共轭亚油酸和维生素A对产蛋鸡免疫机能影响

张忠远1，吴国玲1，王磊1，程竟竟1，郝健1，单玉兰2

（1.东北农业大学动物营养研究所，哈尔滨150030；

2.黑龙江省畜牧兽医信息中心，哈尔滨150040）

摘要：试验旨在研究共轭亚油酸和维生素A对蛋鸡免疫机能影响。试验选取30周龄健康褐壳蛋鸡216只，随机分为9个处理，每个处理3个重复，每个重复8只鸡，采用3×3两因素完全交叉分组设计，分别饲喂添加维生素A（4 000、8 000和16 000 IU·kg-1）与共轭亚油酸（0、2%、4%）试验日粮，试验期为6周。结果表明，CLA显著增加血清中总蛋白、球蛋白、白蛋白含量（P<0.05），VA对血清中总蛋白、球蛋白含量影响差异极显著（P<0.01），随着VA添加量增加，血清中总蛋白和球蛋白含量增加。CLA对血清免疫球蛋白A和免疫球蛋白G影响差异极显著（P<0.01），随着CLA添加水平增加，血清IgA和IgM增加，对血清免疫球蛋白M影响差异显著（P<0.05），2%CLA添加组血清中IgM含量高于0、4%CLA添加组，随着VA添加量增加，IgA、IgM和IgG含量增加，VA对IgA影响差异极显著（P<0.01），对IgM和IgG含量影响差异显著（P<0.05），CLA和VA两者交互作用对IgA、IgM、IgG影响差异极显著（P<0.01）。CLA对白细胞介素-2、肿瘤坏死因子-α含量影响差异极显著（P<0.01），且CLA添加2%时，IL-2含量最高，TNF-α含量最低。VA对IL-2含量影响差异不显著（P>0.05），对TNF-α含量影响差异极显著（P< 0.01），随VA添加量增加血清中TNF-α含量增加，CLA和VA两者交互作用对IL-2及TNF-α影响差异显著（P< 0.05）。CLA显著促进过氧化物酶体增殖剂激活受体γ（PPARγ）基因mRNA表达（P<0.01），VA对PPARγ基因mRNA表达无显著影响（P>0.05），CLA和VA交互作用对PPARγ基因mRNA表达无显著影响（P>0.05）。以上结果显示CLA和VA能提高蛋鸡免疫机能，且CLA和V A对蛋鸡免疫机能影响存在一定互作效应。

关键词：共轭亚油酸；维生素A；产蛋鸡；免疫机能

网络出版时间2015-1-27 16:00:15 [URL]http://www.cnki.net/kcms/detail/23.1391.S.20150127.1600.005.html

张忠远,吴国玲,王磊,等.共轭亚油酸和维生素A对产蛋鸡免疫机能影响[J].东北农业大学学报, 2015, 46(2): 37-46.

共轭亚油酸（Conjugated linoleic acid，CLA）是必需脂肪酸亚油酸衍生共轭双烯酸的多种位置与几何异构体总称，具有多种生物活性。CLA具有抗癌、抗氧化、增强免疫系统、防止动脉粥样硬化等生理作用[1-3]，大量研究发现，在动物日粮中添加CLA，生产性能、抗氧化能力以及免疫机能均受到影响[4-6]。CLA调节免疫和炎症反应功效被广泛认可[7]。维生素A（Vitamin A，VA）主要生物学功能是维持正常视觉反应，保护上皮组织完整性和促进骨骼正常发育。Engedal等研究结果发现，VA还具有多种免疫调节作用，可自发性活化诱导胸腺细胞和成熟T细胞的死亡，活化Fas抗原诱发T细胞死亡[8]。王选年等研究表明，日粮中适量添加维生素A可有效提高雏鸡免疫水平，提高鸡体发育和抗感染能力[9]。关于CLA和VA在蛋鸡上的应用，国内研究主要集中于产品中富集，但蛋鸡生产过程中健康状况也同样重要，由于集约化、规模化畜牧养殖已成趋势，尤其产蛋鸡饲养密度较大、饲养环境较差，为满足产蛋需要，蛋鸡体内脂质代谢活动旺盛，易受各种应激影响，引起氧化应激。目前关于CLA和VA两者共同添加对家禽免疫机能影响研究尚无报道，本试验通过日粮中添加不同剂量CLA和VA，研究CLA和VA及两者交互作用对蛋鸡机体免疫机能影响，为蛋鸡健康养殖提供理论依据。

1　材料与方法

1.1试验设计

本试验采用3×3两因素完全交叉分组设计，在日粮中维生素A（维生素A乙酸酯）添加水平为4 000、8 000和16 000 IU·kg-1，与0、2%、4%共轭亚油酸（购自于青岛澳海生物有限公司）交叉分组饲喂，试验选用30周龄健康褐壳蛋鸡216只，根据试验设计分为9组，每组3个重复，每个重复8只鸡（见表1），进行饲养试验。

1.2试验日粮和饲养管理

试验鸡基础日粮采用玉米-豆粕型日粮，饲料原料成分和营养需要参照2010年中国饲料成分及营养价值表，具体成分和营养水平见表2。共轭亚油酸添加采用重量代替法代替日粮中豆油，维生素A采用直接添加方法。

试验蛋鸡采用半开放式立体笼养，每笼两只。对蛋鸡进行随机分组，过渡期两周，第一周喂原来的料，第二周再按原用料和试验料1/3、2/3逐渐过渡，以防止蛋鸡换料应激。完全过渡后，进入为期6周正式试验期。每组所用日粮完全是对应试验日粮，每天早晚投料两次，蛋鸡自由采食，饮水为乳头式饮水器自用饮水，每天早上清粪一次，温度保持27℃左右，自然通风，湿度适中，保持舍内空气质量，环境卫生良好。

表1　试验方案设计Table 1　Design of experiments

表2　基础日粮组成及营养成分Table 2　Composition and nutrient of basal diet

1.3测定指标与方法

1.3.1样品采集与制备

预试期两周结束后，在试验期中期和末期各采一次血，每个重复组随机取两只鸡，用肝素钠管（购自哈尔滨赛莱博科技有限公司）翅下静脉采血5 mL，立即送往离心室，3 000 r·min-1离心10 min，将上层清液分离到EP管中，-20℃低温保存。在饲养试验第六周，空腹称重后每个处理随机选择2只接近平均体重蛋鸡。颈动脉放血屠宰，打开腹腔，迅速分离取出一侧肝脏，用消毒后纱布包好，贴上标签，放入封口袋中，-80℃冰箱（东北农业大学动物营养研究所实验室）中冷冻保存。

1.3.2测定指标及方法

A、用全自动生化分析仪(东北农业大学动物营养研究所实验室)测定血清中总蛋白（TP）、球蛋白（GLOB）、白蛋白（ALB）；免疫球蛋白A（Immunoglobulin A，IgA）、免疫球蛋白G（Immunoglobulin G，IgG）、免疫球蛋白M（Immunoglobulin M，IgM）、白细胞介素-2（Interleukin-2，IL-2）、肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α，TNF-α）依据酶联免疫分析试剂盒测定（购自R＆D公司）。

B、荧光定量PCR（东北农业大学动物营养研究所实验室）方法测定过氧化物酶体增殖剂激活受体γ（Peroxisome proliferator-activated receptor γ，PPARγ）基因mRNA表达水平。

1.4数据处理

试验数据使用SPSS17.0软件进行ANOVA方差分析和Duncan's多重比较，结果用平均值±标准误表示。

2　结果与分析

2.1共轭亚油酸和维生素A对蛋鸡血清中总蛋白、球蛋白和白蛋白含量影响

由表3可知，随着CLA添加量增加，血清中总蛋白、球蛋白、白蛋白含量增加。且CLA对总蛋白和球蛋白影响差异极显著（P<0.01），对白蛋白影响显著（P<0.05）。添加4%CLA与0%CLA相比，总蛋白、球蛋白和白蛋白含量分别提高17.91%、16.24%、20.39%。VA对总蛋白和球蛋白影响差异极显著（P< 0.01），随着VA添加量增加，血清中总蛋白和球蛋白含量增加，VA对白蛋白影响差异不显著（P>0.05），白蛋白含量在VA添加水平为8 000 IU·kg-1时最高。CLA和VA交互作用对总蛋白和球蛋白影响显著（P< 0.05），对白蛋白影响不显著（P>0.05）。

表3　共轭亚油酸和维生素A对总蛋白、球蛋白和白蛋白含量影响Table 3　Effect of conjugated linoleic acid and vitamin A on total protein, globulin, albumin in the serum of laying hens

2.2共轭亚油酸和维生素A对蛋鸡免疫球蛋白影响

由表4可知，不同剂量CLA对血清IgA和IgG影响差异极显著（P<0.01），且随着CLA添加水平增加，IgA和IgM增加，对血清IgM影响差异显著（P<0.05），2%CLA添加组血清中IgM含量高于0、4%CLA添加组。VA对血清IgA影响差异极显著（P<0.01），对IgM和IgG影响差异显著（P<0.05），随着VA添加量增加IgA、IgM和IgG含量也增加，16 000 IU·kg-1VA添加组与4 000 IU·kg-1VA添加组相比，分别增加6.64%、3.15%、3.56%。CLA和VA两者交互作用对IgA、IgM和IgG影响差异极显著（P<0.01），其中试验IX组血清中IgA含量高于其他各组，与其他各组之间差异显著（P<0.05），试验Ⅴ、IX组血清中IgM和IgG含量均高于其他组，但两者差异不显著（P>0.05）。

2.3共轭亚油酸和维生素A对蛋鸡血清炎性细胞因子影响

由表5可知，不同剂量CLA对血清中IL-2含量影响差异极显著（P<0.01），且CLA添加2%时，IL-2含量最高，4%CLA添加组血清中IL-2含量显著高于0 CLA添加组，2%CLA添加组与4%CLA添加组两者之间差异不显著，其中2%CLA添加组和4% CLA添加组相对于0 CLA添加组分别提高12.44%、10.34%。VA对IL-2含量影响差异不显著（P>0.05），但高剂量VA有增加IL-2含量趋势。CLA 和VA交互作用对IL-2影响差异不显著（P>0.05），Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组（CLA水平0）IL-2含量显著低于其他组。

表4　共轭亚油酸和维生素A对蛋鸡免疫球蛋白含量影响Table 4　Effect of conjugated linoleic acid and vitamin A on the Ig of laying hens

表5　共轭亚油酸和维生素A对白细胞介素-2和肿瘤坏死因子-α含量影响Table 5　Effect of conjugated linoleic acid and vitamin A on the IL-2 and TNF-α of laying hens

不同剂量CLA对血清中TNF-α含量影响差异极显著（P<0.01），2%CLA添加组血清中TNF-α含量低于0、4%CLA添加组，且差异显著，相对于0、4% CLA添加组，血清中TNF-α分别降低4.32%、2.40%。VA对TNF-α含量影响差异极显著（P< 0.01），随VA添加量增加血清中TNF-α含量增加。Ⅶ组TNF-α含量显著低于其他各组，CLA和VA两者交互作用对TNF-α影响差异极显著（P<0.01）。

2.4共轭亚油酸和维生素A对PPARγ基因mRNA表达影响

由表6可知，不同剂量CLA对PPARγ基因mRNA表达水平影响差异极显著（P<0.01），CLA添加量为2%和4%时，PPARγ基因mRNA表达水平均高于CLA添加量0，分别升高17.03%、6.87%，其中2%CLA添加组PPARγ基因mRNA表达水平显著高于4%CLA添加组。VA对PPARγ基因mRNA表达水平无显著影响（P>0.05），但整体上呈现先下降后上升趋势。CLA和VA交互作用对PPARγ基因mRNA表达水平无显著影响（P>0.05）。Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ组（共轭亚油酸水平2%）PPARγ基因mRNA表达水平高于其他组，各组总体呈现先上升后下降趋势。

表6　共轭亚油酸和维生素A对PPARγ基因mRNA表达影响Table 6　Effect of conjugated linoleic acid and vitamin A on the PPARγ gene mRNA expression of laying hens

3　讨论

3.1共轭亚油酸和维生素A对蛋鸡血清中总蛋白、球蛋白和白蛋白含量影响

总蛋白是反映肝脏合成功能指标，由白蛋白和球蛋白组成。血清球蛋白和白蛋白是反映肝功能、肾功能主要指标，白蛋白巯基基团可基于氧化还原状态，发出炎症细胞调节变化信号，Alam等在猪休克模型中采用不同液体进行复苏，发现使用白蛋白进行液体复苏，不会激活炎症反应[10]。球蛋白具有免疫调节作用，当肝脏发生炎症时，人体免疫系统就会随之被激活，从而导致免疫球蛋白增高。血清蛋白浓度升高不仅反映机体对日粮蛋白质利用效率改善，还是维持体液免疫水平、保证机体健康的重要基础。朱晓强在生长獭兔饲粮中添加VA研究表明，VA添加水平对血清白蛋白含量影响显著，维生素A添加水平为10 000 IU·kg-1时血清白蛋白含量最高，对血清总蛋白含量影响不显著[11]。与日粮添加0和20 000 IU·kg-1维生素A相比，日粮添加4 000 IU·kg-1维生素A肉鸡和蛋鸡白蛋白浓度最高，且蛋鸡血清白蛋白浓度显著高于肉鸡[12]。冯少婓研究表明[13]，VA对鹅血清中总蛋白、白蛋白和球蛋白均无显著影响，且VA添加水平为10 000 IU·kg-1时，25日龄鹅血清蛋白含量最高。本试验中VA对白蛋白浓度影响差异不显著，8 000 IU·kg-1维生素A处理组蛋鸡白蛋白浓度高于其他处理组，说明日粮中添加适量维生素A可以使蛋鸡血清白蛋白浓度升高，缺乏和过量都会使其浓度降低。王丹通过试验结果表明[14]，日粮中添加维生素A对朗德鹅血清球蛋白有显著影响，这与本试验研究结果一致，VA对总蛋白和球蛋白影响差异极显著，随着VA添加量增加，血清中总蛋白和球蛋白含量增加，这说明，添加维生素A有利于提高血清总蛋白含量，保持与组织蛋白质正向动态平衡作用的加强，促进蛋鸡生长。球蛋白含量提高，意味着机体体液免疫功能增强。

郗艳菊等研究表明CLA对血清总蛋白[4]、白蛋白、球蛋白、白球比等影响不显著，但总蛋白、白蛋白和球蛋白有增加趋势。刘佰阳发现[15]，CLA 对35日龄肉仔鸡血清中总蛋白、白蛋白无影响，而0.75%CLA对球蛋白影响显著。黄金秀等研究表明随饲粮CLA添加量增加[16]，血清白蛋白浓度不断下降，血清球蛋白浓度升高。本试验中，随着CLA添加量增加，血清中总蛋白、球蛋白、白蛋白含量都在增加。且CLA对总蛋白和球蛋白影响差异极显著，对白蛋白影响显著。与上述研究结果相似，血清蛋白浓度升高说明CLA可能通过调节机体对外界不良反应敏感性改变机体环境，增强机体体液免疫。CLA和VA交互作用对总蛋白和球蛋白影响显著，对白蛋白影响不显著。国内外未见两者互作对蛋鸡血清蛋白含量影响的报道，有待进一步研究。

3.2共轭亚油酸和维生素A对蛋鸡免疫球蛋白影响

免疫球蛋白是指具有抗体活性的动物蛋白，主要存在于血液中。它是介导体液免疫主要抗体，血清抗体高低在一定程度上反映机体对疾病抵抗能力。IgA、IgG和IgM是家禽体内3种重要免疫球蛋白。IgA是机体黏膜防御感染的重要因素；IgG可与淋巴细胞或巨噬细胞结合，杀死肿瘤细胞，在体液免疫中最为重要；IgM具有沉淀、凝集、补体化等多种功能，是一种高效能抗体，可破坏肿瘤细胞，在抗肿瘤免疫中起重要作用。维生素A与体内各种抗体（IgA、IgG、IgM、IgE等）水平密切相关。马洪研究指出[17]，维生素A与体内抗体IgA水平密切相关，研究表明，日粮维生素A水平对肉仔鸡血清中IgA含量影响差异显著，日粮维生素A水平升高使肉仔鸡21日龄时血清中IgA含量显著升高[18]。Nonnecke等在体外试验研究中认为，维生素A可通过促进T淋巴细胞增殖，抑制T淋巴细胞凋亡，影响T淋巴细胞亚群分化等多个环节来调节T淋巴细胞功能，从而促进IgA生成[19]。本试验结果表明，VA对血清IgA影响差异极显著，随着VA添加量增加IgA含量增加，与前人研究结果一致。在本试验条件下，16 000 IU·kg-1维生素A添加量使肉仔鸡血清中IgA水平达到最高。可见日粮中添加维生素A能显著提高蛋鸡血清中免疫活性物质含量，改善蛋鸡免疫功能。张养东等试验结果表明，VA对IgG、IgM影响差异不显著[20]。温泽章等研究发现维生素A可提高猪、鼠等动物的抗体，视黄醇通过B淋巴细胞介导增加免疫球蛋白合成，视黄酸通过T淋巴细胞介导或产生淋巴因子促进免疫球蛋白合成，同视黄醇相比，饲喂等量视黄酸，血清中以IgA、IgM、lgG以及胆汁中IgA活性更高[21]。本试验中，VA对IgM和IgG影响差异显著，随着VA添加量增加、IgM和IgG含量增加。这说明VA能够通过提高免疫球蛋白浓度来提高对疾病的抵抗能力，同时增强免疫机能，与前人研究结果不一致，可能与动物种属，饲养方式和生理状况有关，具体原因以及添加水平有待进一步研究。

CLA对动物体液免疫影响主要表现在对免疫球蛋白表达水平的影响，CLA能增加外周血液和肠系膜淋巴结中IgG、IgA和IgM含量。Yamasaki等在对小鼠试验中观察到，CLA能提高脾脏中免疫球蛋白IgA产生，但是不影响血浆中IgG水平[22]。郗艳菊等研究结果表明，添加1.2%CLA可显著提高各免疫器官指数，IgG、IgM也有不同程度提高[4]。Jin等研究发现，0.5%CLA能增加血淋巴细胞中IgG 和IgA以及肠系膜淋巴细胞中IgA含量，1.5%CLA 对IgG有降低趋势[23]。本试验与Jin试验结果不同：在添加2%CLA，IgG含量最高，4%CLA对IgG有降低趋势，CLA对血清IgA和IgG影响差异极显著，随着CLA添加水平增加，IgA和IgM增加，对血清IgM影响差异显著，2%CLA添加组血清中IgM含量高于0、4%CLA添加组，说明CLA能够促使蛋鸡机体大量分泌合成抗体抵御外源异物入侵，在一定程度提高蛋鸡体体液免疫水平。另外本试验研究还发现，CLA和VA两者交互作用对IgA、IgG和IgM影响差异显著，说明CLA和VA在影响蛋鸡体液免疫方面具有协同作用。

3.3共轭亚油酸和维生素A对蛋鸡血清细胞因子影响

炎性细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α是由活化巨噬细胞分泌产生的活性物质，这些细胞因子会激活下丘脑-垂体-肾上腺轴，调节炎性反应以及应激激素等释放。白细胞介素是机体免疫功能重要的细胞因子，其中IL-2是调节免疫系统功能重要介质之一，可以通过刺激淋巴细胞克隆性增殖调节免疫功能。夏兆飞等研究指出，维生素A缺乏会使辅助T细胞活化途径受损，影响IL-2分泌释放[24]，庞建建试验研究表明，VA添加水平对IL-2没有产生显著影响，且日粮添加4 000 IU·kg-1维生素A，肉鸡和蛋鸡IL-2浓度均高于其他处理[12]。Aase认为VA对IL-2分泌调节与VA核内受体RARs有关，当RARs抗体存在时VA对IL-2分泌促进作用会消失[25]。本试验中，维生素A对血清IL-2影响差异不显著，但高剂量VA有增加IL-2含量趋势，与上述研究不同，在16 000 IU·kg-1时IL-2浓度最高。说明VA在一定水平能提高血清中IL-2浓度，这也提示细胞免疫功能增强。但适宜VA添加水平及机制有待进一步研究。

CLA调节脂肪因子和细胞因子，如瘦素、肿瘤坏死因子、脂联素或白介素[26-28]，Hayek等发现CLA可促使动物体分泌IL-2[29]。邹书道等试验表明，随CLA添加水平提高，试验第14天、试验第28天和试验第42天仔猪血清IL-2都有增加趋势，但统计差异不显著[30]。刘永祥等研究显示，用有丝分裂促进剂来刺激摄食CLA老鼠，结果发现可提高IL-2。刘永祥等研究表明日粮添加CLA提高仔猪外周血淋巴细胞IL-2诱生活性，缓解环孢酶素A对外周血淋巴细胞IL-2诱生活性的抑制作用[31]。本研究表明，CLA对血清中IL-2含量影响差异极显著（P<0.01），且CLA添加2%时，IL-2含量最高，4%CLA添加组血清中IL-2含量显著高于0 CLA添加组。说明适宜CLA能提高血清中IL-2含量，从而调节蛋鸡免疫机能。研究结果不同，可能由于试验动物品种及日龄不同而产生。另外本试验研究发现，CLA和VA对蛋鸡血清中IL-2含量不存在互作效应。国内外未见两者互作对蛋鸡血清IL-2含量影响报道，有待深入研究。

肿瘤坏死因子-α是一种涉及到系统性炎症的细胞因子，同时也是属于引起急相反应众多细胞因子中一员，在急慢性炎症反应中起重要作用。正常生理情况下，没有病毒或其他诱生剂作用，机体免疫功能处于平稳状态，TNF-α分泌受到一定程度抑制，对于机体是有利。马轶凡研究发现不同程度维生素A缺乏均使单个核细胞分泌IL-2、TNF-α水平下降，严重维生素A缺乏还使淋巴细胞转化受到明显抑制[32]。这与本试验研究结果不同，本试验中，随着VA添加量增加，TNF-α水平却升高。这可能因试验动物种类及VA添加量不同所致，且VA对动物血清中TNF-α研究甚少，所以VA对TNF-α水平影响尚待深入研究。

与饲喂亚油酸老鼠相比，CLA异构体混合组可以降低血清中TNF-α达50%[33-34]。Yang报道与饲喂玉米油试验组相比[35]，饲喂c9，t11CLA降低脂多糖诱发TNF-α以及直接影响巨噬细胞和单核细胞。在滩羊日粮中添加不同剂量共轭亚油酸使免疫应激滩羊血液中肿瘤坏死因子含量显著下降或极显著性下降[36]。本试验中，CLA对血清中TNF-α含量影响差异极显著，2%CLA添加组血清中TNF-α含量低于0%、4%CLA添加组，且差异显著，相对于0、4% CLA添加组，血清中TNF-α分别降低4.32%、2.40%，与上述研究结果一致。CLA对前炎性细胞因子TNF-α产生表现出抑制作用。细胞因子对淋巴细胞功能有重要调节作用。其中TNF-α是重要炎性细胞因子，具有活化淋巴细胞和促进淋巴细胞增殖作用。在一定浓度时，2%CLA对淋巴细胞增殖开始表现抑制作用，说明机体免疫功能处于平稳状态，TNF-α分泌可能受到抑制，对蛋鸡机体健康状况是有利。还有鼠类一些试验显示，CLA促进动物分泌TNF-α[37-38]，但Akahoshi等并没有发现CLA对小鼠血液TNF-α有影响[39]。由于CLA作用可能受所用模式动物、动物年龄、饲养环境和CLA异构体组成种类及比例影响，试验结果不一致。本试验研究还发现，CLA和VA两者交互作用对TNF-α影响差异极显著，说明CLA和VA在调节血清中TNF-α方面具有协同作用。

过氧化物酶体增殖剂激活受体（Peroxisome proliferators-activated receptors，PPARs）是核激素受体家族中配体激活受体，核受体为配体激活型转录因子，过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）为核受体，是调控基因转录和细胞功能的重要成分，PPAR能通过信号转导通路调控炎症反应过程中某些细胞因子表达和免疫细胞增殖与分化。PPARs 有3种亚型，即PPARα、PPARβ（亦称PPARδ）和PPARγ，PPARγ参与调节脂质代谢、调节炎症、细胞凋亡等病理过程[40]，PPARγ还可通过提高胰岛素敏感性参与调节炎症反应和葡萄糖代谢[41-43]。

研究表明，随着VA添加量升高，PPARγ基因mRNA相对表达量下降，VA对PPARγ基因mRNA表达有明显抑制作用[44]。本试验中，VA对PPARγ基因表达无显著影响（P>0.05），在VA添加量为16 000 IU·kg-1时，PPARγ基因mRNA表达量最高，与上述结果不一致，VA对PPARγ基因表达研究还甚少，VA能否通用过对PPARγ基因表达影响来提高蛋鸡免疫机能还不确定，需深入研究。CLA异构体是PPARs有效配体或活化剂，可通过PPARs发挥作用[45-46]。CLA对免疫反应介导很大程度是通过活化PPARγ，调节免疫细胞分化和各种细胞因子基因表达，发挥其独特免疫调节和抗炎症作用。不同CLA异构体在活化PPARγ时有其特异性。赖长华研究表明，CLA可使免疫应激断奶仔猪脾脏、胸腺和淋巴细胞PPARγ mRNA表达增强，并且c9，tll和t10，cl2 CLA也能够促进体外培养猪淋巴细胞PPARγ活化[47]。张海军研究发现，CLA显著提高脾PAPRγ mRNA相对含量[48]，但Ryder等却发现c9[49]，t11共轭亚油酸抑制大鼠肝脏PPARγ基因表达。Yu等认为PPARγ在免疫机制方面扮演着重要作用，CLA是通过PPARγ途径抑制TNF-α产生[50]。本试验研究结果，CLA对PPARγ基因mRNA表达影响差异显著（P<0.05），随着CLA添加量增加PPARγ基因mRNA表达水平升高，在CLA添加量为2%时PPARγ基因mRNA表达水平最高，而在CLA添加量为2%时TNF-α含量最低，与Yu等研究一致。本试验结果显示CLA抑制炎性细胞因子TNF-α产生，提高PPARγ基因mRNA表达，可能是CLA降低一些炎性细胞因子产生，解除了炎性因子对PPARγ抑制作用所致。具体机制还需进一步研究。另外，本试验研究结果表明，CLA和VA对PPARγ基因mRNA表达水平不存在互作效应。国内外未见两者互作对蛋鸡PPARγ基因表达影响报道，有待深入研究。

4　结　论

a. CLA显著增加血清蛋白和免疫球蛋白含量，除中IgM含量外，添加4%CLA组血清蛋白及免疫球蛋白含量均高于0 CLA和2%CLA组，CLA对IL-2、TNF-α含量影响差异极显著，CLA添加2%时，IL-2含量最高，TNF-α含量最低，CLA显著促进PPARγ基因mRNA表达。

b.除白蛋白和IL-2外，VA对血清蛋白含量、免疫球蛋白含量以及TNF-α含量影响差异显著，且随着VA添加量的增加，血清中各项免疫指标含量增加，VA对PPARγ基因mRNA表达无显著影响。

c. CLA和VA两者交互作用对总蛋白、球蛋白、IgA、IgM、IgG、及TNF-α影响差异显著。

以上结果显示CLA和VA具有提高蛋鸡免疫机能作用，且CLA和V A对蛋鸡免疫机能影响存在一定互作效应。

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Effect of conjugated linoleic acid and Vitamin A on immune function of

laying hens

/ZHANG Zhongyuan1, WU Guoling1, WANG Lei1, CHEN Jingjing1, HAO Jian1, SHAN Yulan2

(1. Animal Nutrition Institute, Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China; 2. Heilongjiang Animal Husbandry and Veterinary Information Center, Harbin 150040, China)

Abstract:The present study was conducted to investigate the effect of conjugated linoleic acid (CLA) and Vitamin A (VA) on immune function of laying hens. Two hundred and sixteen healthful brown layers at 30 weeks old were randomly allocated to 9 treatments, each treatment has 3 replicates of 8 broilers. 3×3 completely cross-group design was used in the experiment, in which the layers were fed the diets for 6 weeks with different levels of Vitamin A(4 000, 8 000 and 16 000 IU·kg-1) and CLA(0, 2%,

4%). The results showed that CLA increased total protein, globulin, albumin in the serum significantly, VA had significant effect on total protein，globulin in the serum (P<0.01), total protein，globulin in the serum were increased with VA levels increasing. CLA had significant effect on immunoglobulin A (IgA) and immunoglobulin G (IgG) in the serum (P<0.01), and had significant effects on immunoglobulin M (IgM) (P<0.05). IgA and IgM in the serum were increased with CLA levels increasing, IgG in 2% CLA treatments were higher than in 0% and 4% treatments. VA had extremely significant effect on IgA (P< 0.01), and had a significant impact on IgM and IgG (P<0.05), IgA, IgG and IgM in the serum were increased with VA levels increasing, Between VA and CLA interaction had extremely significant effect on IgA, IgM and IgG (P<0.01). The interleukin-2 (IL-2) and tumor necrosis factor-α(TNF-α) were affected significantly by the levels of CLA (P<0.01), and CLA with 2% in diets, the highest levels of IL-2, and the lowest levels of TNF-α. VA had no significant effect on IL-2, but had significant effect on TNF-α (P<0.01), TNF-α in the serum were increased with the increasing VA levels. Between CLA and VA interaction had significant effect on IL-2 and TNF-α(P<0.05). CLA significantly enhanced mRNA expression of peroxisome proliferator-activated receptor γ(PPARγ) (P<0.01), no significant effect of VA on the mRNA expression of PPARγ(P>0.05). Between CLA and VA interaction had no significant effect on mRNA expression of PPARγ. These results suggested that CLA and VA improved immune function of laying hens, and CLA and VA interaction had a significant effect on the immune function of laying hens.

Key words:conjugated linoleic acid; vitamin A; laying hens; immune function

基金项目：东北农业大学博士启动基金（2010RCB35）；黑龙江省高等学校饲料营养重点实验室开放课题（yy-2012-09）

作者简介：张忠远（1971-），男，副教授，博士，研究方向为家禽营养。E-mail: zyzhang@neau. edu. cn

收稿日期：2014-10-15

文章编号：1005-9369（2015）02-0037-10

文献标志码：A

中图分类号：S831.5