辽宁锦州地区三种家禽大肠杆菌耐药性研究

蒋月，盛鹏飞

（辽宁医学院畜牧兽医学院，辽宁锦州121001）

摘要：分别从健康和患病鸡、鸭、鹅分离出302株大肠杆菌，采用微量稀释法测定菌株对12种抗菌药物的敏感性。结果表明，302株大肠杆菌除对阿米卡星和多粘菌素B较敏感，对其他抗菌药物呈现不同程度的耐药且多重耐药现象严重。鹅源大肠杆菌和鸭源大肠杆菌对氨苄西林、氯霉素和环丙沙星耐药性较高，鸡源大肠杆菌对其他抗菌药物耐药率较高。同时，患病组家禽分离的大肠杆菌对氨苄西林以外的其他11种抗菌药物的耐药率明显高于健康组大肠杆菌。结果显示，辽宁锦州地区鸡、鸭、鹅三种家禽大肠杆菌对不同抗菌药物的耐药性存在差异，三种家禽对抗菌药物的整体耐药性较强，应加强耐药性监测，为指导兽医临床合理使用抗菌药物提供指导。

关键词：鸡；鸭；鹅；大肠杆菌；耐药性

网络出版时间2015-1-27 16:00:37

[URL]http://www.cnki.net/kcms/detail/23.1391.S.20150127.1600.010.html

蒋月,盛鹏飞.辽宁锦州地区三种家禽大肠杆菌耐药性研究[J].东北农业大学学报, 2015, 46(2): 59-63.

随着我国养禽业集约化发展及长期抗菌药物大量使用，大肠杆菌耐药性逐渐增强，一些抗菌药物治疗禽大肠杆菌病已达不到理想效果，致使禽大肠杆菌病流行[1]，控制禽类耐药大肠杆菌感染已成为亟待解决问题。

近年来，多有家禽与哺乳动物大肠杆菌耐药性比较报道[2-3]，但不同家禽大肠杆菌耐药性比较研究较少。本试验针对目前辽宁锦州地区禽类大肠杆菌病流行现状，采集锦州大型规模化家禽养殖场中健康或具有典型大肠杆菌病临床症状的鸡、鸭、鹅样本，进行细菌分离与鉴定，利用微量稀释法检测并比较辽宁锦州地区三种家禽大肠杆菌分离株的耐药性，旨在监控不同禽类来源大肠杆菌耐药菌株流行趋势，为临床用药和抗菌药物的合理使用提供指导。

1　材料与方法

1.1样品来源

锦州大型规模化家禽养殖场采集的健康或临床诊断上有典型大肠杆菌症状鸡、鸭、鹅的泄殖腔拭子、肝脏、血液及卵巢等样品。

1.2培养基及药物

营养肉汤、营养琼脂等培养基购自杭州天和微生物试剂有限公司；氨苄西林（AMP）、头孢噻吩（CEF）、链霉素（S）、阿米卡星（AN）、庆大霉素（GM）、多西环素（DOX）、氯霉素（C）、氟苯尼考（FLR）、环丙沙星（CIP）、诺氟沙星（NOR）、复方新诺明（SXT）、多粘菌素B（PB）等12种药敏纸片购自北京天坛药物生物技术开发公司；大肠杆菌质控菌株ATCC25922购自中国兽医药品监察所。

1.3细菌分离鉴定

将采集样品划线接种于营养琼脂平板上，37℃培养后，将分离菌株划线接种于麦康凯琼脂和伊红美蓝琼脂培养基，将分离菌涂片、革兰氏染色、镜检。使用葡萄糖、乳糖、蔗糖、肌糖、木糖、麦芽糖、甘露醇、枸橼酸、VP和MR生化反应管，对疑似分离株进行鉴定。

1.4药敏试验

采用微量稀释法测定12种抗菌药物对分离菌株的最小抑菌浓度（MIC）。每次试验前用标准菌株ATCC25922进行质控，药敏试验结果参照CLSI[4]判定标准进行。

1.5统计学方法

耐药性差异统计应用统计软件SPSS 16.0进行处理。

2　结果与分析

2.1大肠杆菌的分离与鉴定结果

分离菌株在营养琼脂上形成圆形凸起、半透明灰白色菌落，在麦康凯和伊红美蓝琼脂上分别为红色和黑色带金属闪光的菌落，镜检为红色、两端钝圆的短杆菌，初步鉴定是大肠杆菌。经生化鉴定进一步表明分离株为大肠杆菌。

此次共分离鉴定出302株大肠杆菌，其中包括鸡源大肠杆菌210株（健康105株，患病105株），鸭源大肠杆菌65株（健康30株，患病35株），鹅源大肠杆菌27株（健康12株，患病15株）。

2.2禽源大肠杆菌的总体耐药情况

禽源大肠杆菌的总体耐药及多重耐药情况见表1和图1。

表1　302株禽源大肠杆菌对12种抗菌药物的耐药率Table 1　Antibiotic resistant rate of 302 E. coli isolates from poultry

由表1可以看出，本次分离的禽源大肠杆菌总体耐药现象较严重，对氨苄西林、庆大霉素、多西环素及复方新诺明总耐药率均在70%以上，尤其是对氨苄西林的耐药率在90%以上，对链霉素、氯霉素和氟苯尼考的耐药情况也较为严重，总耐药率在40%~70%之间，对阿米卡星和多粘菌素B较为敏感，总耐药率均在20%以下。可见分离的禽源大肠杆菌多重耐药现象严重，多重耐药数以6耐和7耐最多。

图1　302株禽源大肠杆菌的多重耐药情况Fig. 1　Multidrug resistance of 302 E. coli isolates from poultry

2.3三种禽源大肠杆菌的耐药性比较结果

三种禽源大肠杆菌的耐药性比较及P值比较见图2和表2。

由图2和表2可见，对于大部分抗菌药物，鸡源大肠杆菌的耐药性高于鸭源和鹅源大肠杆菌。而对于氨苄西林耐药性最高为鹅源大肠杆菌，对氯霉素和环丙沙星的耐药最高则为鸭源大肠杆菌。三种禽源大肠杆菌对氨苄西林和环丙沙星的耐药性差异不显著（P>0.05），而对其他10种抗菌药物，鸡、鸭或鹅源大肠杆菌中某两种大肠杆菌间存在差异，差异显著或极显著（P<0.05或P<0.01）。

图2　三种禽源大肠杆菌的耐药性比较Fig. 2　Comparison of antibiotic resistance of chickens, ducks and goose

2.4健康组与患病组禽源大肠杆菌的耐药性比较结果

图3显示健康组与患病组禽源大肠杆菌对12种抗菌药物的耐药性比较结果，由图3可知，除氨苄西林的耐药率为健康组家禽大肠杆菌略高于患病组家禽大肠杆菌外，其他7大类抗菌药物—头孢类（头孢噻吩），氨基糖苷类（链霉素、庆大霉素和阿米卡星），喹诺酮类（环丙沙星和诺氟沙星），土霉素类（多西环素），氯霉素类（氯霉素和氟苯尼考），磺胺类（复方新诺明）和多粘菌素类（多粘菌素B）的耐药率，患病组家禽大肠杆菌均明显高于健康组家禽大肠杆菌（P<0.01）。分析原因，可能与平时饲养过程中抗菌药物的添加和发病后的用药治疗习惯有关。

表2　三种禽源大肠杆菌的耐药性比较结果Table 2　Comparison of antibiotic resistance of chickens,ducks and goose

图3　健康组与患病组家禽大肠杆菌的耐药性比较结果Fig. 3　Antibiotic resistance comparision of the sick-group and health-group

3　讨论与结论

3.1 302株禽源大肠杆菌的总体耐药情况分析

结果显示，受测菌株对阿米卡星和多粘菌素B较敏感，总耐药率在20%以下，对其他目前常用和应用时间较长的抗菌药物均有不同程度的耐药，对氨苄西林、庆大霉素、多西环素及复方新诺明呈现高度耐药，总耐药率均在70%以上。受测菌株的多重耐药现象严重。本试验结果对头孢噻吩、庆大霉素、氨苄西林、链霉素、氟苯尼考和阿米卡星等耐药率较高[5-6]，对环丙沙星和诺氟沙星耐药性较宋立研究结果低，较刘吉山研究结果高[5-6]，但本试验结果与廖晓萍等关于禽类大肠杆菌耐药率高，耐药种类多，耐药谱复杂，多重耐药现象严重报道一致[7]。

随时间推移，细菌对某些药物耐药性逐渐增加，且细菌耐药范围逐渐变扩大，除对应用时间较长的抗菌药有耐药性，对临床使用不久新药如喹诺酮类的抗性很强。细菌耐药性及多重耐药现象的原因可能是致病性大肠杆菌在药物选择性压力下耐药基因发生突变，适用环境压力而产生耐药性；临床上滥用抗生素，大肠杆菌可通过质粒、转座子、整合子等可移动元件获得耐药性[8]。

3.2鸡鸭鹅三种禽源大肠杆菌的耐药性比较

本次分离于锦州地区鸡源大肠杆菌对氨苄西林、阿米卡星、氟苯尼考等的耐药率较以往报道低[9-10]。而鸭源和鹅源大肠杆菌与其他地区的报道有差异[11-13]。同时本试验显示不同禽源大肠杆菌耐药性也存在差异，对大部分抗菌药物，鸡源大肠杆菌耐药性高于鸭源和鹅源大肠杆菌。这可能因为菌株分离时间和地区不同，在治疗大肠杆菌病时，不同家禽的耐药情况不同，不同家禽用药强度、频率存在差异，所以不同家禽大肠杆菌的耐药性存在差异。造成耐药率差异原因除本次调查大肠杆菌一部分分离于健康家禽也是重要因素，本试验结果显示患病家禽大肠杆菌的耐药性高于健康家禽大肠杆菌耐药性。

本试验首次对辽宁锦州地区的鸡鸭鹅三种家禽大肠杆菌的耐药性进行检测与比较，有利于监控锦州地区不同家禽大肠杆菌耐药性流行趋势。本试验大肠杆菌对阿米卡星和多粘菌素B耐药率较低，而氯霉素在禁用之后，耐药率也已降低到42%，说明在停止使用抗生素一定时间后，细菌能逐渐恢复对其的敏感性。由此可见，规范使用抗生素对于减缓细菌耐药性的扩散和传播具有重要意义。

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Jiang Yue, Sheng Pengfei. Research on antimicrobial resistance in Escherichia coli isolated from three different poultries[J]. Journal of Northeast Agricultural University, 2015, 46(2): 59-63. (in Chinese with English abstract)

Research on antimicrobial resistance in Escherichia coli isolated from

three different poultries

/JIANG Yue, SHENG Pengfei(Animal Husbandry and VeterinaryCollege of Liaoning Medical University, Jinzhou Liaoning 121001, China)

Abstract:To study the presence of antimicrobial resistance in chicken, duck and goose Escherichia coli in Jinzhou, Liaoning Province. A total of 302 E. coli strains, isolated from chicken, duck and goose (healthy and diseased animals), were tested for resistance to 12 antimicrobials by micro-dilution method. Results showed that besides sensitive to Amikacin and Polymyxin B, all the 302 isolates were differently resistant to the other antibiotics, and multi-drug resistance was serious. Except Ampicillin, Streptomycin and Ciprofloxacin, E. coli isolates from chicken had a higher rate of resistance to the other antibiotics. Except Ampicillin, isolates from diseased poultries were markedly more resistant than those from normal poultries for the other 11 antimicrobial agents assessed. Conclusion: Despite some differences among spices, the whole antimicrobial resistance of these three poultry E. coli is severe, it's necessary to strengthen the surveillance of antimicrobial resistance and give some directions to clinical medication.

Key words:chicken; duck; goose; Escherichia coli; antimicrobial resistance

作者简介：蒋月（1980-），女，讲师，博士研究生，研究方向为兽医药理与毒理学。E-mail: lnyxy_jy@126. com

基金项目：兽医生物技术国家重点实验室开放基金（SKLVBF201107）

收稿日期：2014-03-04

文章编号：1005-9369（2015）02-0059-05

文献标志码：A

中图分类号：S855.1+2