反相液相色谱法测定盐酸氨溴素吸入溶液中苯扎氯铵的含量

卜宇倩*蒋宇丹**邵佶祥

( 上海禾丰制药有限公司 上海 201206)

摘 要目的：建立盐酸氨溴素吸入溶液中苯扎氯铵含量的反相液相色谱测定方法。方法：采用Agilent Zorbax SBC18色谱柱（4.6 mm × 250 mm，5 mm）；以0.02 mol/L庚烷磺酸钠（含0.1%三乙胺，用磷酸调节pH至3.0±0.1）-乙腈（35∶65）为流动相；检测波长208 nm；进样体积20 ml。结果：苯扎氯铵浓度在3.32～7.74 mg/ml范围内线性关系良好，平均回收率为99.2%。结论：该方法快速、简便、准确、专属性强、重复性好，可适用于盐酸氨溴索吸入溶液中苯扎氯铵的含量测定。

关键词苯扎氯铵 盐酸氨溴索吸入溶液 反相液相色谱法

Determination of benzalkonium chloride in ambroxol hydrochloride inhalation solution by RP-HPLC

BU Yuqian*, JIANG Yudan**, SHI Jianguo

(Shanghai Harvest Pharmaceutical Co. Ltd., Shanghai 201206, China)

ABSTRACTObjective: To establish a RP-HPLC method for the quantitative analysis of benzalkonium chloride in ambroxol hydrochloride inhalation solution. Methods: RP-HPLC was performed on a column of an Agilent Zorbax SB- C18(4.6 mm × 250 mm，5 mm) with a mobile phase of 0.02 mol/L sodium 1-heptanesulfate solution (containing 0.1% triethylamine, adjusted pH to 3.0±0.1 by phosphate)-acetonitrile (35∶65) and at UV detection wavelength of 208 nm. Results: The standard curve was linear over the range of 3.32~7.74 mg/ml with the average recovery 99.2% (n=9). Conclusion: This method is fast, simple, accurate, sensitive with good reproducibility and can be applied in the determination of benzalkonium chloride in ambroxol hydrochloride inhalation solution.

KEY WORDSbenzalkonium chloride；ambroxol hydrochloride inhalation solution；RP-HPLC

盐酸氨溴索（ambroxol hydrochloride）是目前临床作用较强的黏液溶解型祛痰药，广泛应用于各种急、慢性呼吸道疾病引起的痰液黏稠，咳痰困难。其雾化吸入溶液中含有防腐剂苯扎氯铵。《中国药典》2010年版规定应测定药物制剂中抑菌剂的含量[1]和抑菌剂的抑菌效力[1]附录215-216，但目前《中国药典》2010年版收载的苯扎氯铵含量测定方法为萃取后氧化还原反应[1]430-431，方法繁琐，不利于微量苯扎氯铵的测定。本文参考文献建立反相液相色谱法测定盐酸氨溴素吸入溶液中苯扎氯铵的含量[2-7]。该方法快速、准确、重复性好，可用于产品质量控制。

1 仪器与试药

Agilent L1260液相色谱仪，VWD检测器、自动进样器（安捷伦科技有限公司，美国）。Sartorius CPA225D电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司，德国）。

苯扎氯铵对照品（中国药品生物制品检定研究所，批号：100549-201102，每1 ml含苯扎氯铵11.10 mg）。

盐酸氨溴素吸入溶液（上海禾丰制药有限公司，规格：2 ml：15 mg，批号：140604、140605、140606）。乙腈、庚烷磺酸钠为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Agilent Zorbax SB- C18色谱柱(4.6 mm × 250 mm，5 mm)； 以0.02 mol/L庚烷磺酸钠（含0.1%三乙胺，用磷酸调节pH至3.0±0.1）-乙腈（35∶65）为流动相；检测波长208 nm；进样体积20 ml。

2.2 溶液配制

对照品溶液：精密量取苯扎氯铵对照品溶液1 ml，置100 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取5 ml，置100 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，制成5.55 mg/ml的溶液。

供试品溶液：精密量取盐酸氨溴索吸入溶液1 ml，置50 ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，制成含5 mg/ ml的溶液。

2.3 专属性试验

按处方量，不加苯扎氯铵，配制空白辅料溶液，按2.2项下方法配制溶液，结果显示，盐酸氨溴索吸入溶液中盐酸氨溴索及其他辅料对本方法中苯扎氯铵的测定均无干扰，该方法具有较强专属性（图1）。

2.4 线性范围

精密量取苯扎氯铵对照品溶液1 ml，置100 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀；分别精密量取3.0、4.0、5.0、6.0和7.0 ml，置100 ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。以浓度为横坐标，苯扎氯铵两峰面积之和为纵坐标，进行线性回归，计算得回归方程为：Y=16.70X–12.29，r=0.999 3。结果表明，苯扎氯铵在3.32～7.74 mg/ml 浓度范围内的线性良好。

2.5 重复性试验

取同一批供试品，分别按2.2配制6份供试品溶液并测定，测得苯扎氯铵平均含量为0.22 mg/ml，RSD为1.9%（n=6）（表1）。表明本方法重复性良好。

图1 苯扎氯铵色谱图

表1 重复性试验结果

2.6 回收率试验

分别按处方量配制含苯扎氯铵80%、100%、120%

的盐酸氨溴索吸入溶液，按2.2配制供试品溶液，按2.1项下方法测定，计算回收率，平均回收率为99.2%，RSD=0.21%（n=9）。

2.7 样品测定

取样品按2.2项下方法制备供试品溶液，各20 ml注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以两峰面积之和计算含量。测定三批盐酸氨溴索吸入溶液中苯扎氯铵的含量分别为0.22、0.23和0.24 mg/ml。

3 讨论

有文献报道采用毛细管电泳法和紫外分光光度法测定苯扎氯铵[8-10]，但这些方法繁琐；也有文献采用蒸发光散色检测器进行含量测定[11]，但该法重复性较差；还有文献采用氰基柱进行检查[12]，但该色谱柱为非通用色谱柱。本文方法采用高效液相色谱法，紫外分光光度检测器，通用C18柱，方法快速、简便、重复性好、专属性强。

经紫外扫描，苯扎氯铵水溶液在208 nm有最大吸收波长，故采用该波长进行测定。

苯扎氯铵为同系物混合物[13]，美国药典收载的苯扎氯铵含有n-C12H25、n-C14H29、n-C16H33三种同系物[14]。而国内目前只有一家企业生产，主要以n-C12H25取代同系物为主，有时也含有较少量n-C14H29取代同系物。中国药品生物制品检定研究所提供的苯扎氯铵对照品溶液每1 ml中含苯扎氯铵为11.10 mg，n-C12H25取代同系物为66.27%，n-C14H29取代同系物为33.33%，液相色谱图中两个同系物分别出峰，计算含量时需将二者相加计算。

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收稿日期：（2014-12-09）

通讯作者：**蒋宇丹(1978-)，女 ，高级工程师，从事药物分析研究。Tel：(021)58993670；E-mail：jjjyyyddd@sina.com

作者简介：*卜宇倩（1979-），女，工程师，从事药品制剂研究。E-mail：2583804461@qq.com

文章编号：1006-1533(2015)09-0077-03

文献标识码：A

中图分类号：TQ460.72; O657.72