应用NCCLS EP10-A2文件初步评价唾液酸试剂性能

齐立民1，孙安吉2

(1.聊城市冠县人民医院，山东 聊城 252500；2.宁波美康生物科技股份有限公司，浙江 宁波 315104)

摘要：目的利用美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)EP10-A2文件初步评价唾液酸(SA)试剂盒的临床应用性能。 方法按照NCCLS EP10-A2文件规定，每天按中、高、低、中、中、低、低、高、高、中的顺序连续测定各浓度样本，连续5 d，计算测定结果的偏差、总不精密度、截距、斜率、非线性、携带污染和漂移。结果低、中、高浓度SA样本偏差分别为0.1、0.2 和0.7 mg/L；总不精密度分别为0.76%、0.51%、0.53%；截距、斜率、非线性、携带污染、漂移分别为-0.273、1.006、-0.032、0.000、-0.005(-4.60.01)。结论SA试剂盒准确度、精密度良好，均在允许范围内，线性达到标准，携带污染率较低，稳定性较好，能满足临床应用要求。

关键词：唾液酸；EP10-A2文件；评价

中图分类号：

文章编号：1673-8640(2015)10-1030-03R446.1

文献标志码：A

DOI：10.3969/j.issn.1673-8640.2015.10.016

作者简介：齐立民，男，1977年生，主管技师，主要从事临床生物化学检验工作。

收稿日期：(2014-11-27)

唾液酸(sialic acid，SA)是九碳糖神经氨酸衍生物的总称，存在于各种组织细胞膜上，在细胞恶性转化时起着特殊的作用，是一种广泛、有效的肿瘤标志物[1-3]。为评估该项目在常规生化分析仪上应用的可行性，我们参照美国临床实验室标准化协会(the National Committee for Clinical Laboratory Standards,NCCLS)EP10-A2(《定量临床检验方法的初步评价：批准指南》)文件，对其试剂盒的偏差、总不精密度、截距、斜率、非线性、携带污染和漂移[4-6]进行分析，初步评价其是否适用于临床。

材料和方法

一、仪器与试剂

7180全自动生化分析仪由日本日立公司生产；SA试剂盒(批号：20130928)购自宁波美康生物科技股份有限公司。

二、分析样本

样本为宁波美康生物科技股份有限公司生产的定值质控品。低值样本(批号：20130928)靶值为55 mg/L。高值样本(批号：20130928)靶值为160 mg/L 。将上述高值样本和低值样本1∶1混合，得到中值样本，靶值为107.5 mg/L。高、中、低值样本按每天用量进行分装，置2～8 ℃保存备用，测定前取出，室温放置30 min后混匀使用。

三、方法

1.样本测定根据 NCCLS EP10-A2文件，每天按中、高、低、中、中、低 、低、高、高、中的顺序测定各浓度样本一批，连续测定5 d。每批测定均为连续测定，第1个中值仅作为测定起始用，不纳入统计，其余9个数据若任何1个不合格，则该批数据都弃掉，重新测定。

2.绘图散点图以标准品靶值(X)为横坐标、实测值(Y)为纵坐标作图；偏差图以标准品靶值(X)为横坐标、实测值与靶值的差值(Y-X)为纵坐标作图；观察线性和离群点情况。

3.偏差及总不精密度的允许范围参照SA试剂生产商企业标准，偏差允许范围设定为标准的1/2，即靶值±5%；总不精密度的允许范围设定为标准的1/2，即5%。

四、统计学方法

采用Microsoft Excel 2002软件进行统计分析。计算偏差、总不精密度、截距、斜率、非线性、携带污染、漂移。对截距、斜率、非线性、携带污染、漂移作回归分析，其校正回归值做t检验，当t>4.6或t<-4.6时，P<0.01为差异有统计学意义。

结果

一、绘图、目测离群点和线性

SA试剂盒的偏差图和线性趋势图见图1、图2，目测各浓度样本测定结果无离群点，精密度良好，实测值与靶值间线性良好。

图1　SA实测值与靶值的偏差图

图2　SA实测值与靶值的线性趋势图

二、数据分析

按照NCCLS EP10-A2文件所设计的数据处理表格要求进行计算，得出最后统计结果。

1.偏差评估以各浓度5 d的测定结果均值与其对应靶值之差计算偏差，偏差均未超过设定的±5%范围，临床均可接受。见表1。

表1　SA试剂盒偏差分析结果

2.总不精密度分析按照 EP10-A2文件提供的方法，计算总不精密度。各浓度总精密度均未超过允许误差，临床均可接受。见表2。

表2　SA试剂盒不精密度分析结果

3.测定结果多重回归分析表每天结果进行回归分析，计算每天测定结果的截距、斜率、非线性、携带污染、漂移，见表3。结果显示截距、斜率、非线性、携带污染、漂移的差异均无统计学意义(-4.60.01)。

表3　SA试剂盒多元回归分析汇总

讨论

SA是一种广泛、有效的肿瘤标志物[1-3]，本研究参照EP10-A2文件对其进行了初步评估，以探讨其在临床的应用价值。偏差评价结果显示低、中、高浓度的绝对偏差均在允许偏差范围之内，故其偏差是可接受的，并且多元回归总结分析结果显示斜率、截距的t值均在-4.6～4.6之间，差异均无统计学意义(P>0.01)，说明试剂测定的准确度较好。总不精密度评价结果显示低、中、高浓度样本的总不精密度均低于最大允许总不精密度，说明其总不精密度也可以接受。多元回归总结分析结果显示携带污染、非线性的差异均无统计学意义(P>0.01)，试剂线性能力良好，携带污染率低，能较好地满足临床常规检测要求。

稀土元素具有重要的指示性作用，可以判断地层和矿体成因及物质来源[10，12]。据徐红伟(2009)等研究，矿区蚀变岩稀土配分曲线与花岗岩接近一致，反映出二者在成因上存在密切关系。

与传统的评价方案相比，EP10-A2文件提供的评价方法需要的数据少，时间短，可操作性强，能完成传统评价方法不具备的非线性度和漂移度检验，提供了帮助实验室对实验方法或分析仪器进行线性、偏差、精密度等方面进行初步评价的一种简单方法，但此文件评价方法的结果仅建立于初步评价的基础之上，忽略了很多影响因素。SA是一种新的广泛、有效的肿瘤标志物，因此通过 NCCLS EP-10文件的初步评价后应参考NCCLS的其他文件，如EP5、EP6、EP7及EP9等文件进一步对试剂盒的空白吸光度及变化率、检测限、分析灵敏度、精密度、准确度、线性范围、干扰试验和稳定性等性能进行评价[7-11]。

参考文献

[1]VARKI A. Sialic acids in human health and disease [J]. Trends Mol Med，2008，14(8)：351-360.

[2]张嘉宁，汪淑晶. 唾液酸生物学与人类健康和疾病[J]. 生命科学，2011，23(7)：678-684.

[3]刘沛，王舒，李变荣. 血清唾液酸在恶性肿瘤诊断中的临床应用 [J]. 检验医学与临床，2012，9(6)：687-688.

[4]National Committee for Clinical Laboratory Standards．Preliminary evaluation of quantitative clinical laboratory methods [S]．EP10-A2，NCCLS，2002.

[5]程明刚，程静，刘香萍，等．应用NCCLS EP10-A2文件初步评价定量钙测定的性能[J]．热带医学杂志，2010，10(11)：1289-1292.

[6]刘怀平，刘树业．实验室认可中封闭检测系统的性能验证及评价[J]．现代预防医学，2011，38(19)：3981- 3984．

[7]张葵．定量检测系统方法学性能验证实验的基本方法[J]．临床检验杂志，2009，27(5)：321-323．

[8]National Committee for Clinical Laboratory Standards. Evaluation of precision performance of clinical chemistry devices； approved guideline[S]. EP5-A2，NCCLS，1999.

[9]National Committee for Clinical Laboratory Standards. Evaluation of the linearity of quantitative analytical methods： a statistical approach; approved guideline[S]. EP6-A，NCCLS，2003.

[10]National Committee for Clinical Laboratory Standards. Method comparison and bias estimation using patient samples： approved guideline[S]. EP9-A2，NCCLS，2002.

[11]National Committee for Clinical Laboratory Standards. Interference testing in clinical chemistry： approved guideline[S]. EP7-A2，NCCLS，2002.

(本文编辑：龚晓霖)

上海市临床检验二级管理网络年中总结会召开

2015年度上海市临床检验二级管理网络年中总结会8月9日下午在南昌召开。因上海市临床检验二级管理网络各区县负责人、中心各专业科室负责人均作为上海代表参加华东六省一市第六次检验医学学术会议，故本次会议合理利用华东六省一市会议间隙举办。会议由中心主任助理兼质控业务科主任张健主持。本次会议主要内容包括各区县二级管理网络负责人做2015年度上半年二级管理网络工作总结、2015年度下半年工作计划报告以及对区域化集中检测及独立实验室设置等一些焦点问题进行讨论。

在各区县总结中提到了一些基层医院的共性问题，比如基层医院对仪器性能验证的方式方法不了解甚至无从下手，基层医院对实验室人员的能力评估内容较为简单、空洞。就这点而言，中心在前期对基层医院的调研中，已经了解并针对这些问题起草了一些配套文件，目前相关文件基本完稿，正待专家讨论后及早发布以解决医院的燃眉之急。此外，有部分区县提出基层医院信息系统落后，尚有较多医院无LIS系统；民营医院两极分化严重，甚至有民营医院实验室伪造检验结果；部分医院外送样本的管理欠缺，危急值的项目多为外送等问题，这些问题都值得进一步探讨和专题研究。

关于集中化检测的问题，大部分区县认为这是发展趋势。从目前已运作的区县来看效果很好，但也存在一定的问题。

各区县都认为独立实验室作为医疗机构临床实验室的补充，有其存在的意义，但应加强管理。建议卫生监督部门加大监督力度，审批过程中应有技术部门介入。

(本刊编辑部)