程 昊

工作单位：030001山西医科大学研究生学院



RhoC蛋白在口腔鳞状细胞癌中表达及意义

程 昊

工作单位：030001山西医科大学研究生学院

【摘要】目的 探讨RhoC对于口腔鳞癌发生发展以及侵袭的作用。方法 采用免疫组织化学法检测72例口腔鳞癌组织和17例正常口腔组织标本。结果 在口腔鳞癌组织中RhoC蛋白表达相对正常口腔组织显著升高。RhoC蛋白的表达随着组织病理学分级的降低，临床分期为晚期的，有淋巴结转移组中RhoC蛋白的表达明显增高。其表达的强弱与性别、年龄、肿瘤部位无明显相关性。结论 RhoC蛋白在口腔鳞状细胞癌中的表达水平与组织的病理学分级、临床分期和淋巴结转移密切相关。

【关键词】口腔鳞状细胞癌；RhoC蛋白；表达

发生于口腔颌面部的癌症80%以上的口腔癌为鳞状细胞癌（OSCC），其来源于恶变的上皮组织。恶性度高，浸润型生长、容易以颈淋巴结转移，有文献报道转移率为60%～70%，术后患者五年生存率为50-60%。做好诊断治疗，提高治愈率，延长患者的寿命以及生活质量有重要意义。Rho（Ras homologue）全称是Ras相似物，属于小分子G蛋白超家族。1985年，从海兔体内克隆出来。

本次实验通过免疫组化SP法检测RhoC蛋白在OSCC组织里的表达水平，通过实验数据分析，探讨RhoC蛋白在OSCC组织内表达的临床意义，为OSCC的诊断、治疗和预后提供思路。

1　材料和方法

1.1标本来源

山西医科大学第一医院2010年1月～2014年10月年间收治的经手术切除口腔鳞癌组织标本72例，正常口腔组织标本17例（包括癌旁正常组织10例）。其中39例男性，33例女性，年龄22 ～84岁。根据世界卫生组织口腔粘膜癌和癌前病损的组织分型（WHO，1997）［1］，实验用OSCC标本分为一级（高分化）43例，二级（中分化）18例，三级（低分化）11例。

参考国际抗癌联盟（UICC）2002年第六版TNM分期，72例OSCC标本分期结果：I期19例，II期27例，III期23例，IV期3例。有淋巴结转移23例，无转移49例。

1.2主要试剂核试验方法

一抗RhoC兔抗人多克隆抗体，北京博奥森。二抗Polink-1一步法聚合物免疫组化检测剂，北京中衫金桥生物技术有限公司pv-6000。二氨基联苯胺（DAB显色剂），北京中杉金桥生物技术有限公司。二甲苯溶液、无水酒精、梯度酒精溶液，3%双氧水、蒸馏水、盐酸酒精溶液、苏木素溶液，伊红溶液、PBS溶液由山西医科大学第一医院病理科配制。

1.3结果判定

RhoC为胞浆显色，呈棕黄色。免疫组化染色分析阳性对照为已知RhoC阳性标本，阴性对照为PBS替代一抗，请两位高年资病理科医师帮助阅片，按镜下（x400）视野内阳性细胞的染色深度，和所占面积百分数计分。面积小于5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，50%以上为3分。为着色计0分，淡黄色计1分，棕黄色计2分，棕褐色计3分。累计分数不超过2分的判定为阴性，3以上为阳性。

1.4统计学分析

采用SPSS 17.0统计软件分析数据，对比RhoC在OSCC组织和正常口腔组织的表达率，结合患者的临床病理数据采用χ2检验，取P<0.05有统计意义。

2　结果

实验显示RhoC在OSCC组织中的阳性率为61.1%，明显高于正常组织的17.6%（χ2=10.425，P<0.001）具有统计学意义。RhoC在高分化OSCC中阳性率为53.4%，中分化为83.3%，低分化为90.9%。三组数据的差异有统计学意义，病理学分化低的阳性率越高。RhoC在男性OSCC患者的阳性率69.2%，在女性患者的阳性率75.7%，两者之间没有统计学差异（P=0.538）。RhoC在OSCC的表达与患者的性别没有关系。在标本中RhoC的表达率，早期（Ⅰ+Ⅱ期）表达率为45.7%，晚期（Ⅲ+Ⅳ期）表达率为88.5%，两者比较差别有统计学意义（P=0.01）。RhoC的表达率和患者的临床分期呈正相关。RhoC蛋白在有淋巴转移的实验组里阳性率为73.9%，在没有转移的实验组中阳性率是40.8%。两者有明显差异（P=0.009）。结果见表1。

表1　RhoC在OSCC表达情况

3　讨论

1988年首次有人报道了RhoC的编码序列，1993年Morris等研究［2］发现RhoC的编码基因定位于1p13-p21，基因段全长6768bp。RhoC能够调控肌动蛋白细胞骨架的重组，其中RhoC可以使肌动蛋白聚集张力纤维（stress fiber）以保持细胞形态，也可使整合素及其相关蛋白质，如纤维连接蛋白（FN）聚集成粘连复合体［3-4］，和细胞骨架相关蛋白质比如黏著斑激酶（FAK）、内收蛋白（adducin）、桩蛋白（paxillin）和肌球蛋白轻链（MLC）的磷酸化直接有关而且参与细胞的移动调节。Hakem等［5］研究指出RhoC表达缺失不会抑制乳腺癌的生长，但是可以明显抑制癌细胞转移。

本次实验通过对比发现，RhoC在口腔鳞状细胞组织中阳性率为61.1%，在正常组织中阳性率为17.6%（χ2=10.425，P<0.001）两者的差别具有统计学意义，提示在OSCC组织中RhoC存在异常增高现象。这与之前学者研究一致。

实验结果显示OSCC组织的病理学分化低、临床分期晚期、有淋巴转移的病例RhoC表达阳性率高。提示RhoC在OSCC转移的过程中起重要作用。由于RhoC基因极少发生突变，只会出现过度表达，有望成为OSCC诊断依据之一，并且其表达水平可以做为患者疾病进展程度的评估指标之一，为治疗计划的指定、预后推测提供实验数据支持。

4　结论

口腔鳞状细胞癌中，RhoC高表达是口腔鳞状细胞癌的病情进展的因素之一。

口腔鳞状细胞癌中，RhoC的高表达与患者性别、年龄无明显相关，但是与肿瘤的组织病理学分级、临床分期和是否存在淋巴结转移有显著相关，提示RhoC是促使肿瘤细胞的转移、浸润的重要因素之一。

5　实验截图

见图1和图2。

图1　RhoC阴性sp400

图2　RhoC阳性 sp400

参考文献

［1］于世凤，汪说之.口腔组织病理学［M］.第5版，北京：人民卫生出版社，2004：342-343.

［2］Morris SW，Valentine MB，Kristein MN，et al.Reassignment of the human ARH9 RAS-refated gene to chromosome lp13-p31 ［J］.Genomics，1993，15（3）：677-679.

［3］Dutt P，Nguyen N，Tokoz D.Role of Lbc RhoGEF in 12/13-induced signals to RhoGTPase［J］.Cell Signal，2004，16（2）：201-209.

［4］Iwaki N，Karatsu K，Miyamoto M.Role of guanine nucleotide exchange factors for Rho family GTpases in the regulation of cellmorphology and actin cytoskeleton in fission yeast［J］.Biochem Biophys Res Commun，2003，312（2）：414-420.

［5］Hakem A，Sanchez-Sweatman O，You-Ten A.Rhoc is dispensable for embryogenesis and tumor initiation but essential for metastasis［J］.Genes Dev，2005，19（17）：1974-1979.

Expression of RhoC and its Significance in Oral Squamous Cell Carcinoma Progression

CHENG HaoGraduate School of Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China

【Abstract】

Objective To investigate effects of RhoC on occurrence，development and invasive of oral squamous carcinoma.Methods Seventy-two cases of oral squamous carcinoma tissues and 17 cases of normal oral tissue specimens were detected by immunohistochemistry.Results Expression of RhoC protein significantly increased compared with normal oral tissues in oral squamous carcinoma tissues，which reduced with the loss of histopathological grade.When its clinical stage was at late stage with lymph node metastasis expression of RhoC protein significantly enhanced.There was no significant correlation of strength of expression of RhoC protein with gender，age，tumor location.Conclusion Expression level of RhoC protein，tissue pathology classification，clinical stage and lymphatic metastasis are closely related in oral squamous cell carcinoma.

【Key words】Oral squamous cell carcinoma，RhoC，Expression

doi：10.3969/j.issn.1674-9316.2015.12.031

【中图分类号】R781.5

【文献标识码】B

【文章编号】1674-9316（2015）12-0040-03