HPLC法同时测定栀子胶囊中栀子苷和葛根素含量

2016-01-29周美娟胡浩武沈丽琴耿炤上海中医药大学上海010上海中创医药科技有限公司上海010江西汇仁药业有限公司南昌005

江西中医药 2015年10期

★　周美娟　胡浩武　沈丽琴　耿炤　(1.上海中医药大学　上海 010；.上海中创医药科技有限公司　上海 010；.江西汇仁药业有限公司　南昌 005)

★周美娟1,3胡浩武2沈丽琴2耿炤3(1.上海中医药大学上海 201203；2.上海中创医药科技有限公司上海 201203；3.江西汇仁药业有限公司南昌 330052)

摘要：目的：建立栀子胶囊的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱(HPLC)法对制剂中栀子和葛根的有效成分栀子苷和葛根素进行定量研究。结果：确定同时对两种成分进行定量测定的方法，栀子苷在0.0531～5.31μg/mL、葛根素在0.0288～2.88μg/mL范围内均呈良好的线性关系，栀子苷的平均加样回收率为101.52%(RSD=0.58%，n=6)，葛根素的平均加样回收率为103.41%(RSD=0.60%，n=6)。结论：建立的方法分析效率高，重复性好，准确度高。

关键词：栀子胶囊；高效液相色谱法；栀子苷；葛根素

栀子胶囊是由栀子、葛根等中药材提取制得，并对化学性肝损伤具有辅助保护作用的中药保健品。根据药材中已知化学成分的药理作用及其在栀子胶囊中存在的量，我们对制剂中的栀子苷和葛根素进行了定量研究，建立了一测多评的HPLC含量测定方法，并准确和迅速的控制该产品质量。实验数据如下。

1仪器与试药

AgiLent 1100高效液相色谱仪；栀子苷对照品(购自中国食品药品检定研究院，批号：110749-200714，供含量测定用)，葛根素对照品(购自中国药品生物制品检定所，批号：110752-200209，供含量测定用)，甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水，其它试剂为分析纯。

栀子胶囊(规格：0.4g/片；批号：1211001、1211002、1211003；江西汇仁药业有限公司)

2实验方法与结果

2.1色谱条件色谱柱：采用C18色谱柱YMC(4.6mm×250mm,5μm)；流动相：乙腈-水(11∶89)。

检测波长：经紫外扫描栀子苷最大吸收波长为238nm；葛根素最大吸收波长为250nm；因为栀子苷为该制剂的功效成分，所以以栀子苷的最大吸收波长238nm定为该方法的检测波长。柱温：35℃；流速：1.0mL/min。

2.2试验方法对照品溶液的制备：取栀子苷对照品、葛根素对照品适量，精密称定，加50%乙醇制成每1mL中含栀子苷30μg、葛根素20μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取装量差异项下的栀子胶囊，研细，取约0.1g，精密称定，置50mL量瓶中，加50%乙醇适量，超声处理(功率200W，频率50kHz)50分钟，放冷，加50%乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪。

2.3流动相的选择分别采用甲醇-水和乙腈-水不同比例进行考察，发现采用C18色谱柱YMC(4.6mm×250mm,5μm)在乙腈-水(11∶89)的比例，栀子苷和葛根素分离度均较好，故采用乙腈-水(11∶89)作为该制剂中栀子苷和葛根素的含量测定时流动相。

2.4提取方法考察

2.4.1提取溶剂的选择取样品(批号：1211001)0.2g，分别精密称定至50mL量瓶中，分别加入适量的甲醇、乙醇、50%甲醇溶液和50%乙醇溶液，超声30min，放置，加相应的溶液至刻度，摇匀，滤过，即得。结果见表1。

结果选取50%乙醇溶液做为该样品的提取溶剂。由于此两种成分峰面积均较高，故减小该样品的取样量进行进一步研究。

2.4.2提取方法及时间的选择取样品(批号：1211001)0.1g，分别采用超声和水浴回流的方法用50%乙醇溶液进行超声40，50，60min，回流30，50，60min进行比较提取方法和时间对结果的影响，结果见表2。

结果显示超声方法和回流方法在不同时间的提取效果RSD栀子苷为0.89%，葛根素为0.72%，说明两种方法并没有显著性差异，从方便操作和节能综合考虑，拟采用超声50min作为提取的方法及时间。

表2　栀子胶囊提取时间的选择　mg/g

2.5方法学考察

2.5.1色谱系统性实验按栀子胶囊制备方法制备缺栀子和葛根的双阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性样品溶液。

在以上条件下，栀子苷和葛根素与其它相邻组分分离度大于1.5，且缺栀子和葛根的阴性对照在相同保留时间下无吸收峰，说明阴性无干扰，见图1-3。

2.5.2线性关系的考察取栀子苷和葛根素对照品适量，精密称定，加50%乙醇制成含栀子苷0.531mg/mL，葛根素0.288 mg/mL的混合对照品溶液。分别精密吸取上述对照品溶液1mL至5，10，25，50，100mL量瓶中，并用50%乙醇稀释至刻度，得到以下浓度的对照品溶液，分别吸入10μL注入液相色谱仪，测定，记录峰面积，结果见表3。

表3　栀子胶囊栀子苷与葛根素线性关系表

以对照品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，分别绘制标准曲线，并进行回归，计算标准曲线的回归方程及相关系数，其中，栀子苷回归方程为Y=14.502X+0.9963(r=1)，葛根素回归方程为Y=34.698X-2.7179(r=1)，以上结果表明：栀子苷在0.0531～5.31μg/mL、葛根素在0.0288～2.88μg/mL范围内均呈良好的线性关系。