奥美拉唑对大鼠反流性食管黏膜损伤后IL-6及TNF-α的影响

张萌,黄刚,周志刚,杨金良

(河北医科大学第三医院胸外科,河北石家庄050051)

摘要：目的：观察奥美拉唑对反流性食管黏膜损伤后大鼠血浆和食管组织中细胞因子IL-6及TNF-α的影响，探讨奥美拉唑治疗反流性食管炎的作用机制。方法:选用健康雄性SD大鼠，体重220～250g，随机将动物分为5组，假手术组、单纯胃食管反流动物模型组(模型组)、模型组+奥美拉唑低剂量组、中剂量组、高剂量组。分别取食管标本肉眼观察黏膜状况。应用ELISA方法检测大鼠血浆和食管组织中细胞因子IL-6及TNF-α的变化。结果:假手术组大鼠食管颜色淡红，有光泽，黏膜光滑。模型组大鼠食管颜色变淡白，黏膜粗糙、增厚、皱襞灰白色斑块状增生。与模型组比较，奥美拉唑低、中、高剂量治疗组大鼠食管病变明显减轻。ELISA检测结果显示，假手术组大鼠血浆和食管组织有一定IL-6及TNF-α的基础含量。模型组大鼠血浆和食管组织IL-6及TNF-α含量明显升高，奥美拉唑治疗组大鼠血浆和食管组织IL-6及TNF-α含量明显降低。结论:奥美拉唑明显降低反流性食管黏膜损伤后大鼠血浆和食管组织炎症因子IL-6及TNF-α的含量，可能是其改善食管局部及外周炎症反应、治疗反流性食管炎的重要作用机制。

关键词：胃酸反流;反流性食管损伤;奥美拉唑;IL-6;TNF-α

文章编号：1006-6233(2015)11-1768-03

基金项目：*河北省医学科学研究重点课题，(编号：ZD20140515)

通讯作者：*E-mail:jinliangyang1963@sina.com

文献标识码：A

Effects of Omeprazole on the Level of IL-6 and TNF-α in the Rats Model

of Esophageal Mucosal Injury Induced by Reflux of Acid

ZHANGMeng,HUANGGang,ZHOUZhigang,etal

(The Third Hospital of Hebei Medical University,

Hebei Shijiazhuang 050051, China)

Abstract：Objective: To observe the effect of omeprazole on the level of IL-6 and TNF-α in the rats model of esophageal mucosal injury induced by reflux of acid. Method: Healthy male SD rats weighing 220 to 250g were randomly divided into 5 groups: sham-operated group(sham), gastroesophageal reflux group (model), omeprazole low dose, middle dose and high dose groups. Rat models of reflux esophagitis were induced by single acid reflux. The contents of IL-6 and TNF-α were detected by ELISA staining. Result: The esophagus of rat was erythroid and lustrous, with glossy mucosal membranes in sham group. Compared with that of the sham group, the esophagus presented light white and the esophageal mucosal membrane became rough, thicken, grey plaque-like proliferation in rats of model group. Compared with that of model group, above the changes were significantly decreased in omeprazole treatment groups. Compared with that of the sham group, the contents of IL-6 and TNF-α were significantly increased in model group. Compared with thats of the model group, the contents of IL-6 and TNF-α were significantly decreased in treatment of omeprazole group. Conclusion: It could be concluded that omeprazole could decrease the esophgeal mucosal injury induced by reflux of acid by decrease the contents of IL-6 and TNF-α.

Key words: Gastric acid reflux;Reflux esophagitis;Omeprazole;IL-6;TNF-α

反流性食管炎(reflux esophagitis, RE)是由于食管廓清能力下降、食管下括约肌功能异常、胃酸以及胆汁等多因素引发的一种疾病。其中胃酸对食管黏膜的直接或/和间接损害是导致RE的病理基础[1～3]。我们前期研究表明，奥美拉唑可通过下调细胞增殖相关基因PCNA、CyclinD1和CDK4蛋白表达，上调p21蛋白表达，发挥治疗反流性食管损伤的作用[4]。本研究应用反流性食管黏膜损伤大鼠模型，观察奥美拉唑对反流食管黏膜损伤的作用，同时观察其对反流性管黏膜损伤后大鼠血浆和食管组织中细胞因子IL-6及TNF-α的影响。

1材料与方法

1.1实验动物及分组:健康雄性SD大鼠75只，体重220～250g，由河北省实验动物中心提供，动物合格证号：1306088。大鼠购入后适应环境1周，分笼饲养，自由进食标准饲料及饮水。随机将大鼠分为5组：假手术组、胃食管反流动物模型组(模型组)、奥美拉唑低、中、高剂量组，每组15只。饲养前将饲养室用紫外线照射消毒，饲养笼用过氧乙酸消毒，室温保持恒温(23±2)℃。

1．2药品与试剂:奥美拉唑胶囊(浙江医药股份有限公司新昌制药厂)。IL-6 ELISA试剂盒(北京义翘神州生物技术有限公司)，TNF-α ELISA试剂盒(上海西唐生物科技有限公司)。

1．3模型制备及给药:术前大鼠禁食24h，禁水2h。大鼠腹腔注射10%水合氯醛(30mL/kg)麻醉，固定于手术台上，备皮消毒后取上腹部正中切口进腹，分离食管下段神经和血管，采用食管下段与胃底吻合术，于胃大弯侧食管下段(距胃食管交接部0.5～1.5cm处)和胃底近食管下段处分别做1.0cm切口行侧侧吻合。注意观察吻合口是否畅通或有无渗液。假手术组大鼠上腹部正中切口，暴露胃食管于腹腔外约10min后关闭腹腔。术后禁食48h，饮水，48h后常规喂养。于术后第6天分别将奥美拉唑低剂量(10mg)、中剂量(20mg)、高剂量(40mg)给大鼠灌胃，假手术组和模型组大鼠给予等容量的生理盐水，连续给药8周。水合氯醛麻醉下，抽取大鼠腹主动脉血，立即灌入EDTA-2钠抗凝耦合剂中，静置30min后，放入2℃离心机中，以1000r/min离心15min，取上层血浆，放入-20℃冰箱中备用。取食管下段(包括吻合口)进行纵行剖开，用冰生理盐水清洗食管，肉眼观察黏膜状况，然后迅速放入液氮罐内冰冻保存备用。IL-6和TNF-α的测定按照试剂盒说明书进行。

2结果

2．1食管大体形态变化:假手术组大鼠食管颜色淡红，有光泽，黏膜光滑。模型组大鼠食管颜色变淡白，黏膜粗糙、增厚、皱襞灰白色斑块状增生。与模型组比较，奥美拉唑低、中、高剂量治疗组大鼠食管病变明显减轻。

2．2食管组织及血浆IL-6的变化:与假手术组比较，模型组大鼠食管组织及血浆IL-6的含量明显升高，与模型组比较，奥美拉唑治疗组大鼠食管组织及血浆IL-6的含量明显降低，见表1。

2．3食管组织及血浆TNF-α的变化:与假手术组比较，模型组大鼠食管组织及血浆TNF-α的含量明显升高，与模型组比较，奥美拉唑治疗组大鼠食管组织及血浆的含量TNF-α明显降低，见表2。

表1　奥美拉唑对反流性食管损伤后食管及

与模型：*P<0.05，**P<0.01

表2　奥美拉唑对反流性食管损伤后食管及

与模型：*P<0.05，**P<0.01

3讨论

反流性食管炎(RE)是由于食管胃连接部预防反流机制障碍导致胃内容物反流入食管引起的食管黏膜损伤，该病属于胃食管反流病(GERD),以食管下段出现黏膜糜烂、溃疡为特征[5]。本实验采用胃食管反流手术方式复制反流性食管黏膜损伤的大鼠模型，结果显示，模型动物均出现食管黏膜损伤，黏膜粗糙、增厚、皱襞灰白色斑块状增生，表明模型复制成功。

在胃食管反流病发生发展过程中，炎症因子的影响起重要的作用，同时也存在着免疫系统促进炎症和抑制炎症机制的调控失衡[6]，因此，胃食管反流病发生发展过程中的免疫调控机制，逐渐受到关注和重视，如其中的白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)。IL-6主要由单核-吞噬细胞、血管内皮细胞、纤维母细胞等多种细胞受白细胞介素-1(IL-1)和少量TNF刺激时合成的细胞因子，基础和临床研究均表明，机体许多炎症反应均与IL-6的参与有关，但是关于IL-6在反流性食管损伤过程中变化情况的研究还比较少。本实验应用反流性食管黏膜损伤大鼠模型研究结果表明，模型组大鼠食管组织及血浆IL-6的含量明显升高，提示IL-6可能是通过诱导中性粒细胞活化、产生活性氧等作用，进一步影响食管平滑肌的张力，促使反流性食管炎的发生及恶化。同时表明奥美拉唑通过降低大鼠食管组织及血浆中IL-6的含量，而发挥其治疗反流性食管损伤的作用。

TNF-α主要由活化的单核/巨噬细胞产生，能抑制和杀伤肿瘤细胞，促进中性粒细胞吞噬，抗感染，引起发热，诱导肝细胞急性期蛋白合成，在炎症反应、细胞免疫、肿瘤免疫等多种生理、病理过程中发挥着关键作用，同时还参与某些自身免疫性疾病的病生理损伤。Yamaguchi等[7]应用大鼠急性反流性食管炎模型实验研究也证明，由于胃反流物的刺激，食管黏膜中TNF-α的含量升高，并诱导中性粒细胞活化，进而产生活性氧及脂质过氧化作用，导致食管炎症反应的发生。本实验结果显示，模型组大鼠食管组织及血浆TNF-α的含量明显升高，经奥美拉唑治疗后，大鼠食管组织及血浆TNF-α的含量明显降低，食管黏膜组织损伤程度明显减轻。

总之，通过上述实验研究表明，奥美拉唑可明显降低反流性食管黏膜损伤后大鼠血浆和食管组织炎症因子IL-6及TNF-α的含量，这可能是其改善食管局部及外周炎症反应、治疗反流性食管炎的重要作用机制。其详细的作用机制有待于进一步深入研究。

参考文献:

[1]Galmiche J P, Janssens J. The pathophysiology of gastroesophageal reflux disease: an overview[J].Scand Gastroenterol, 1995, 2(1): 71～77.

[2]Pettit M. Treatment of gastroesophaheal reflux disease[J].Pharm World Sci, 2005, 27(6):432～437.

[3]Pursnani K G, Mohiuddin M A, Geisinger K R, et al. Experimental study of acid burned and acute oesophagitis[J].Br Surg, 1998, 85(5)：677～682.

[4]张萌, 黄刚,周志刚,等.奥美拉唑对大鼠反流性食管黏膜损伤后细胞增殖相关基因表达的影响[J].河北医药,2014.

[5]中华医学会消化内镜学分会.反流性食管炎诊断及治疗指南(2003)[J].中华消化内镜杂志，2004.21(4)：221～222.

[6]Vieth M, Kulig M, Leodolter A, et al. Histological effects of esomeprazole therapy on the squamous epithelium of the distal oesophagus[J].Aliment Pharmacol Ther, 2006,23(2):313～319.

[7]Yamaguchi T, Yoshida N, Tomatsuri N, et al. Cytokine-induced neutrophil accumulation in the pathogenesis of acute reflux esophagitis in rats[J].Int Mol Med, 2005,16(1):71～77.

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