孟志强　郭斌　吴若丹　白云鹤　周三国

【摘要】 目的 通过对比分析热休克蛋白（HSP27）表达的变化并探讨甲基强的松龙（MP）在预防脊髓缺血再灌注损伤脊髓中的最佳用药时间。方法 30只 SD大鼠， 分为甲、乙、丙、丁、戊组， 每组6只。甲组暴露腹主动脉， 无其他治疗；乙、丙、丁、戊组关闭30 min主动脉造成脊髓缺血再灌注损伤， 乙组在损伤前30 min尾静脉注射生理盐水， 丙、丁、戊组分别与损伤前30、60、180 min尾静脉注射生理30 mg/kg的MP。甲组于术后、其他组于损伤后180 min行免疫组化染色检测， 观察对比各组HSP27的相对含量。结果 HSP27相对含量比较， 乙组和戊组比较， 差异无统计学意义（P>0.05）；丙组和丁组比较， 差异无统计学意义（P>0.05）；丙组和丁组的HSP27表达强于乙组和戊组， 比较差异均具有统计学意义（P<0.05）。结论 在脊髓缺血再灌注损伤前30 min应用MP， 可减轻脊髓缺血再灌注损伤， 提升HSP27的表达强度， 具有极高的应用价值。

【关键词】 热休克蛋白；大鼠脊髓缺血再灌注损伤脊髓；甲基强的松龙

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.01.214

脊髓缺血再灌注损伤指的是脊髓功能没有在去除脊髓缺血因素后恢复正常， 严重情况下脊髓神经元发生不可逆的迟发性死亡。作为一种保护性蛋白， HSP27具有广泛且关键的作用， 能增强细胞在不利环境下的适应能力。相关的研究证实[1]， MP可增强急性脊髓损伤局部脊髓组织中的HSP27表达， 但其脊髓缺血再灌注损伤局部脊髓组织中HSP27表达的影响研究较少。本研究旨在通过对比分析HSP27表达的变化并探讨MP在预防脊髓缺血再灌注损伤脊髓中的最佳用药时间[2， 3]。现报告如下。

1 材料与方法

1. 1 材料 选用由某动物实验中心提供的30只纯种SD大鼠作为研究对象， 均为雄性， 4月龄， 平均体重（252±18）g。随机将其分为甲、乙、丙、丁、戊组， 每组6只。甲组暴露腹主动脉， 无其他治疗；乙、丙、丁、戊组关闭30 min主动脉造成脊髓缺血再灌注损伤， 乙组在损伤前30 min尾静脉注射生理盐水， 丙、丁、戊组分别与损伤前30、60、180 min尾静脉注射生理30 mg/kg的MP。

1. 2 动物模型制作及标本制备 脊髓缺血再灌注损伤动物模型通过关闭主动脉的方式建立[4， 5]， 腹腔麻醉以6 ml/kg注射7%水合氯醛完成。按照无菌操作打开腹腔， 暴露主动脉， 于右肾动脉分支下、左肾动脉分支， 夹闭腹主动脉， 停止血流， 维持30 min。甲组大鼠于术后、其他组大鼠于缺血再灌注后180 min处死大鼠， 取圆锥上l cm处的脊髓做常规石蜡横切片， 每个标本4张， 3张备用， 1张行免疫组化染色检测。

1. 3 组织学检查 每只大鼠取1张切片行免疫组化染色， 采用计算机图像分析系统测量， 400倍光镜下6个不同视野中的染色阳性物质的吸光度A， 以吸光度表示HSP27的相对含量。

1. 4 统计学方法 采用SPSS20.0统计学软件对数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验；免疫组化阳性物质吸光度A， 用LSD分析组间差异。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

组间吸光度值差异用LSD分析， 乙组和戊组差异无统计学意义（P>0.05）， 丙组和丁组差异无统计学意义（P>0.05）， 且丙组和丁组的HSP27表达强于乙组和戊组， 比较差异均具有统计学意义（P<0.05）。

3 讨论

有多种途径和因素可导致脊髓缺血再灌注损伤， 归纳包括：①细胞内Ca2+在兴奋性氨基酸的诱导下大量堆积， 引发介导神经细胞的凋亡；②细胞膜的组成成分（酶、RNA、DNA）与细胞内形成的氧自由基共价结合， 引发细胞膜功能和结构的变化；③白细胞在白细胞介素-1、白细胞介素-8以及细胞间黏附分子-1水平升高的情况下， 其不断聚集并相互粘附， 引发炎症。临床上尚无治疗脊髓缺血再灌注损伤的特效药， MP、地塞米松可在损伤早期有效减轻炎症反应。近年来， 不断有治疗脊髓缺血再灌注损伤的新药， 比如强力霉素、右羟吗喃、尼莫地平、放线菌酮环己酰亚胺等， 尽管在促进神经功能恢复上有所疗效， 但其他疗效并不明显， 有待进一步研究。而MP的应用较为广泛， 其疗效明显， 其抗炎作用是氢化可的松的4倍、盐皮质激素的5倍。MP是一种合成糖皮质激素， 不仅能抗氧化、抗炎， 还能减少兴奋性氨基酸的释放和细胞内Ca2+的水平， 在脊髓缺血再灌注损伤的临床治疗中具有广泛的应用， 但学界对MP在预防脊髓缺血再灌注损伤的作用研究尚少。

HSP27是一种小分子热休克蛋白， 能保护细胞， 增强细胞的适应力， 可用染色阳性物质的吸光度A表示其表达强度， 学界通常以HSP27的表达强度来量化MP的疗效。在本次研究中， HSP27表达强度比较， 乙组和戊组差异无统计学意义（P>0.05）， 丙组和丁组差异无统计学意义（P>0.05）， 且丙组和丁组的HSP27表达强于乙组和戊组， 比较差异均具有统计学意义（P<0.05）。

综上所述， 在脊髓缺血再灌注损伤前30 min应用MP， 可减轻脊髓缺血再灌注损伤， 提升HSP27的表达强度， 具有极高的应用价值。

参考文献

[1] 齐兵献.参附注射液对大鼠脊髓缺血再灌注损伤NF-κBp65和IκB-α影响的实验研究.甘肃中医学院， 2012.

[2] 周若南.甲基强的松龙上调缺血再灌注损伤脊髓热休克蛋白27表达的剂量研究.郑州大学， 2010.

[3] 张子峰， 白玉树， 侯铁胜， 等.甲基强的松龙与钙蛋白酶抑制剂对大鼠缺血再灌注损伤脊髓保护作用比较.中国矫形外科杂志， 2011， 19（12）：1026-1029.

[4] 孟志强.甲泼尼松龙预干预脊髓缺血再灌注损伤对Caspase-3表达的影响.郑州大学， 2011.

[5] 王文刚， 夏磊， 刘国强， 等.早期应用甲基强的松龙上调受损脊髓细胞内hsp27蛋白的表达医药论坛杂志， 2007， 28（3）：6-8.

[收稿日期：2015-07-17]