赵大伟乔秀丽王斌孙丽梅杜丽荣王双侠柴宝丽张腾霄

（1.绥化学院食品与制药工程学院 黑龙江绥化 152061；2.黑龙江龙桂制药有限公司 黑龙江绥化 152061）

苍耳子-盐酸洛美沙星温度敏感原位凝胶剂的制备研究

赵大伟1乔秀丽1王斌1孙丽梅1杜丽荣2王双侠1柴宝丽1张腾霄1

（1.绥化学院食品与制药工程学院 黑龙江绥化 152061；
2.黑龙江龙桂制药有限公司 黑龙江绥化 152061）

以泊洛沙姆407、泊洛沙姆188等为凝胶剂基质制备苍耳子-盐酸洛美沙星温度敏感原位凝胶剂，研究不同组成基质的苍耳子-盐酸洛美沙星温度敏感原位凝胶剂的制备，并测定其胶凝温度、释放度。结果显示：以25%泊洛沙姆407，2%泊洛沙姆188为基质制备的盐苍耳子-酸洛美沙星温度敏感原位凝胶剂在胶凝温度、释放度等均较为理想。

原位凝胶；泊洛沙姆407；泊洛沙姆188；苍耳子；胶凝温度

原位凝胶剂系指以基质和药物制成的在通常状况下为液体，但当施加药物至患处后，由于环境因素的变化，如温度、离子组成和浓度、酸碱度（pH）等因素发生改变，高分子基质的基团或电荷的作用发生变化，从而使作为高分子聚合物的凝胶基质的空间结构发生改变，表现为黏度增大，进而会产生相变，由溶液态转变为半固态，通常称为发生胶凝。由于凝胶剂给药方便、无污染、吸收和见效快、具有缓释效果等，目前日益为药物制剂领域所重视。

菊科植物苍耳（Xanthium sibiricum Patr.）是近年来越来越多地受到关注的一种药用植物，目前作为中药主要应用的苍耳子是苍耳的干燥成熟果实，苍耳在我国大部分地区均有分布，在黑龙江省尤其分布广泛，在田间地头和草原等处生长较好，生物资源储量巨大，苍耳子作为中药具有对风寒头痛、鼻渊流涕、风疹、皮肤瘙痒、湿痹拘挛等较好作用而应用呈现普及之势；现代药理研究表明，苍耳子具有抗菌消炎、缓解风湿症状、止血、降低和控制血糖、降血压、提高呼吸系统兴奋性等作用[1,2]。目前苍耳子的化学成分主要有酯类、酚酸类、水溶性二萜苷、噻嗪双酮、大黄酚类等[3,4]。盐酸洛美沙星（Lomefloxacin Hydrochloride）属人工合成的氟喹诺酮类广谱抗生素，化学名为 (±)-1-乙基-6,8-二氟-1,4-二氢-7-(3-甲基-1-哌嗪基)-4-氧喹啉-3-羧酸盐酸盐。盐酸洛美沙星对于多种革兰阳性菌和格兰阴性菌均有抑菌效果，目前在临床上盐酸洛美沙星主要用于多种部位的敏感菌感染，如尿路感染、支气管感染、皮肤软组织感染、骨关节感染、细菌性前列腺炎、细菌性痢疾等。盐酸洛美沙星的抑菌机制是在于其能够抑制细菌DNA螺旋酶的活性，进而抑制细菌DNA的合成，从而起到了抑菌作用。盐酸洛美沙星作为开发研制较为成熟的广谱抗生素目前应用的较为普及，而苍耳子的抗炎、杀菌、止血功效也日渐受到重视，将盐酸洛美沙星和苍耳子提取物配伍使用，开发新型高效的可应用于人体多部位细菌感染、出血和炎症的新型原位凝胶剂，对于中药和化学药物应用的相结合，实现中药现代化是有益的尝试和探索。本文主要探讨以泊洛沙姆系列高聚物为主的不同组成的凝胶剂基质对于制备盐酸洛美沙星-苍耳子温敏原位凝胶剂的可行性研究，具体探讨凝胶剂基质的组成对于苍耳子-盐酸洛美沙星凝胶剂的胶凝温度、盐酸洛美沙星释放度的影响，确定制备上述凝胶剂的适宜基质。

一、仪器与材料

HJ-3型恒温磁力搅拌器(江苏省金坛市环宇科学仪器厂)；MS105电子天平(瑞士梅特勒仪器（中国）有限公司)；HH-8型数显恒温水浴锅(江苏省金坛环宇科学仪器厂)；UV-5800PC型紫外可见分光光度计（上海元析仪器有限公司）。

泊洛沙姆407（湖北远成赛创科技有限公司）；泊洛沙姆188（湖北远成赛创科技有限公司）；盐酸洛美沙星原料药（锦州九洋药业有限责任公司）；盐酸洛美沙星对照品（中国药品生物制品检定所）；苍耳子（黑龙江绥化市北林区采集）；溴甲酚绿（分析纯，天津市恒兴化学试剂有限责任公司）；氢氧化钠（分析纯，常州恒光化学试剂有限公司）；冰醋酸（分析纯，天津市优谱化学试剂有限公司）；醋酸钠（分析纯，天津市恒兴化学试剂有限责任公司）；五效蒸馏水（自制）；无水乙醇（分析纯，天津市滨海科迪化学试剂有限公司）、氯仿（分析纯，天津市康科德科技有限公司）；吐温-80（化学纯，天津市科密欧化学试剂有限公司）。

二、方法

（一）凝胶剂的制备。参考相关文献[5]，将处方量的泊洛沙姆407等精确称定，溶于一定量的冷水之中，置于冰箱中放置24h，将按处方量称取的盐酸洛美沙星原料药0.50g以适量的蒸馏水配制成水溶液，在磁力搅拌器上与凝胶基质搅拌混合，将干燥后的苍耳子粉碎成粗粉，以50%乙醇（5g：200mL）在回流装置60℃提取3h，过滤，乙醇提取液浓缩，回收部分大部分乙醇，烘干，粉碎，过200目筛，取过筛后的极细粉与2mL吐温-80混合，以适量水配制成溶液，缓缓加入凝胶基质之中，加水至100mL，以磁力搅拌器搅拌1h，混合均匀，即得。

（二）人工模拟泪液的配制。精确称取碳酸氢钠2.18g、氯化钾1.38g、氯化钠6.78g、氯化钙0.084g以适量蒸馏水搅拌，使之溶解，再加入蒸馏水配制成1000mL溶液，即得人工模拟泪液[6]。

（三）人工模拟鼻液的配制。称取氯化钾3.06g、氯化钠8.77g、氯化钙1.18g加水溶解至1000mL溶液，即得人工模拟鼻液[7]。

（四）胶凝温度的测定。以磁转子法进行测定[8]。所制得的凝胶剂（或其与人工泪液或人工鼻液混合物）50mL于玻璃瓶中，瓶口加橡胶塞密封，在橡胶塞上打孔，插入温度计，温度计水银球要求没入液面之下，上述被测凝胶先冷藏至低温，取出后置于磁力搅拌器上，开动搅拌，磁力粒搅拌转速控制在150r/min，逐渐升高温度，观察到搅拌转子转速逐渐减低，待到磁力粒完全停止转动后，记录温度。重复测定三次，取平均值。

（五）盐酸洛美沙星释放度的测定。以自制简易装置测定释放度，取1000mL烧杯，盛放人工泪液500mL，取一端开口的玻璃管一只，加入制备好的凝胶剂1mL，开口用醋酸纤维素膜封好，开口向下，倒置悬挂于烧杯内下部，并且使玻璃管整体没入液面之下，开动磁力搅拌器，调节转速为120r/min，分别在5、10、20、30、60、90、120、240、480min后取样测定盐酸洛美沙星浓度，每次取样1mL，取样后要补足同体积的释放介质。释放度的计算式为下式：

，其中Qm为盐酸洛美沙星的释药百分度，V总为介质的总体积，m为测定次数，Ci为开始第m次测定时，介质中盐酸洛美沙星的浓度；Vi为每次测定的取样量，V0为初始时凝胶剂样品加入的体积，根据上式，可以计算凝胶剂在介质中的盐酸洛美沙星释药百分度。

（六）盐酸洛美沙星含量测定。参考相关文献[9]，移取适量盐酸洛美沙星溶液于分液漏斗中，加入溴甲酚绿的0.01mol/L氢氧化钠溶液（1g溴甲酚绿以0.01mol/L氢氧化钠溶液溶解形成1000mL溶液）2mL，醋酸-醋酸钠缓冲溶液（pH=3.5）3mL，加适量的蒸馏水，使体积达到20mL，精确量取并加入氯仿20mL，振摇1min，使充分反应，静置10min，充分分层，分出氯仿层，并以同法制备不含盐酸洛美沙星溶液的空白氯仿相作为参比，在415nm处测其氯仿溶液的吸光度[9]。

（七）工作曲线的制备。以分光光度法进行测定含量，精确称取盐酸洛美沙星对照品0.0404g，在50mL容量瓶中以0.1mol/mL醋酸溶液适量使之溶解，以蒸馏水定容至50mL，从中移取10mL溶液于100mL容量瓶，以0.05mol/mL醋酸稀释至刻度，得到盐酸洛美沙星对照品溶液。分别移取盐酸洛美沙星对照品溶液0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、10.0、14.0mL按2.6方法测定吸光度，制作工作曲线。

三、结果与分析

（一）胶凝温度。分别制备了以泊洛沙姆407、泊洛沙姆407与泊洛沙姆188按不同比例混合的凝胶基质的含有盐酸洛美沙星、苍耳子提取物的凝胶剂，分别按2.4测定其胶凝温度，结果见表1。

表1 胶凝温度测定结果

结果表明，如果泊洛沙姆407单独使用，胶凝温度较低。目前泊洛沙姆407是原位凝胶应用的主流，浓度一般为20% -30%，一般适当配合使用泊洛沙姆188，泊洛沙姆188可以使泊洛沙姆407的胶凝温度适当升高，可以有助于获得胶凝温度更为理想的原位凝胶。根据表1的数据结果，25%泊洛沙姆407和2%泊洛沙姆188，25%泊洛沙姆407和3%泊洛沙姆188相对较为理想，泊洛沙姆是由聚氧乙烯(PEO)和聚氧丙烯(PPO)链段交替连接组成的一类高分子聚合物，两种类型的结构单位在形成凝胶时发挥的作用是不同的，聚氧乙烯(PEO)具有相对的亲水性，因此二者的比例可能决定泊洛沙姆的胶凝温度，一般说来，PEO比例较高的话，胶凝温度会相应升高，因为这会使泊洛沙姆形成的胶束结构的水溶液较为稳定，粘度较低。而泊洛沙姆188中的PEO比例高于泊洛沙姆407。根据上述结果，选取了25%泊洛沙姆407和1%泊洛沙姆188、25%泊洛沙姆407和2%泊洛沙姆188、25%泊洛沙姆407和3%泊洛沙姆188三种基质制备原位凝胶剂并做进一步研究。

（二）加入人工泪液或人工鼻液后的胶凝温度。将以25%泊洛沙姆407和1%泊洛沙姆188、25%泊洛沙姆407和2%泊洛沙姆188、25%泊洛沙姆407和2%泊洛沙姆188三种基质制成的原位凝胶剂按40:7的比例和40:1的比例与人工泪液和人工鼻液混合，按2.4测定胶凝温度，结果见表2。

表2 与人工泪液或人工鼻液混合后的胶凝温度

结果表明，与人工泪液或人工鼻液混合后，三种基质原位凝胶剂的胶凝温度都有所提高，初步分析原因可能是人工泪液和人工鼻液中离子强度较高，对于泊洛沙姆胶束溶液的稳定具有一定的积极作用，因此，考虑这些因素，选用的凝胶剂基质泊洛沙姆407浓度不可过低，泊洛沙姆188使用量要适宜，25%泊洛沙姆407和2%泊洛沙姆188为基质制备的凝胶剂再与人工泪液和人工鼻液混合后胶凝温度均较适宜，可选择25%泊洛沙姆407和2%泊洛沙姆188为基质制备凝胶剂。

（三）盐酸洛美沙星释放度测定结果。以2.7方法制备工作曲线，线性关系方程为A=0.00876C+0.0019，r=0.9914。结果表明吸光度与盐酸洛美沙星的浓度在2.02-56.56μg/mL间呈较好的线性关系。按2.6法测定人工泪液中25%泊洛沙姆407，2%泊洛沙姆188为基质制备的原位凝胶在不同采样时间点的盐酸洛美沙星含量，每次取样1mL，至25mL容量瓶中，以蒸馏水定容。移取1mL，按2.6测定其吸光度，计算释放度，结果见表3。

表3 盐酸洛美沙星的释放度

从表中数据可以看出，盐酸洛美沙星-苍耳子原位凝胶剂对于盐酸洛美沙星有较好的缓释效应，一次给药可维持药物释放可达2—4小时。

四、结论

以泊洛沙姆407为基质，制备的原位凝胶胶凝温度随浓度增大而逐渐降低，若添加少量的泊洛沙姆188，可在浓度适中的情况下制得以泊洛沙姆407为主的基质的苍耳子-盐酸洛美沙星原位凝胶，由于在模拟人工泪液和模拟人工鼻液中原位凝胶剂的胶凝温度会有不同程度的上升。因此，确定制备苍耳子-盐酸洛美沙星凝胶剂的基质为25%泊洛沙姆407，2%泊洛沙姆188，在人工泪液和人工鼻液中的胶凝温度为33.1℃和31.9℃，在人工泪液中4h盐酸洛美沙星基本释放完全，初步确定以25%泊洛沙姆407和2%泊洛沙姆188为凝胶剂基质制备可应用于人体的苍耳子-盐酸洛美沙星原位凝胶剂具有可行性。

[1]黄文华，余竞光，孙兰等.中药苍耳子化学成分的研究[J].中国中药杂志,2005(13).

[2]戚颖欣，曹柏营，寇莹等.苍耳子风湿药酒的研制与检测[J].食品科学，2007(9).

[3]Dai YH,Cui Z,Li JL.Research progress inthe chemical constituents and pharmacological activities of Xanthium L.J ShenyangPharm Univ,2007,24(12).

[4]HuangWH,Yu JG,Sun L,GuoBL,BaSDJ,LiDY.Studieson chemicalconstituentsfrom the fruitsofXanthium sibiricum.China J ChinMatMed,2005,30(13).

[5]TIRNAKSIZF，ROBINSONJR．Rheological，mucoadhesive and release propertiesofpluronic F-127 geland pluronic F-127/polycarbophilmixed gelsystems[J].Pharmazie,2005(7).

[6]HGERSTRMH,PAULSSONM,EDSMANK.Evaluation of mucoadhesion for two polyelectrolyte gels in simulated physiologicalconditionsusinga rheologicalmethod[J].Eur JPharm Sci，2000(3).

[7]LorinM I,Gaerlan PF,mandel ID.Quantitativecomposition ofnasalsecretionsin normalsubjects[J].JLab ClinMed,1972 (80).

[8]宋涛，王东凯，高红等.利巴韦林鼻用温敏凝胶热力学和流变学性质研究[J].中国医药工业杂志,2006(8).

[9]谭峰，郎惠云，李媛.萃取分光光度法测定盐酸洛美沙星[J].分析化学，2001（29）.

[责任编辑 郑丽娟]

R944

A

2095-0438（2015）08-0154-03

2015-04-28

赵大伟（1973-），男，黑龙江庆安人，绥化学院食品与制药工程学院讲师，硕士，研究方向:药物制剂和天然产物提取。

黑龙江省教育厅科学技术研究项目（12531835）；绥化市科学技术项目（KJZD 20140114）。