梁 鑫 成姝婷 王正荣** 何 煊 单旭东

1.成都中医药大学第二附属医院（成都 610041）； 2.四川大学基础医学与法医学院

·论 著·

Clock基因对精子顶体酶的影响*

梁 鑫1成姝婷2王正荣2**何 煊2单旭东1

1.成都中医药大学第二附属医院（成都 610041）； 2.四川大学基础医学与法医学院

目的 研究雄鼠睾丸Clock基因沉默后，小鼠精子顶体酶的活性及功能。方法 在ICR小鼠睾丸内注射Clock干扰质粒干扰雄性小鼠睾丸节律基因Clock 的表达，研究：（1）进行体外受精，观察精子驱散卵丘颗粒细胞情况及受精率等；（2）检测精子顶体内顶体蛋白酶、透明质酸酶活性及芳香基硫酸酯酶A（ASA）的含量。（3）将精子注射入卵母细胞，观察受精卵及胚胎发育情况。结果 睾丸Clock 基因沉默后，精子驱散卵丘颗粒细胞时间延长，受精率下降；精子顶体蛋白酶活性下降；透明质酸酶活性和ASA含量无明显变化；干扰组精子对卵母细胞及胚胎发育的影响小于未干扰组（P＜0.05）。结论 干扰睾丸Clock 基因表达后，影响精子顶体蛋白酶活性，从而影响雄性小鼠的生殖功能。

Clock 基因； 顶体蛋白酶； 精子； 不育，男性

近日节律基因广泛存在于生物体内，调控着机体的生命活动。近来研究发现，近日节律的核心基因Clock与雄性的生殖密切相关。ClockΔ19/Δ19突变的雄性小鼠体内和体外实验都提示生殖力下降［1］；干扰睾丸Clock 基因的表达引起小鼠胎仔数下降［2］。研究显示，CLOCK蛋白限制性地表达在精子生成过程中圆形精子的顶体［3］，而精子顶体（特别是顶体内水解酶）在受精过程中发挥重要作用。因此，本研究利用RNA干扰（RNAi）技术，限制性干扰小鼠睾丸Clock基因的表达，探讨Clock基因对小鼠生殖功能影响的机制。……