MicroRNA-150基因敲除小鼠鉴定

曹倩文宋天姣王娜田雨郑全辉①

(华北理工大学预防医学院；①基础医学唐山市慢性病临床基础研究重点实验室河北唐山063000)

[摘要]①目的通过基因组特异PCR扩增鉴定MicroRNA-150基因敲除小鼠。②方法利用碱裂解法提取鼠尾基因组DNA，在小鼠MicroRNA-150基因两端设计特异引物，PCR扩增检测。③结果正常对照小鼠DNA经PCR扩增产生长度为866个碱基对的DNA片段，MicroRNA-150基因敲除小鼠产生长度为262个碱基对的DNA片段。④结论通过碱裂解法提取鼠尾DNA并采用特异引物扩增能够准确鉴定MicroRNA-150基因敲除小鼠。

[关键词]MicroRNA-150基因敲除基因鉴定

[中图分类号]Q 784[文献标识码]A

【基金项目】华北理工大学大学生创新创业训练计划项目(编号：X2015153)；国家自然科学

【通讯作者】郑全辉。

Genomic identification of microRNA-150 knockout miceCAOQianwen,SONGTianjiao,WANGNa,etal(CollegeofPublicHealth,NorthChinaUniversityofScienceandTechnology，Tangshan063000,China)

ABSTRACT[]ObjectiveTo identify microRNA-150 knockout mice(miR-150KO )by genomic PCR amplification.MethodsMouse tail DNA was extracted by alkaline lysis,and amplified by PCR using primers that designed at each end of the miR-150 gene.ResultsWild type ( WT) mice produced a 866 base pair DNA fragment,while miR-150KO mice produced a 262 base pair DNA fragment after mouse tail DNA PCR amplification.ConclusionMiR-150KO mice can be accurately identified by PCR amplification,which using alkaline lysis extracted genomic DNA and miR-150 gene specific primers.

[KEYWORDS]MicroRNA-150.Gene knockout.Genomic identification

MicroRNA-150(miR-150)是一个长度为22个核苷酸的微小RNA，在骨髓、脾脏、淋巴结等免疫器官中显著表达，其异常表达会导致多种与免疫系统和造血系统相关的疾病发生[1]。笔者从美国Jackson 实验室引入miR-150基因敲除(miR-150 knock out,miR-150KO)和野生型对照(WT)C57 BL/6小鼠，研究miR-150对免疫系统发育和功能的影响。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1主要试剂。NaOH、Tris等生化试剂购自北京经日今典科技有限公司，Taq DNA Polymerase,10×Taq Buffer,dNTP，25mM MgCL2等购自Thermo Fisher Scientific 公司；DNA Marker 2000购自北京百泰克生物技术有限公司；琼脂糖购自Gene Company Limited；GoldviewⅠ型核酸染色剂购自北京索莱宝科技有限公司。引物为上海生工公司合成。

1.1.2小鼠。C57BL/6背景的miR-150KO小鼠和野生型对照(WT)C57BL/6小鼠购自美国Jackson实验室，并在华北理工大学SPF级实验室小鼠房繁育。

1.2实验方法

1.2.1鼠尾DNA提取。剪鼠尾2～3mm至EP管，加入75μL DNA提取液/管(25mM NaOH/0.2mM EDTA)；将加有DNA提取液的EP管上置于“漂”上，98℃孵育1h，充分裂解鼠尾。……