严磊，李晶，赵婷婷，王会娟，王蕾，赖国旗,3*

(1. 重庆医科大学实验动物中心，重庆　400016；2. 重庆三峡医药高等专科学校，重庆　404120；

3.重庆市啮齿类实验动物工程技术研究中心，重庆　400016)



大鼠CB1基因真核表达载体的构建及其对CaSki细胞凋亡的影响

严磊1，李晶2，赵婷婷1，王会娟1，王蕾1，赖国旗1,3*

(1. 重庆医科大学实验动物中心，重庆400016；2. 重庆三峡医药高等专科学校，重庆404120；

3.重庆市啮齿类实验动物工程技术研究中心，重庆400016)

【摘要】目的构建大鼠CB1 (rCB1)基因真核表达载体，检测rCB1基因在细胞中的表达，研究rCB1对人宫颈癌CaSki细胞凋亡的影响。方法从大鼠脑组织中提取总RNA，RT-PCR扩增rCB1基因, 通过酶切、纯化、连接PCR纯化产物与pCDNA 3.1(+)质粒，构建pcDNA3.1(+)-rCB1。脂质体法将其转染到HEK293和CaSki细胞，Western blot及细胞免疫荧光联合激光扫描共聚焦方法检测rCB1的表达及定位，流式细胞仪检测细胞凋亡率，Western blot与实时荧光定量PCR检测rCB1、Bcl-2、Bax、Bad表达。结果酶切重组质粒获得5300 bp的载体片段和1500 bp的目的片段，测序结果和rCB1基因序列(NM012784.4)一致。转染HEK293细胞后， rCB1在HEK293细胞细胞膜和细胞质表达。转染CaSki细胞后， rCB1使细胞凋亡率增加(P<0.05)；rCB1基因上调Bax、Bad的表达，同时抑制Bcl-2的表达，与空白组比较，其差异具有显著性(P<0.05)。结论成功构建了pcDNA3.1(+)-rCB1真核表达载体， rCB1表达于细胞膜和细胞质，rCB1可以明显促进宫颈癌CaSki细胞凋亡，其机制是上调Bax、Bad和抑制Bcl-2表达。

【关键词】CB1基因；HEK293细胞；CaSki细胞；细胞凋亡

大麻素是从印度大麻(Cannabissativa)里发现的一组萜酚类化合物，存在于动物神经系统和免疫系统里[1,2]。大麻类物质发挥生物作用的基础是大麻受体，现今已发现两个亚型： 1型大麻受体(cannabinoid receptor 1，CB1)[3]和2型大麻受体(cannabinoid receptor 2，CB2)[4]，其中CB1受体主要分布于脑、脊髓与外周神经系统中，故又称中枢型大麻素受体。脑内的CB1受体主要分布于基底神经节(包括黑质、苍白球和外侧纹状体)、海马CA锥体细胞层，小脑和大脑皮质。……