张红红 刘晓丽 许思娟

·基础研究·

宫颈癌组织中miRNA-34c的表达水平分析及其靶基因PLK4的鉴定

张红红 刘晓丽 许思娟

目的：分析miRNA-34c在宫颈癌组织中的表达水平并鉴定其新的靶基因。方法：利用荧光实时定量PCR（qRT-PCR）检测甘肃省妇幼保健医院34例宫颈癌和癌旁正常组织中miRNA-34c表达水平。利用miRNA靶基因预测数据库预测miRNA-34c新的靶基因Polo样激酶4（PLK4）。将含有PLK4的3‘UTR片段荧光素酶载体分别与miRNA-34c模拟物或阴性对照共转染HEK293T细胞，并检测其荧光素酶活性。在人宫颈癌细胞SiHa细胞中分别转染miRNA-34c模拟物或阴性对照，利用qRT-PCR法和Western blot法分别检测靶基因的mRNA和蛋白质的表达水平。结果：与癌旁正常组织相比，miRNA-34c在宫颈癌组织中表达下调。在HEK293T细胞中，miRNA-34c模拟物显著抑制荧光素酶的活性（P<0.01）。miRNA-34c模拟物显著下调SiHa细胞中PLK4的mRNA和蛋白质的表达（P<0.01）。结论：miRNA-34c在人宫颈癌组织中表达下调，且能与PLK4的3’UTR结合并下调其mRNA和蛋白质的表达。

miRNA-34cPLK4宫颈癌

宫颈癌是最常见的女性恶性肿瘤之一，其死亡率居女性恶性肿瘤的首位，其发病率呈升高和低龄化趋势［1-2］。microRNA（miRNA）是一种长度约为22个核苷酸的非编码单链小RNA，通常与靶基因mRNA完全或不完全匹配结合，诱导靶mRNA降解或阻遏其转录后翻译［3-4］。miRNA-34家族包括miRNA-34a、miRNA-34b和miRNA-34c，在抑制癌症发生中起到很重要的作用［5］。在miRNA-34家族中，目前对miRNA-34a的研究较多，而对miRNA-34b和miRNA-34c的研究较少。miR-34c有miRNA-34c-3p和miRNA-34c-5p两个成熟形式，在多种癌细胞中异常表达，包括宫颈癌细胞［6］。已证实miRNA-34c能够作用于靶基因E2F3、MYCN、Bcl-2和c-Met抑制癌细胞增殖，锚定非依赖生长和诱导细胞凋亡［7-8］，但其许多功能尚未知。本研究将对miRNA-34c在宫颈癌组织的表达水平进行分析，并鉴定其新的靶基因Polo样激酶4（PLK4），为宫颈癌的治疗提供新的靶点和理论依据。……