乙腈-10 mmol/L SDS水溶液梯度洗脱，柱温40 ℃，变换检测波长(0～17 min，240 nm；17～30 min，346 nm)，结果栀子苷回收率为99.8%(RSD为1.9%)、盐酸小檗碱回收率为100.5%(RSD为0.8%)。而牛德斌[19]在《中国药典》含量测定标准的基础上，增加了3个大黄蒽醌苷元类成分的含量测定，采用HPLC法同时对栀子苷及蒽醌类成分(大黄酸、大黄素、大黄酚)进行含量测定，Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相甲醇-0.1%磷酸(85∶15)，检测波长254 nm，柱温35 ℃，结果大黄的3个对照品测定的平均回收率均>97.20%(RSD均<2.05%)；栀子苷的平均质量分数为3.386 mg/g。

2.2 同时测定三味及三味以上药材的含量陈威等[20]建立了同时测定丸剂中三种有效成分的含量测定方法，色谱柱为Dimonsil-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液，梯度洗脱，检测波长为254 nm，柱温为35 ℃。结果栀子苷平均回收率为99.7%(RSD为2.5%)，盐酸小檗碱平均回收率为100.2%(RSD为1.7%)，黄芩苷平均回收率为99.0%(RSD为2.3%)。蒋范任等[21]采用反相高效液相色谱法同时测定栀子金花丸中栀子苷、盐酸小檗碱、黄芩苷、大黄酸、大黄素、大黄酚等6种有效成分的含量，色谱柱为Gemini NX C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱，结果这6种成分的平均回收率分别为99.9%(RSD为1.7%)、98.8%(RSD为1.8%)、101.0%(RSD为1.4%)、99.6%(RSD为1.7%)、101.3%(RSD为1.4%)、98.1%(RSD为0.9%)。

由于不同成分的最大吸收波长不同，也有采用不同波长测定有效成分，高旭东等[22]采用双波长HPLC测定栀子金花丸中栀子苷、黄芩苷、盐酸小檗碱和大黄素的含量，Zorbax Eclipse XDB-C18键合硅胶柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，以乙腈-0.2%磷酸溶液为流动相，进行梯度洗脱，柱温为室温，栀子苷波长240 nm、黄芩苷、盐酸小檗碱和大黄素波长275 nm。在上述条件下，栀子苷、黄芩苷、盐酸小檗碱和大黄素平均回收率分别为91.18%(RSD为1.60%)、91.55%(RSD为0.75%)、91.19%(RSD为1.08%)和92.29%(RSD为1.98%)。郝乘仪等[23]采用变换波长的方法，运用HPLC同时测定栀子金花丸中9个成分的含量。采用色谱柱DIKMA Platisil ODS(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相以甲醇-0.1%磷酸水溶液进行梯度洗脱，检测波长254 nm(栀子苷、黄芩苷、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚)、327 nm(绿原酸、盐酸小檗碱)，柱温35 ℃。试验所得各成分的平均加样回收率及RSD值均符合要求。

大黄药材含量测定的报道多是大黄蒽醌类，也有番泻苷A和番泻苷B测定的研究，但复方中关于这2个成分含量测定较少。高晓燕等[24]研究建立了同时测定栀子苷、黄芩苷、番泻苷A和番泻苷B的方法。该方法快速、灵敏得同时定量测定多种指标成分，其中各成分的峰分离度良好，回收率合格。

诸多文献报道对栀子、黄芩、大黄等有效成分的含量测定多采用HPLC法，但未能全面有效地测定该复方制剂的多种成分。陈晓虎等[25]采用UPLC法同时测定栀子金花丸中绿原酸、栀子苷、黄芩苷、小檗碱、汉黄芩苷、黄芩素、芦荟大黄素、汉黄芩素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等11种成分的含量。色谱柱为Acquity UPLC BEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm，1.7 μm)，流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱，流速为0.4 ml/min，检测波长：绿原酸为324 nm，栀子苷为238 nm，小檗碱为345 nm，黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素为276 nm，芦荟大黄素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚为254 nm，柱温35 ℃。结果各成分平均回收率及RSD值均符合要求。

3 小结

关于栀子金花丸中有效成分含量测定的报道有很多，该复方制剂组成成分的复杂，测定的干扰因素也较多，HPLC法因操作简便、分析速度快、灵敏度高等优点被大量应用。现行标准仅仅测定栀子苷的含量，并不能全面评价丸剂的质量；而通过一种方法同时测得多种成分，可以全面有效地评价制剂的质量。上述科研人员的研究为完善栀子金花丸的含量测定标准提供了实验依据。

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11 杨跃龙.高效液相色谱法测定栀子金花丸中大黄素和大黄酚的含量[J].中国现代药物应用，2007，1(11):20-21

12 黄丽玫，王宇葶，颜戊利，等.HPLC法测定栀子金花丸中盐酸黄柏碱的含量[J].中药材，2011，34(8):1300-1302