曹永生，徐黎明，赵景壮，刘淼，卢彤岩

（中国水产科学研究院黑龙江水产研究所，黑龙江 哈尔滨 150070）

虹鳟IL-17多克隆抗体的制备及初步鉴定

曹永生，徐黎明，赵景壮，刘淼，卢彤岩

（中国水产科学研究院黑龙江水产研究所，黑龙江 哈尔滨 150070）

本研究根据NCBI已发表序列设计引物，提取经植物血凝素刺激后的虹鳟Oncorhynchus mykiss头肾细胞总RNA，采用RT-PCR方法扩增IL-17成熟肽基因，测序结果表明所获得的序列与发表序列相一致。将该基因重组至原核表达载体pET32a中，并转化大肠杆菌Escherichia coli Rosetta，进行诱导表达。SDS-PAGE电泳结果表明：目的蛋白以包涵体形式表达，大小约为32kDa，重组蛋白经Ni-NTA系统纯化、复性后纯度达90%以上，以其免疫小鼠制备虹鳟IL-17多克隆抗体。ELISA结果显示其效价为1∶25 600，而间接免疫荧光结果显示所制备的多克隆抗体能够特异性地识别真核细胞中瞬时表达的虹鳟IL-17。本研究成功制备虹鳟IL-17多克隆抗体，为下一步IL-17在虹鳟黏膜免疫中的作用及其佐剂效应研究奠定基础。

虹鳟；IL-17；多克隆抗体

虹鳟是典型的冷水鱼，生长较快，因富含蛋白、无肌间刺、富含EPA和DHA等不饱合脂肪酸而备受全世界消费者的青睐[1]。近年来，随着养殖密度的加大和养殖环境的恶化，虹鳟病害时常发生，影响了我国虹鳟产业的发展[2]。我国学者在虹鳟流行病学、疫苗制备和药物防治等方面已取得一定的成果[3-5]，但认知免疫机理对虹鳟病害致病机制的掌握及其防治体系的建立更具有积极的意义。

IL-17是由Th17细胞分泌的细胞因子，具有抵抗细菌、真菌、病毒和寄生虫感染的作用[6-9]。……