■郭琳娜 王雁萍 袁世超 杨慧晓

（1.郑州大学离子束生物工程省重点实验室，河南郑州450052；2.安图生物工程科技股份有限公司，河南郑州450016）

近年来，随着我国畜牧业的持续发展以及种植业的积极调整使得苜蓿大规模种植及产业化开发快速推广成为可能。苜蓿自然附着戊糖片球菌、乳酸乳球菌、肠系明串珠菌、植物乳杆菌等乳酸菌，这些乳酸菌在青贮发酵过程中起着重要作用。

然而，苜蓿自然附生的乳酸菌量较少，为1×101～3×105CFU/(g·FW)[1]，难以达到所需数量，加之苜蓿可溶性糖含量低，一般在3.72%（DM）左右，无法达到发酵成优质青贮饲料所需的最低含糖量9.5%（DM）[2]，使得苜蓿在青贮过程中需要使用添加剂来提高青贮品质。乳酸菌是绿色环保的生物添加剂，筛选高抑菌活性及产酸性能，尤其是在低可溶性糖环境中产酸能力较强的优良乳酸菌，能够降低青贮饲料的pH值，有利于抑制有害菌的生长，从而达到长期保存饲料营养物质的目的[3]。

本试验旨在从上海地区苜蓿附生乳酸菌中筛选出抑菌活性较好，在低可溶性糖环境中产酸能力较强的优良菌株，为苜蓿青贮用乳酸菌添加剂的研究和开发提供参考。

1 实验材料

1.1 实验菌株

乳酸菌菌株共67株，均为实验室保存，分离自上海地区苜蓿的35个样品，其品种包括巨人802、金达、王冠、CW608、ST201、德福、AB1700、WL525、丰宝、射手等。

1.2 指示菌株

沙门氏菌(Salmonella enterica)、大肠杆菌(Escherichia coli)、李斯特氏菌(Listeriosis)，为实验室保存。

1.3 试剂及培养基

MRS培养基，NA培养基，过氧化氢酶，API 50。

2 实验方法

2.1 抑菌活性的测定

将保存于-80℃冰箱中的67株乳酸菌活化后，接种到MRS液体培养基，30℃培养24 h，制备乳酸菌发酵上清液(12 000 r/min、4℃离心10 min)；……