刘浩，梁香丽，张宗山

(1．宁夏农林科学院植物保护研究所，宁夏植物病虫害防治重点实验室，宁夏 银川 750002;2．贺兰县林木检疫站，宁夏 贺兰 750200)

宁夏回族自治区是宁夏枸杞Lycium barbarum L．的主要产区，枸杞种植是自治区农业经济发展的四大支柱产业之一。2013年全区枸杞种植面积达到6．13万hm2，干果总产量突破15万t，总产值超过50亿元。

枸杞蚜虫Aphis sp．属同翅目Homoptera蚜总科Aphidoidea，是宁夏枸杞三大害虫之一，在整个生长季节均能造成危害，全国枸杞种植区均有分布。枸杞蚜虫多聚集在嫩叶、嫩芽、花、果实上刺吸汁液，致使嫩梢呈褐色枯萎状，甚至死亡;发生严重时叶片上覆盖油渍状蚜虫分泌物，不仅影响光合作用，使树势衰弱，还严重影响枸杞的开花结果，造成大量落花落果、减产20%左右，给茨农造成巨大的经济损失。

防治枸杞蚜虫可采用的方法很多［1］。其中使用面积最大的是化学药剂防治方法［2］，防治效果较好，但是会杀伤益虫、致使害虫产生抗药性、造成残留安全隐患［3］;高残留化学农药也降低了枸杞的品质，增加了产品进入国际市场的难度［4］。虽然近年也有生物农药如Bt［5］、吡虫啉［6-7］、扁蓄Polygonum aviculare等提取物［8-12］防治枸杞蚜虫，但仍不能达到持续控制枸杞蚜虫的效果。因此，找出更加安全有效、环境友好的防治方法是枸杞蚜虫防治的关键;探寻新的生物防治途径是宁夏枸杞生产单位的期盼，也是植物保护研究的发展方向。刘浩 等曾探索应用蜡蚧轮枝菌Lecanicillium lecanii防治枸杞蚜虫［13］，本文作者研究宁夏本地球孢白僵菌Beauveria bassiana菌株对枸杞蚜虫的致病性和影响致病性的环境因素，以期为宁夏枸杞蚜虫无公害防治提供更多选择和技术支撑。

1 材料与方法

1.1 球孢白僵菌对枸杞蚜虫高致病性菌株的筛选

1.1.1 供试菌株 2009—2013年，从宁夏的石嘴山市惠农区、银川市西夏区、贺兰县、中卫市中宁县、吴忠市同心县、固原市西吉县采集枸杞与农田土壤样品，通过大蜡螟Galleria mellonella L．幼虫诱集、分离、纯化，得到球孢白僵菌菌株56株。通过比较，选择生长速度快、孢子产量高及环境抗逆性强的4个菌株，用于筛选对枸杞蚜虫高致病性的菌株(表1)。

表1 用于对枸杞蚜虫高致病性筛选的4株球孢白僵菌

1.1.2 高致病性菌株的筛选方法

1.1.2.1 孢子悬浮液的配制 用0．003 mol/L磷酸二氢钾缓冲液收集PDA培养基上培养好的球孢白僵菌分生孢子，过滤后，用0．1%吐温-80无菌水配成浓度分别为1．0×108，1．0×107，1．0×106，1．0×105，1．0×104孢子/mL的孢子悬浮液各50 mL备用(孢子萌发率95%以上)。

1.1.2.2 接种与观察 将健康、个体大小基本一致的无翅成蚜连同枸杞叶浸入配制好的球孢白僵菌分生孢子悬浮液中，2 s后迅速取出;将处理过的枸杞蚜虫连同枸杞叶放入铺有潮湿滤纸的培养皿中，另放入新鲜枸杞叶片饲养，培养皿用带有小孔的保鲜膜覆盖;用含0．1%吐温-80的无菌水作空白对照。每个处理3个重复。将各处理置于24℃、光照条件为12L∶12D的人工气候箱中。连续观察7 d，每天定时观察记载蚜虫死亡情况。虫尸保湿培养，虫体表面长出白色菌丝或分生孢子时用显微镜检查以确定是否为球孢白僵菌感染致死。

1.1.2.3 数据分析 计算球孢白僵菌侵染枸杞蚜虫的死亡率和校正死亡率。

用几率值分析法，将虫体平均累计校正死亡率进行几率值转换后，采用DPS软件进行新复极差统计分析，分别对剂量和时间作线性回归分析，建立直线回归模型，计算致死中浓度LC50和致死中时间LT50。

1.2 环境因子对球孢白僵菌致病性的影响

1.2.1 温度对球孢白僵菌致病性影响的测定 将枸杞蚜虫浸泡在球孢白僵菌1．0×106孢子/mL孢子悬浮液中3 s，用滤纸吸干表面的水分，接种在新鲜枸杞叶片上，以0．1%吐温-80的无菌水作为对照，每个处理3个重复，每重复50头供试枸杞蚜虫。分别置于19，22，25，28，31℃共5个温度梯度下，在光照条件16L∶8D、相对湿度＞90%的培养箱中饲养。每3 d换1次新鲜叶片，每天检查试虫生长情况，连续观察10 d，记录死亡数量，计算校正死亡率。

1.2.2 湿度对球孢白僵菌致病性影响的测定 将枸杞蚜虫浸泡在球孢白僵菌1．0×106孢子/mL孢子悬浮液中3 s，用滤纸吸干表面的水分，接种在新鲜枸杞叶片上，以0．1%吐温-80的无菌水作为对照，分别放入40%，45%，50%，55%，90%5个湿度梯度处理的密闭干燥器中。每处理3个重复，每重复50头供试枸杞蚜虫。在干燥器的下面放不同的盐溶液，形成不同的湿度环境，具体如下:相对湿度40%，NaOH 315．8 g/L;相对湿度45%，NaOH 298．6 g/L;相对湿度50%，NaOH 281．6 g/L;相对湿度55%，NaOH 246．2 g/L;相对湿度90%，水。将干燥器置25℃恒温箱中，每3 d换1次新鲜叶片，每天检查试虫生长情况，观察10 d，记录死亡数量，计算校正死亡率。

1.2.3 紫外线对球孢白僵菌孢子存活率影响的测定 用0．1%吐温-80的无菌水配制球孢白僵菌分生孢子悬浮液，浓度以在显微镜400倍视野下，血球计数板上每小格4～8个孢子为宜。用灭菌培养皿装5 mL分生孢子悬浮液，在磁力搅拌下用紫外灯(30 W，出厂时紫外线辐射强度＞100 LW/cm2，照射距离为20 cm)照射，紫外线照射时间分别为1，2，3，4，5 min。照射后采用PDA培养液载片悬滴法，在25℃恒温培养箱中培养24 h，镜检，检查孢子萌发率，调查视野1000个孢子，每个处理5个重复;计算紫外光对孢子的杀伤率。

2 结果与分析

2.1 高致病性菌株致死中时间、致死中浓度筛选的4株宁夏本地球孢白僵菌菌株对枸杞蚜虫的致死中浓度由低到高依次为2号，1号，4号，3号菌株(表2)。致死中时由短到长依次为2号，1号，3号，4号菌株(表3)。

表2 4株球孢白僵菌对枸杞蚜虫的致死中浓度

表3 4株球孢白僵菌对枸杞蚜虫的致死中时

2.2 环境因子对球孢白僵菌致病性的影响

2.2.1 温度对球孢白僵菌致病性影响 球孢白僵菌对枸杞蚜虫的侵染校正死亡率在19～31℃条件下，随着温度的升高逐渐升高。在22～28℃内，校正死亡率的升高速率最快，在31℃下，校正死亡率最高，最有利于白僵菌侵染枸杞蚜虫(图1)。

图1 不同温度下白僵菌寄生枸杞蚜虫致死曲线

2.2.2 湿度对球孢白僵菌致病力影响 在相对湿度40%～90%条件下，随着湿度的升高，球孢白僵菌对枸杞蚜虫的侵染校正死亡率逐渐升高，相对湿度90%最有利于白僵菌侵染枸杞蚜虫(图2)。

2.2.3 紫外线对球孢白僵菌孢子萌发的影响 在照射不同时间条件下，随着紫外线照射时间的延长，球孢白僵菌孢子萌发抑制率升高;通过拟合直线回归方程和计算，在孢子萌发抑制率达50%时，紫外线照射时间为3．18 min(图3)。

图2 不同湿度条件下白僵菌对枸杞蚜虫的致死率

图3 紫外线对白僵菌孢子萌发的抑制回归线

3 结论与讨论

筛选高致病性球孢白僵菌菌株为防治枸杞蚜虫提供了优质菌种，LD50为1．7×106孢子/mL，LT50为4．46 d(1．0×106孢子/mL)，达到田间应用的要求。相对湿度90%时球孢白僵菌防治枸杞蚜虫的校正死亡率极显著高于其他湿度条件的死亡率，为将来生产应用提供理论依据。

宁夏属于温带大陆性气候，生产季节多数时间田间湿度低于相对湿度60%，只有夜间、雨后短时间能够达到或超过相对湿度90%，能否充分利用湿度合适期开展防治，是该项技术能否大面积发挥作用的关键。

紫外线影响因素的研究结果，为应用球孢白僵菌防治枸杞蚜虫提供了技术参数;田间施用应当避开日光强烈时段，或者在白僵菌孢子悬浮液中加入光稳定剂，避免紫外线的伤害，以提高防治效果。试验设计中，未将观察时间延长至36 h或更长，缺乏对菌株孢子光修复和暗修复能力的考虑，将在今后的试验中补充完善。

宁夏本地虫生真菌球孢白僵菌的发现、研究和防治应用，开启了地区生物防治害虫的新篇章，对于今后枸杞蚜虫无公害防治、枸杞有机产品生产等具有重要意义。

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