朱晓丹， 王 颖， 毕 晶， 童 琳， 刘 洁， 宋元林， 白春学

复旦大学附属中山医院呼吸内科，上海 200032

ZHU Xiao-dan, WANG Ying, BI Jing, TONG Lin, LIU Jie, SONG Yuan-lin, BAI Chun-xue*

Department of Respiratory Medicine, Zhongshan Hospital, Fudan University, Shanghai 200032, China

论 著

过表达锌指蛋白A20可抑制肺泡巨噬细胞炎症反应

朱晓丹， 王 颖， 毕 晶， 童 琳， 刘 洁， 宋元林， 白春学*

复旦大学附属中山医院呼吸内科，上海 200032

目的：通过建立A20过表达肺泡巨噬细胞株，研究A20对肺泡巨噬细胞炎症反应的影响及调控机制。方法：构建携带A20基因的慢病毒载体，转染大鼠肺泡巨噬细胞(NR8383)，筛选出稳定过表达A20基因的细胞株并行体外培养。向培养基中加入脂多糖(LPS, 1 μg/mL)进行干预，并于刺激后0.5、1、2、4 h收集上清液及细胞。ELISA法测定上清液中细胞因子(TNF-α、IL-1β)及核因子κB(NF-κB)活性。Western 印迹方法检测A20蛋白及核内p65含量。实时荧光定量PCR法测定A20 mRNA含量。结果：LPS刺激后，A20过表达组(A20组)及正常对照组(VEC组)A20蛋白及mRNA含量都升高，并于1 h达高峰，之后逐渐下降；且A20组较VEC组A20水平明显升高(P<0.05)。与VEC组相比，A20组培养上清液中细胞因子(TNF-α、IL-1β)水平明显降低(P<0.05)；NF-κB DNA结合活性及核内p65含量也降低(P<0.05)。结论：A20能够抑制肺泡巨噬细胞NF-κB活性及TNF-α、IL-1β分泌，进而抑制肺泡巨噬细胞炎症反应活性。

急性呼吸窘迫综合征；A20蛋白；肺泡；巨噬细胞；炎症反应

急性呼吸窘迫综合征(ARDS)是造成重症肺炎、重症急性呼吸综合征(SARS)、爆发性禽流感等疾病患者死亡的主要原因。ARDS病死率高，在美国，其死亡人数相当于每年因乳腺癌、结肠癌和前列腺癌死亡的人数总和[1]。其诱因主要为肺部感染和全身性感染。其中在脂多糖(LPS)导致的ARDS中，促炎及抗炎反应失衡是根本原因。肺泡巨噬细胞在其中起始动作用，并与核因子(NF-κB)炎症信号通路过度反应密切相关[2-3]。

A20蛋白，又称肿瘤坏死因子α诱导蛋白3(TNFAIP3)，是一种泛素修饰酶[4]。既往研究[5-8]发现，A20基因多态性与多种炎症性疾病有关，并可负性调节NF-κB。……