王健健 陈丽霞 张荟雪 李杰 王丽华

多发性硬化（multiple sclerosis，MS）是以中枢神经系统白质炎性脱髓鞘病变为主要特点的自身免疫疾病。MS的发病与免疫、遗传和环境等多种因素有关。越来越多的证据显示基因的多态性在MS发病机制中占了重要地位。细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4（cytotoxic T－lymphocyte－associated antigen－4，CTLA－4）主要表达于激活的 T细胞，通过与B7分子结合产生抑制性信号，下调或终止T细胞活化［1］。CTLA－4基因是自身免疫疾病重要的候选基因，目前已有大量关于CTLA－4＋49A／G多态性与 MS相关的研究，但结果并不一致。因此本研究采用meta分析方法，对目前国内外可检索到的CTLA－4＋49A／G多态与MS相关的数据进行合并分析，探讨CTLA－4＋49A／G多态与MS的相关性。

1 材料和方法

1.1 文献检索 使用“multiple sclerosis”、“cytotoxic T lymphocyte－associated antigen 4”、“CTLA－4”、“CTLA4”等4个关键词在 PubMed检索CTLA－4＋49A／G与MS的相关性研究。文献检索时间从建库至2013－09期间。

1.2 纳入与排除标准 文献纳入标准:（1）CTLA－4＋49A／G多态与MS相关的病例－对照研究；（2）MS的诊断符合目前国内外公认的标准（1983年Poser诊断标准或2001年McDonald诊断标准）；（3）研究对象为人群，种族不限；（4）文献中能提取病例组和对照组基因型和（或）等位基因频数。（5）纳入文献语种和人群不限。当一篇文献报道不同人群时，则分别作为单独的研究。排除标准:（1）重复研究；（2）对照组不符合 HW遗传平衡；（3）以家庭成员为对照，主要研究传递不平衡。（4）不能提取病例组和对照组基因型及等位基因频数。

1.3 文献质量评价 由两名研究者独立筛选文献及提取数据，随后交叉核对，如有争议协商后再决定。提取数据包括:文献的第一作者、发表时间、研究对象的国家及种族、研究例数、等位基因及基因型频数、基因分型方法。文献质量评估主要包括以下几方面:（1）研究是否存在偏倚及是否对偏倚进行讨论；（2）研究设计是否严谨科学；（3）统计方法是否正确；（4）研究对象的筛选是否严格；（5）实验方法是否可靠。

1.4 统计学处理 （1）对纳入研究的基因型分布采用H－W遗传平衡检验；（2）发表偏倚采用漏斗图评价，应用Stata11.0进行Begg’s检验评估漏斗图的对称性。（3）采用RevMan4.2统计软件计算各个研究的CTLA－4基因G／A、GG＋GA／AA、GG／GA＋AA的OR值及95%CI。（4）Cochran’s Q检验评估研究间的异质性，若各研究间无异质性（I2≤50%，P≥0.1），则采用固定效应模型分析；若研究间有异质性（I2＞50%，P＜0.1），则采用随机效应模型分析。

2 结果

2.1 纳入文献 根据纳入与排除标准，共有23篇文献纳入meta分析，包括25个MS病例－对照研究，其中20个研究人群是高加索人，5个研究人群是亚洲人［2－24］。Stuart等（2007）［2］的研究人群种族不明确，故排除。Meta分析中纳入研究的CTLA－4＋49A／G多态性检测方法包括:限制性片段长度多态－聚合酶链反应（PCR－RFLP）、序列特异性引物－聚合酶链反应（PCR－SSP）、变性毛细管电泳（DCE）、单链构象多态性（SSCP）。纳入文献的一般情况、基因型及等位基因频数见表1。

2.2 文献质量评估及基因多态性分析 结果见表2。Begg’s检验结果提示不存在发表偏倚（P＝0.847）。25个研究的异质性检验显示CTLA4＋49各研究基因型结果无异质性〔G／A（I2＝26.60%，P＝0.11）、GG＋GA／AA（I2＝25.80%，P＝0.12）和 GG／GA＋AA（I2＝0.00%，P＝0.47）〕。根据研究人群构成，分为高加索和亚洲人群两个亚组。Meta分析显示各亚组间均无异质性（I2＜50%，P＞0.1），25个研究及亚组中各基因型的比较均采用固定效应模型进行数据合并。

25个研究合并后，G／A、GG＋GA／AA、GG／GA＋AA合并的OR值分别为1.00（95%CI为0.96～1.06，P＝0.91）、1.01（95%CI为0.93～1.10，P＝0.73）、0.99（95%CI 为0.88～1.10，P＝0.81）。亚组分析中，高加索人群的研究合并后，G／A、GG＋GA／AA、GG／GA＋AA合并的OR值分别为1.00（95%CI为0.94～1.06，P＝0.99）、0.99（95%CI 为 0.91～1.08，P＝0.85）、1.01（95%CI为0.90～1.14，P＝0.83）。亚洲人群的研究合并后，G／A、GG＋GA／AA、GG／GA＋AA合并的 OR 值分别为1.03（95%CI 为0.87～1.22，P＝0.73）、1.22（95%CI 为0.95～1.57，P＝0.12）、0.83（95%CI为0.61～1.12，P＝0.22）（表2）。

表1 纳入文献的一般情况、基因型及等位基因频数

表2 CTLA－4＋49A／G与MS相关性的meta分析结果

3 讨论

目前普遍认为MS主要是T细胞介导的以中枢神经系统脱髓鞘为特点的自身免疫性疾病，遗传易感性和环境因素共同参与疾病。MS的一级亲属的受累风险增加20～40倍。这表明遗传易感性在MS的发病机制中发挥重要的作用。CTLA－4基因是自身免疫疾病重要的候选基因，其编码的蛋白CTLA－4主要在T细胞表面表达，通过结合APC表面的B7分子抑制T细胞的激活，并且参与T细胞的外周耐受性。

当前CTLA－4基因的热点多态＋49A／G多态为外显子1第49位A突变为G，＋49A／G多态导致前导肽第17个密码子处丙氨酸替代苏氨酸。最近的meta分析显示CTLA－4＋49A／G与类风湿关节炎、1型糖尿病、系统性红斑狼疮等自身免疫病相关［25］。2000年 Kouki等［26］研究发现 CTLA－4＋49G与Graves病患者T细胞表面的CTLA－4低表达相关，因此推测潜在的致病机制可能是CTLA－4＋49位A突变为G后，T细胞表面的CTLA－4表达降低，导致其对T细胞的抑制作用减弱，大量激活的T细胞直接攻击中枢髓鞘而导致MS发病 。本研究通过合并25个CTLA－4＋49A／G与 MS相关研究的数据，meta分析发现CTLA－4＋49A／G与MS无相关性，但这不能排除其在MS遗传易感性中发挥的作用。目前dbSNP数据库收录的人的CTLA－4基因的SNP共有218个，不能排除这些SNP与CTLA－4＋49A／G连锁不平衡，这些复杂的连锁不平衡关系可能与MS的发病机制相关，这一推测需要进一步的实验验证。

值得注意的是，Mkhikian等［27］发现调控糖基化蛋白上N－聚糖链长度的 MGAT1基因变异（rs7726005、rs2070924、rs2070925）与 MS相关，携带MGAT1基因变异的MS患者细胞表面CTLA－4的N－糖基化程度下降，CTLA－4低糖基化对T的抑制作用减弱。通过抑制MGAT1基因变异来增强CTLA－4的N－糖基化可缓解MS患者的症状。因此，MGAT1和CTLA－4基因变异的连锁不平衡可能在MS发病机制中发挥重要的作用，这一假设为今后的实验证实提供了理论基础。

由于基因多态性具有种族差异，进一步分析将纳入的人群分为高加索和亚洲两个亚组，结果显示CTLA－4＋49A／G与高加索和亚洲人均无相关性。由于本研究中亚洲人群的研究数量相对较少，使其meta分析结果可信度降低。因此，CTLA－4＋49A／G多态性与MS的遗传关联性仍需更大样本量、更加合理全面的多个人群研究来证实。

本研究通过meta分析发现CTLA－4＋49A／G与MS无相关性，与GWAS的结果是一致的［1］。但这不能排除CTLA－4＋49A／G在MS发病机制中的作用，进一步研究需探讨CTLA－4＋49A／G与其他遗传变异的连锁不平衡机制，CTLA－4＋49A／G与其他基因的遗传变异的连锁不平衡也可能在MS的发病机制相关中发挥重要的作用。

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