心脑佳配方对酒精依赖大鼠肝损伤的保护作用

杜爱林李爽万佳1王丹朱峰1孟莉万光瑞

(新乡医学院生理学与神经生物学教研室，河南新乡453003)

摘要〔〕目的观察心脑佳配方对酒精依赖大鼠肝损伤的保护作用。方法45只SD雄性大鼠随机分为正常组、酒精依赖模型组、心脑佳配方小、中、大剂量组。用电镜观察肝组织超微结构的变化。检测血清低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)水平。结果电镜下观察到B组肝细胞内线粒体肿胀,脂滴数量增加;心脑配方小、中剂量组线粒体结构基本正常,部分肝细胞胞质内可见少量脂滴;心脑配方高剂量组肝细胞内线粒体数目增多。模型组大鼠血清LDL、TG、TC均高于正常组(P<0.05)；心脑配方小、中、大剂量组与模型组大鼠比较,血清LDL、TC、TG水平均有不同程度地降低；模型组大鼠血清HDL明显低于正常组大鼠(P<0.01)；心脑配方小、中、大剂量组与模型组大鼠比较，血清HDL均有不同程度地升高。结论心脑佳配方可明显改善大鼠因酒精依赖引起的肝组织损伤。

关键词〔〕心脑佳配方；酒精依赖；超微结构；甘油三酯

中图分类号〔〕R575.5；R285.5〔

基金项目：河南省科技厅基础与前沿研究项目(No.112300410053)

通讯作者：万光瑞(1962-)，男，硕士，教授，硕士生导师，主要从事药物成瘾工作。

1郑州大学

第一作者：杜爱林(1972-)，男，硕士，副教授，主要从事药物成瘾工作。

酒精滥用一直是全球范围内重要的公共健康问题。心脑佳配方由葛根、天麻等六味中药组成，是新乡医学院万光瑞教授从众多对心血管和大脑有保护作用的食药两用中药，按照现代中药药理研究遴选出作用强、安全、性能稳定的中药复方制剂。本文旨在为临床有效地治疗酒精依赖患者肝损伤寻找有效药物或功能性食品。

1材料与方法

1.1主要仪器和试剂透射电子显微镜(H-7500，日立)。心脑佳配方：自制。

1.2动物及分组郑州大学动物中心提供清洁级健康SD雄性大鼠45只〔许可证号：scxk(豫)2005-0001〕，体重120～160 g。分为正常组、模型组、心脑佳配方小、中、大剂量组。正常组大鼠正常饮食，其余各组大鼠饮含6%(V/V)酒精水溶液28 d〔1〕。酒精依赖模型组，食物正常。心脑佳配方小、中、大剂量组(总黄酮含量为260、520、780 mg)，心脑佳配方各组为相应药物掺入各组食物。进行28 d，水合氯醛麻醉,腹主动脉取血,分离血清,留取肝组织。

1.3透射电镜观察超微结构取大鼠肝组织样品，大小约1 mm3由新乡医学院电镜室协助完成。

1.4血清学检测大鼠腹主动脉取血,分离血清，由新乡市军分区医院检验科检测血清低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)。

2结果

2.1肝细胞超微结构的变化正常组肝细胞细胞核呈圆形或椭圆形，胞膜完整，核仁清晰，核膜清晰完整，线粒体形态正常，嵴结构清晰，细胞内偶见小脂滴。酒精依赖模型组部分细胞胞膜不完整，细胞核异染色质边集。肝细胞内线粒体肿胀变形，嵴断裂模糊，胞质内充满大量大小不一的脂滴。心脑佳配方低剂量组肝细胞内分布大小不等的脂滴。心脑佳配方中剂量组核膜清晰，线粒体结构基本正常，部分肝细胞胞质内可见少量脂滴。心脑佳配方高剂量组肝细胞内线粒体数目增多，脂滴少见。见图1。

2.2心脑佳配方对酒精依赖大鼠血清LDL、HDL、TC、TG水平的影响模型组大鼠血清LDL、TG、TC均高于正常组(P<0.05);而不同剂量的心脑佳配方组大鼠与模型组大鼠比较,血清LDL、TC、TG水平均有不同程度地降低。其中心脑配方中剂量组大鼠与模型组大鼠比较，血清LDL明显降低(P<0.01)，心脑配方小、大剂量组大鼠与模型组大鼠比较，血清LDL降低(P<0.05);配方小、中、大剂量组大鼠与模型组大鼠比较，血清TC降低(P<0.05),心脑配方小、大剂量组大鼠与模型组大鼠比较，血清TG降低(P<0.05),心脑配方大剂量组大鼠与模型组大鼠比较，血清TG明显降低(P<0.01)。模型组大鼠血清HDL明显低于正常组大鼠(P<0.01)；配方小剂量组大鼠与模型组大鼠比较，血清HDL升高(P<0.05),D、E组大鼠与模型组大鼠比较，血清HDL明显升高(P<0.01)。见表1。

图1　各组肝细胞超微结构(×12 000)

组别LDLHDLTCTG正常组2.29±0.142)0.54±0.162)1.72±0.081)0.71±0.161)模型组2.89±0.170.23±0.042.04±0.201.00±0.11低剂量组2.46±0.211)0.46±0.151)1.75±0.121)0.79±0.101)中剂量组2.45±0.132)0.40±0.032)1.77±0.471)0.75±0.181)高剂量组2.57±0.071)0.40±0.082)1.77±0.241)0.76±0.082)

与模型组比较：1)P<0.05，2)P<0.01

3讨论

酒精依赖相关基因在脑或肝组织中高度表达，涉及神经递质系统或乙醇代谢过程〔2，3〕。酒精性肝病发病机制复杂，一般认为，长期饮酒可使体内乙醛生成量增加，NADH/NAD的平衡改变而导致脂肪代谢和转运紊乱〔4〕。酒精在体内可通过动员外周脂肪分解，释放大量脂肪酸，促进肝脏TG合成增加〔5〕。此外，酒精可加重酒精代谢产物的肝毒性〔6〕，导致肝细胞脂肪摄取增多，促进脂肪肝的形成。患急性酒精性肝病时，肝细胞可出现轻微脂肪病变，表现为肝细胞内有脂滴沉积〔7〕， 线粒体肿胀，偶而出现巨大线粒体〔8，9〕，粗面内质网扩张断裂， 核糖体脱失。本试验中通过电镜观察肝细胞的超微结构改变 ，发现与正常组相比，表现出肝细胞脂肪变性的病理改变。 通过给予低剂量心脑佳配方组，肝细胞内脂滴沉积有不同程度地减少；而给予中、高剂量心脑佳配方组中，大鼠肝细胞内线粒体数目增多提示一定剂量的心脑佳配方能够通过促进线粒体增生，加快乙醇在体内的代谢过程，从而降低乙醇对肝细胞的损伤程度。心脑佳配方的这种作用可能与本配方中葛根、天麻等中药的总黄酮对慢性酒精性肝损伤具有显著防治作用有关。

本研究表明，酒精依赖模型机体脂质代谢紊乱程度明显加重；而对于过量饮酒所致的脂质代谢紊乱,心脑佳表现出良好的调节作用，心脑佳治疗组大鼠肝功能、血脂有不同程度地改善。其中，心脑佳中剂量组与低剂量组相比，疗效有显著提高；心脑佳高剂量组与中剂量组相比，疗效有所提高，但并不显著。心脑佳可明显改善肝组织超微结构的病理损伤， 对酒精造成的脂质代谢紊乱具有一定的调节作用。

4参考文献

1李菁，袁孝如，李跃华,等.酒精依赖大鼠模型建立〔J〕.中国药物依赖性杂志,2006；15(6)：433-6.

2Guo AY，Sun J，Jia P,etal.Network analysis of EtOH-related candidate genes〔J〕.Chem Biodivers，2010；7(5):1142-52.

3Zhang H，Zhang S，Liu L,etal.Synthesis of chiral 3-substituted phthalides by a sequential organocatalytic enantioselective aldol-lactonization reaction.Three-step synthesis of (S)-(-)-3-butylphthalide〔J〕.J Org Chem，2010；75(2):368-74.

4Paul LD，Springer D，Staack RF,etal.Cytochrome P450 isoenzymes involved in rat liver microsomal metabolism of californine and protopine〔J〕. Eur J Pharmacol，2004；485(1-3):69-79.

5张艾玲，梁惠,逄丹,等.海藻萜类化合物对大鼠急性酒精性肝损伤的保护作用研究〔J〕.中国食品学报，2008；8(3):23-7.

6闫爱春，葛丽平，薄爱华,等.丹红注射液对酒精性肝损伤的保护作用〔J〕.中国现代医学杂志，2008；18(21):3139-41.

7潘年松,杨果，张立实.乙醇诱导大鼠肝脏超微结构改变与护肝灵的干预〔J〕.华西药学杂志，2007；22(1):57-8.

8王丹,江瑛,张华,等.己酮可可碱对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝脏超微结构和酶组织化学的影响〔J〕.中国组织化学与细胞化学杂志，2007；16(1):28-33.

9冯琴，方志红，崔剑巍,等.葛根对大鼠酒精性肝损伤的干预作用〔J〕.上海中医药杂志，2007；41(4)：64-8.

〔2013-09-15修回〕

(编辑安冉冉/曹梦园)