林晓斌 徐燕510000广东省广州市番禺中心医院

Mbd2基因在子宫内膜异位症中的表达

林晓斌 徐燕
510000广东省广州市番禺中心医院

目的：探讨Mbd2在EM s患者发病过程中的可能作用。方法：Trizol法提取病变组织的总RNA，反转录生成cDNA，Blast-primer设计Mbd2mRNA引物，Real-time PCR方法检测各组间Mbd2mRNA表达变化。结果：EM s患者异位内膜、在位内膜中Mbd2mRNA表达显著高于子宫肌瘤患者在位内膜（P＜0.01）；且EM s患者异位内膜中Mbd2 mRNA的表达显著高于在位内膜（P＜0.01）。结论：Mbd2基因参与子宫内膜异位症的发生，还可能为子宫内膜异位症的早期发现做出贡献。

Mbd2；子宫内膜异位症；Real-time PCR

子宫内膜异位症（Endometriosis，EMs）是一种较为常见的妇科疾病，患者常表现为痛经、慢性盆腔痛或性交痛，还可能合并不孕。其病因以及发病机制尚不清楚，内分泌、免疫、遗传以及环境因素都可能与其有关。近年来，表观遗传学，尤其是DNA甲基化在EMs的发病机制中得到了广泛关注[1]。

资料与方法

2014年3月-2015年4月收治因子宫肌瘤、卵巢巧克力囊肿行手术治疗的子宫肌瘤患者30例，平均年龄（28.7±7.9）岁；EMs患者30例，平均年龄（29.2±8.6）岁。所有患者月经规律，无宫内节育器，手术前0.5年内未曾服用抗炎或激素类药物。所有组织均经病理验证。标本采集均得到患者本人或家属知情授权，符合伦理标准。

主要试剂：Trizol、异丙醇、氯仿、75％乙醇、M-MLV反转录酶、RNA酶抑制剂、oligo dT、PCR引物、ABIPCRMix液。

主要仪器：ABI 7500 PCR仪、漩涡混合器、迷你离心机、低温高速离心机、普通PCR仪、核酸定量仪。

试验方法：总RNA提取及检测：严格按照Trizol说明书进行操作，琼脂糖电泳鉴定RNA的完整性，核酸定量仪检测总RNAOD值，换算成微克。

反转录反应：①反转录体系：2μ g总RNA，100 pmol oligo dT，5μL反转录buffer，0.625μL RNA酶抑制剂，1μLM-MLV酶，最后，DEPC水补充至25μL。②反转录条件：42℃ 60 min，95℃5min，4℃保存。

Real-time PCR：①引物序列：Gapdh：F：GTTGCTGTAGCCAAATTCGTTGT，R：GGTGGTCTCCTCTGACTTCAACA；Mbd2：F：ACGAATGAATGAACAGCCACG， R： TGCTACCTGGACCAACTCCT。②反应体系：12.5μL Abi PCRmix液，0.5μL上游引物，0.5μL下游引物，1.0μL cDNA，加水补足至25 μL。③反应条件：阶段1：50℃下2min；阶段2：95℃10 min；阶段3：95℃15 s，60℃60 s；阶段4：收集溶解曲线条件95℃15 s，60℃60 s，95℃15 s。阶段3 和4循环40次。

统计学处理：本研究中采用SPSS 17.0软件对计量数据进行分析，计量资料以（±s）表示，采用one-way ANOVA进行各组间数据比较，P＜0.01表示差异有统计学意义。

结果

各组间Mbd2 mRNA的相对表达变化，见表1。

组间Mbd2mRNA的相对表达变化，见图1。

讨论

人类肿瘤细胞中DNA甲基化的改变可以视为肿瘤生物标志之一[2]，而EMs与肿瘤具有非常类似的特性，比如细胞增殖、侵袭性及迁移等。目前学术界研究发现EMs可能是一种表观遗传学疾病[3]。

Mbd2（methyl-CpG-binding domain 2，Mbd2）是具有甲基CpG结合结构域的蛋白家族成员之一，可与组蛋白去乙酰化酶形成复合体，抑制基因表达。目前认为Mbd蛋白可以招募组蛋白去乙酰化酶到基因组上的甲基CpG富集区，从而抑制转录。另有报道显示，Mbd2可以特异性地结合甲基化的DNA，可以从甲基化的基因启动子区抑制转录的发生[4]。然而，有研究报道Mbd2可以起到去甲基化的作用，从而活化基因转录[5]，而DNA甲基化通常引起基因转录抑制。

表1 各组间Mbd2mRNA的相对表达变化（±s）

表1 各组间Mbd2mRNA的相对表达变化（±s）

注：与肌瘤在位内膜比较，⋆⋆P＜0.01；与EM s在位内膜，##P＜0.01。

组别组 M bd2mRNA肌瘤在位内膜 0.31±0.04 EM s在位内膜 0.54±0.11⋆⋆EM s异位内膜 1.12±0.35⋆⋆##

本次试验中，我们利用Real-Time PCR检测了子宫肌瘤在位内膜、EMs在位内膜以及EMs异位内膜组织中Mbd2 mRNA的表达变化，结果发现EMs患者异位内膜、在位内膜中Mbd2mRNA表达显著高于子宫肌瘤患者在位内膜（P＜0.01）；且EMs患者异位内膜中Mbd2mRNA的表达显著高于在位内膜（P＜0.01）。根据我们自己的试验结果以及他人研究发现，我们推测，在EMS发生过程中，Mbd2mRNA的表达上调抑制了某些具有类似于抑癌基因作用的基因的表达，使得子宫内膜获得了增殖、迁移以及定植的能力，从而发生了EMS或者加重了这一疾病过程。

图1 各组间Mbd2 mRNA的相对表达变化

[1] 吴夏迪,曲娟,崔毓桂,等.表观遗传学和环境因素与子宫内膜异位症[J].国际生殖健康/计划生育杂志,2015,34（1）：75-79.

[2] Wu Y,Strawn E,Basir Z,et al.Aberrant expression of deoxyribonucleic acid methyltransferases DNMT1,DNMT3A,and DNMT3B in women with endometriosis[J].Fertil Steril,2007,b（87）：24-32.

[3] 胡月阳,王芳,王俊霞.子宫内膜异位症相关的表观遗传学研究进展[J].发育医学电子杂志,2014,2（4）：248-252.

[4] Zhu D,Hunter SB,Vertino PM,et al.Overexpression of MBD2 in glioblastomamaintains epigenetic silencing and inhibits the antiangiogenic function of the tumor suppressor gene BAI1[J].Cancer Res,2011,71：5859-5870.

[5] Fuso A,Nicolia V,Cavallaro RA,et al.DNA methylase and demethylase activities are modulated by one-carbonmetabolismin Alzheimer's diseasemodels[J].JNutr Biochem, 2011,22：242-251.

Expression of Mbd2 gene in patientsw ith endom etriosis uterina

Lin Xiaobin,Xu Yan
Panyu CentralHospitalofGuangzhou City,Guangdong Province 510000

Objective：To investigate the possible effectofMbd2 in the pathogenesis of EMs.Methods：General RNA was extracted from diseased tissues by Trizolmethod,then generated cDNA through reverse transcription.Mbd2mRNA primerwas designed by Blast-primer,and detected the expression of mRNA Mbd2 using Real-time PCR.Results：The expression of Mbd2 mRNA in ectopic endometrium and position intima of patients with EMs were significantly higher than those of patients with hysteromyoma（P＜0.01）；in patientswith Ems,the expression ofMbd2mRNA in ectopic endometrium was significantly higher than in position intima（P＜0.01）.Conclusion：Mbd2 gene involved in the occurrence ofendometriosisuterina andmay contribute to the early detection ofendometriosisuterina.

Mbd2；Endometriosisuterina；Real-time PCR

表1 两组的Killip分级、LVEF等指标对比（±s）

表1 两组的Killip分级、LVEF等指标对比（±s）

注：与对照组比较，＊P＜0.05。

组别 例数 cTnT（mg/m L） CK-MB（U/L） LVEF（％） Killip分级[例（％）]Ⅰ级 Ⅱ级 Ⅱ级以上对照组 31 3.78±2.90 146.70±89.05 60.72±6.83 16（51.61） 13（41.94） 2（6.45）研究组 29 6.31±3.82＊ 197.51±97.10＊ 46.80±9.15＊ 12（41.38） 10（34.48） 7（24.18）＊

10.3969/j.issn.1007-614x.2015.26.69