陈度煌

（福建省淡水水产研究所，福建福州 350002）

罗非鱼是我国淡水养殖的主要水产品之一。研究表明，投喂蚕豆可使罗非鱼肉质变紧硬而爽脆，不易煮烂，切成鱼丝不易拉断，韧性和咀嚼性增加，风味独特，是改善罗非鱼肉质的一种独特方式，有利于罗非鱼加工和出口，显著提高了养殖的经 济 效 益 （ 伦 峰 ，2006；Grigorakis 和 Alexis，2005）。而目前有关投喂蚕豆对鱼体免疫力影响的研究却鲜见报道。本试验用浸泡蚕豆、配合饲料饲养罗非鱼，研究投喂蚕豆对罗非鱼肝损伤及非特异性免疫功能的影响，以期为更合理使用蚕豆进行肉质脆化提供理论参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料 试验用新吉富罗非鱼（NEW GIFT，Oreochromis niloticus）由福建省淡水水产研究所榕桥试验基地提供，初始体重为 （118.62±10.28）g，每桶放养 10 尾。

1.2 试验设计 试验设两个处理：试验组投喂浸泡蚕豆，对照组投喂配合饲料，每组设3个重复。饵料营养水平测定值如表1所示。

表1 饵料营养水平 %

1.3 饲养管理 试验在玻璃钢圆桶中进行，每个圆桶内径100 cm，高度90 cm，水深60～70 cm，使用小循环系统使其保持微流水状态。试验开始前，罗非鱼用3%食盐水消毒后放入暂养池，进行为期7 d左右的适应性驯化，待鱼适应后正式试验。采取固定人员专门管理：

（1）饲料和蚕豆严格按组投喂，投喂前将蚕豆于1%食盐水中浸泡24 h。每日投饵2次，投喂时间一般为上午 7∶00 ～ 7∶30，下午 17∶00 ～ 17∶30。投饲量根据鱼摄食状况而定，一般为鱼体重量的3%～4%，详细记录各组别的实际投饵量。

（2）每天定时测定水温。溶解氧，记录鱼活动情况，试验期间水温维持在26.0～31.5℃，溶解氧5.0～ 7.0 mg/L.。

（3）试验用水为经过曝气的自来水，每天进行加换水，排污，一般每天换水量在30%～40%，试验时间为60 d。

1.4 样品采集 试验期满罗非鱼禁食24 h后，参考白洁（2008）的方法适当修改，每桶取样5尾，用一次性注射器进行心脏采血，置于1.5 mL离心管内，于室温下静置2 h，然后放到4℃冰箱16 h，再以2500 r/min离心析出血清，-40℃保存，备用待测。

1.5 测定指标和方法 天冬氨酸转氨酶（AST）、丙氨酸转氨酶（ALT）、腺苷脱氨酶（ADA）、乳酸脱氢酶 （LDH）、 酸性磷酸酶 （ACP）、 碱性磷酸酶（AKP）、髓过氧化物酶（MPO）、溶菌酶（LSZ）均采用试剂盒测定，测试盒购自南京建成科技有限公司，具体操作方法及计算方法参照试剂盒说明书。

1.6 数据统计与分析 试验结果采用 “平均值±标准差”表示。用SPSS 17.0对数据进行方差分析，显著性水平为0.05。

2 结果与分析

2.1 投喂蚕豆对罗非鱼肝损伤的影响 由表2可见，投喂蚕豆组的罗非鱼血清AST、ALT和ADA活性分别较对照组提高13.67%、12.93%、19.12%（P ＜ 0.05），LDH 活性无显著变化（P ＞ 0.05）。

表2 投喂蚕豆对罗非鱼肝损伤的影响

2.2 投喂蚕豆对罗非鱼非特异性免疫功能的影响 由表3可见，投喂蚕豆组的血清ACP和AKP活性与对照组相比，分别降低22.96%、19.70%（P＜0.05），MPO和LSZ活性虽也下降，但差异不显著（P＞0.05），说明长期投喂蚕豆一定程度上降低了罗非鱼非特异性免疫功能。

表3 投喂蚕豆对罗非鱼非特异性免疫功能的影响

3 讨论

3.1 投喂蚕豆对罗非鱼肝损伤的影响 天冬氨酸转氨酶（AST）和丙氨酸转氨酶（ALT）是水产动物血清中两种重要的转氨酶。在正常代谢过程中，血清中AST和ALT活性值都会维持一定水平，当机体组织中毒、发生病变，或者受损伤的组织范围较大，可引起血清中AST和ALT浓度上升，活性突然持续性增强。当肝细胞受到外来物质的损伤时，细胞膜的通透性加大，大量ALT和AST渗入血液，肝的ALT和AST活性明显下降，而血液中ALT和AST活性升高（陈鹏飞等，2005）。血清腺苷脱氨酸（ADA）主要来源于肝脏，因其为肝细胞的胞浆酶，所以任何原因所造成的肝细胞损伤，其肝细胞膜的通透性均会增强，致使血清中的ADA酶的活性升高，故该酶可以作为反映肝实质损伤的指标。乳酸脱氢酶（LDH）是糖的无氧酵解和糖异生的重要酶系之一，广泛存在于心脏、肝脏、肺以及其他各组织内，组织一经损伤血清中该酶即见升高，肝细胞损伤或者坏死后，会向血液释入大量的 LDH（贺丽虹等，2004；惠天朝等，2000）。

本试验发现，投喂蚕豆使得鱼体血清中肝损伤指标AST、ALT和ADA活性显著上升，可能是肝细胞膜功能的完整性遭到破坏，影响膜的流动性和其他各项功能，进而损害了罗非鱼肝脏功能，这可能是蚕豆中的某种特殊化学因子起作用导致的。而LDH活性在试验期内与对照组相比变化不大，原因有待进一步研究。

3.2 投喂蚕豆对罗非鱼非特异性免疫功能的影响 鱼类为较低等变温脊椎动物，其特异性免疫应答相对低下，而非特异性免疫系统在其防御病原体感染中具有非常重要的意义 （Tonya等，2000）。 酸性磷酸酶（ACP）、碱性磷酸酶（AKP）、髓过氧化物酶（MPO）、溶菌酶（LSZ）是评价鱼类非特异性免疫力的常用指标。其中，ACP是水产动物体内公认的巨噬细胞溶酶体的标志酶，在体内直接参与磷酸基团的转移和代谢，其活力的高低反映了巨噬细胞的激活程度（李丽娟等，2013）。同时，ACP也是吞噬溶酶体的重要组成部分，在血细胞进行吞噬和包囊反应时，会释放酸性磷酸酶。

AKP是磷酸酶的一种，血清中的AKP主要来源于肝脏和骨骼，能将对应底物去磷酸化，生成磷酸根离子和自由的羟基，直接参与磷酸基团的转移，以及钙磷代谢。碱性磷酸酶能够通过改变病原体的表面结构，增强机体对病原体的识别和吞噬能力，起调理素的作用，加速吞噬细胞的吞噬和病原体的降解速度，进而提高鱼体的抗病力，可作为机体免疫标志酶（王玲等，2008）。

MPO是鱼体内一种重要的氧化酶，它是由中性粒细胞、单核细胞和某些组织的巨噬细胞分泌的血红素蛋白酶，主要存在于嗜中性粒细胞和单核细胞中。吴越等（2005）研究表明，MPO能催化过氧化氢与氯反应，产生次氯酸，具有很强的抗微生物作用，可直接影响机体的免疫功能。

LSZ是水产动物体内一种重要的非特异性免疫因子，存在于鱼体的吞噬细胞和血清中，对病原体有重要的防御作用。溶菌酶在机体免疫过程中，通过催化水解细菌细胞壁黏肽的乙酰胺基多糖，导致细菌裂解死亡。同时能清除其他抗菌因子作用后所残余的细菌细胞壁，并增强其他免疫因子的抗菌敏感性，诱导调节其他免疫因子的合成与分泌，共同抵制外来病原的入侵 （叶丹和连宾，2003）。鱼类血清溶菌酶活力的高低是衡量机体免疫状态的指标之一。血清溶菌酶活力提高，其免疫能力也相应提高。相反，鱼类血清溶菌酶的活性降低，机体免疫力降低。

本试验中，与普通配合饲料相比，用浸泡蚕豆投喂罗非鱼后，鱼体的非特异性免疫力降低，特别是ACP和AKP指标显著降低，可能是由于蚕豆适口性差，以及抗营养因子（蛋白酶抑制剂、单宁等）的存在。用蚕豆作为单一饵料脆化罗非鱼肉质，鱼体摄食量减少，营养不平衡，胃肠道各种消化酶活力降低，对营养物质的消化吸收及利用能力也降低，使得脆化期间鱼体所需营养得不到满足，从表观上看，鱼体的生长受到抑制，同时，各种非特异性免疫酶的合成和分泌受到了抑制，降低了鱼体的免疫力，削弱了鱼体的抗病能力。而MPO和LSZ活性虽也有下降趋势，但差异不显著，原因可能是试验时间还不够长，有条件的话，将做重复试验，延迟试验时间至90 d。

4 结论

本试验结果表明，以浸泡蚕豆饲养新吉富罗非鱼，虽可明显脆化罗非鱼肉质，但却一定程度上造成鱼体肝脏的损害，降低鱼体非特异性免疫功能。

[1]白洁.叶下珠对鱼类肝损伤保护机理的研究：[硕士学位论文][D].福州：福建农林大学，2008.

[2]陈鹏飞，杨德强，邹红.两种中草药组方对鲫鱼肝脏转氨酶的影响[J].饲料工业，2005，6：28 ～ 31.

[3]贺丽虹，孙绍永，黄建华.多糖在水产动物免疫促进方面的研究进展[J].河北渔业，2004，1（133）：1 ～ 2.

[4]惠天朝，施明华，朱荫媚.硒对罗非鱼慢性镉中毒肝抗氧化酶及转氨酶的影响[J].中国兽医学报，2000，20（3）：264 ～ 266.

[5]伦峰.蚕豆脆化草鱼、罗非鱼肉质的研究：[硕士学位论文][D].上海：上海水产大学，2006.

[6]李丽娟，龚全，权可艳，等.壳聚糖对黄颡鱼生长和非特异性免疫机能的影响[J].西南农业学报，2013，26（6）：2614 ～ 2619.

[7]王玲，胡俊杰，郭延生，等.中药免疫增强剂的研究进展及其在水产养殖中的应用[J].中国饲料添加剂，2008，3：36 ～ 39.

[8]吴越，王典，于晓军.髓过氧化物酶及其多态性与疾病的研究进展[J].免疫学杂志，2005，21（3）：89 ～ 92.

[9]叶丹，连宾.溶菌酶及其应用[J]，贵州科学，2003，21（3）：67 ～ 70.

[10]Grigorakis K，Alexis M N.Effects of fasting on the meat quality and flat deposition of commercial-size farmed gilthead sea bream SparusaurataL fed different dietary regimes[J].Aquaculture Nutrition，2005，11：341 ～ 344.

[11]Tonya L，Nichols，Chris A，et al.Transcriptional analysis of superoxide dismutase gene of Borrelia burgdorferi[J].FEMS microbiology letters，2000，183（1）：37 ～ 42.