α-酮戊二酸二甲酯抑制乳腺癌细胞增殖的机制研究

2016-02-01侯培锋福建医科大学干细胞医学研究院福建省肿瘤转化医学重点实验室福建医科大学附属协和医院肿瘤内科福建福州350001

中国药理学通报 2016年5期

侯培锋，陈　强（福建医科大学干细胞医学研究院，福建省肿瘤转化医学重点实验室，福建医科大学附属协和医院肿瘤内科，福建福州　350001）

侯培锋，陈强
（福建医科大学干细胞医学研究院，福建省肿瘤转化医学重点实验室，福建医科大学附属协和医院肿瘤内科，福建福州350001）

网络出版时间：2016-4-26 11：06网络出版地址：http：//www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20160426.1106.058.html

α-酮戊二酸二甲酯（DM-2KG）是目前在基础研究中广泛被应用为养料来营救因营养缺失导致的细胞生长抑制［1］。据报道，在多种代谢酶发生突变如IDH1或SDH突变的肿瘤细胞中，当应用DM-2KG干预后，这类代谢物进入细胞后即可转化为PHD活化的辅助因子α-KG，激活PHD酶活性，促进缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）蛋白降解［2］，即HIF-1α蛋白的PHD经典降解途径。

在常氧且营养成分充足的条件下，DM-2KG不仅没有促进癌细胞的生长，反而抑制癌细胞的生长，并能诱导产生一组干细胞样的癌细胞［3］。本文深入探讨其中的发生机制。

1　材料与方法

1.1材料DM-2KG、去铁胺、二甲基草酰甘氨酸和环己酰亚胺（Sigma公司）；MG132（Calbiochem公司）。其他：HIF-1α（BD Bioscience），HIF-2α（Novus Biologicals），anti-Actin（Millipore），anti-CD44（Cell Signaling），anti-Ki67（Abcam），Hoechst 33342（Sigma），Image-Pro6.3软件（Media Cybernetics），Gallios流式细胞仪（Beckman），TD-20e光度计（Turner）。

1.2方法采用无目标基因的shRNA转染MDA-MB-231细胞作为对照和针对HIF-1α的shRNA-沉默MDA-MB-231细胞（MDA-MB-231/shHIF-1α）。采用β-半乳糖苷酶染色试剂盒（Cell Signaling）检测细胞衰老状况。根据产品使用指南用ENLITEN® ATP Assay System（Promega，FF2000）测定ATP产量。采用免疫荧光染色和流式细胞术检测细胞表面的CD44标志物；免疫荧光染色和成像技术检测细胞总CD44标志物。采用乳腺细胞球形成试验评估癌细胞致瘤能力。