高智玲，纪 雪，郭学军，陈 萍，刘彦晶，刘 军，祝令伟，周 伟，冯书章，孙 洋

嗜水气单胞菌双重荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用

高智玲1,2，纪 雪1，郭学军1，陈 萍2，刘彦晶3，刘 军1，祝令伟1，周 伟1，冯书章1，孙 洋1

目的 建立快速准确检测致病性嗜水气单胞菌的双重荧光定量PCR方法。方法针对嗜水气单胞菌的16S rDNA和气溶素基因aerA的序列设计特异性引物及TaqMan探针，优化双重荧光定量PCR反应条件，并结合常规PCR方法及分离培养鉴定对临床样品进行检测和对比验证。结果荧光定量PCR反应体系对质粒标准品的敏感性为10拷贝/反应，是常规PCR检测方法的100倍；该方法检测12种其他种属细菌时未出现假阳性；对实际样品的检测结果其敏感性同样高于普通PCR，定量检测目的基因的拷贝数与样品中目的菌的分离率成正比。结论本方法敏感性高，特异性好，可用于致病性嗜水气单胞菌感染的诊断、疾病防控及流行病学研究。

嗜水气单胞菌；荧光定量PCR；检测；应用

Supported by the National Science and Technology Major Project of China (No. 2013ZX10004-217-002) and the Scientific and Technological Development Project of Jilin Province (Nos. 20140101032JC and 20150101110 JC) Corresponding author: Sun Yang, Email: sunyang10@hotmail.com

嗜水气单胞菌是一种革兰氏阴性杆菌，可从水、鱼、无脊椎动物、土壤及食物中分离出来，往往与其他疾病关联而发生继发性感染[1]。近年来，由于其对人类及水生动物的潜在致病性而备受世界关注。对于人类，嗜水气单胞菌可以引发多种疾病，从轻微的胃肠、伤口感染到危及生命的败血症及坏死性筋膜炎[2]，对于鱼类，可引发出血病、红鳍病及败血症等疾病。目前，嗜水气单胞菌所引起的疾病已成为威胁我国水产养殖业的重要传染病，给我国水产养殖业造成了严重的经济损失[3]。……