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格列吡嗪口崩片的人体生物等效性试验

2015-10-21杨洁

科技致富向导 2015年1期
关键词:人体

杨洁

【摘 要】格列吡嗪为第二代磺酰脲类抗糖尿病药,可使空腹及餐后血糖降低。本文对格列吡嗪口崩片的人体生物等效性进行研究。方法:选择40名健康志愿者,随机双交叉单剂量口服10mg,采用高效液相色谱法测得不同时间血液中格列吡嗪的含量。实验结果表明格列吡嗪口崩片的达峰时间较普通片剂明显提前。

【关键词】格列吡嗪;人体;生物等效性

格列吡嗪为第二代磺酰脲类抗糖尿病药,可使空腹及餐后血糖降低。格列吡嗪主要作用为刺激胰岛B 细胞分泌胰岛素,从而使K+通道关闭,引起膜电位改变,Ca2+通道开启,胞液内Ca2+升高,促使胰岛素分泌[1-2]。格列吡嗪主要用于单用饮食控制治疗未能达到良好效果的轻、中度非胰岛素依赖型病人,治疗有效率约87%。生物等效性是指药学等效制剂或可替换药物在相同试验条件下,服用相同剂量,其活性成分吸收程度和速度的差异无统计学意义。本文对格列吡嗪口崩片的人体生物等效性进行研究。

1.仪器与试药

Vertex Sti P5000高效液相色谱仪(上海禾工科学仪器有限公司);CO-1000型色谱柱温箱(上海子期实验设备有限公司);HQ-50高端试剂级超纯水机(郑州华新电气公司);SCQ-K001空气超声波清洗器(上海声彦超声仪器有限公司);FA1204B电子分析天平(上海精科天美贸易有限公司);320XT电子分析天平(上海精科天美贸易有限公司);RE-5298旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂);TG16-WS台式高速离心机(上海卢湘仪离心机仪器有限公司);Chemvak无油真空泵(北京桑翌实验仪器研究所);TU-1810紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)。氢氧化钠(苏州市元硕精细化学品有限公司)、庚烷磺酸钠(苏州市元硕精细化学品有限公司)、磷酸二氢钠(苏州逸祥化工科技有限公司)、三乙胺(上海德诺化工有限公司)、乙腈(济南福尔化工科技有限公司)、甲醇(河北东光恒达化工有限责任公司)、甲酸(河北东光恒达化工有限责任公司)、冰醋酸(济南福尔化工科技有限公司)、乙醚(常州市云阳化工有限公司)。

2.含量测定

2.1色谱条件

色谱柱为YMCCl8规格为(4.6mm×250mm,5μm);甲醇-乙腈-水-甲酸(30:35:35∶0.2)为流动相;检测波长为225nm;流速1.0mL·min-1;柱温40℃。

2.2受试者选择

本研究根据受试者入选、排除标准从89名志愿者中筛选出40名受试者参加本研究。所有受试者均完成了本研究的全部过程,无中途退出者。采用开放、随机分组、二组服用格列吡嗪口崩片和格列吡嗪普通片单剂量10mg片剂的交叉试验设计进行本项生物等效性研究。

2.3给药方法与样品采集

采用两制剂双周期交叉的试验设计, 受试者按随机原则分成 2组,分别给药。

2.4对照品溶液的制备

取格列吡嗪对照品5mg,精密称定,置100mL量瓶中,加流动相适量振摇使溶解,并稀释至刻度。摇匀,配制成50μg/ml的内标贮备液。精密量取5mL内标溶液,置于50毫升容量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,配制成5μg/ml的对照品溶液。

2.5供试品溶液的制备

精确吸取待检测血浆,加入0.01mol/l盐酸溶液0.1毫升,涡旋混匀1分钟,再加入乙醚10ml,高速离心10分钟,40℃水浴空气吹干,加入流动相溶解,涡旋1分钟,使用0.45微孔滤膜过滤,取续滤液,即得。

2.6标准曲线的制备

取空白血浆分别配成质量浓度相当于30μg/ml、60μg/ml、90μg/ml、120μg/ml、150μg/ml、180μg/ml、210μg/ml的对照品溶液,分别精密吸取10μL注入HPLC,记录色谱图。以峰面积积分值A(μg)为横坐标,进样量为纵坐标,绘制标准曲线,计算回归方程。试验表明,格列吡嗪对照品在30~210ug·L-1范围内线性关系良好。

2.7回收率试验

采用加样回收试验,取供试品血浆,精密添加一定量的格列吡嗪对照品,加入0.01mol/l盐酸溶液0.1毫升,涡旋混匀1分钟,再加入乙醚10ml,高速離心10分钟,40℃水浴空气吹干,加入流动相溶解,涡旋1分钟,使用0.45微孔滤膜过滤,取续滤液,按测定方法,计算回收率。6次测定的平均回收率为95.3%,RSD为1.62%。

2.8样品稳定性试验

取供试品血浆,按2.5项下的供试品制备方法制备供试品,将供试品置4℃下放置,分别于第0、2、4、6小时,精密吸取供试品溶液10μl注入液相色谱仪中,记录色谱图。测定格列吡嗪的含量,RSD=0.93%。结果表明供试品6小时内稳定。

3.结果

格列吡嗪口崩片的达峰时间较普通片剂明显提前。生物利用度参数40名健康志愿者随机双交叉单剂量口服10mg格列吡嗪口崩片和格列吡嗪片后,体相对生物利用度为F=(103.2±6.3)%以试验制剂和参比制剂的AuC24计算。试验制剂AUC的90%置信区间落在标准参比制剂的96.66%~108.67%内,ρmax在82.56%~116.56%,可判两制剂生物等效。

4.讨论

HPLC方法是常用的血浆格列吡嗪检测方法[3-11]。在较广泛的流动分别考察甲醇-乙腈-水-甲酸(30:35:35∶0.2),甲醇-缓冲液( 磷酸二氢钠6.0g,加水溶解并稀释至1000ml,加三乙胺1ml,用浓氢氧化钠溶液调节pH 值至7.0)(30∶70),2%庚烷磺酸钠溶液-甲醇-乙腈-三乙胺(25:30:30:0.1),乙腈一水一三乙胺(40:65:0.1)用磷酸调节pH至7.0不同比例的流动相,结果以甲醇-乙腈-水-甲酸(30:35:35∶0.2)为流动相,供试品各峰分离效果最好,故选用甲醇-乙腈-水-甲酸(30:35:35∶0.2)为流动相。 [科]

【参考文献】

[1]车晋伟,胡森.格列吡嗪对内毒素血症羊血流动力学及全身氧输送的作用[J].中国危重病急救医学,2006(11).

[2]张兰,张文萍,刘晓红,孙英华,孙进,何仲贵.格列吡嗪双层渗透泵片的制备[J].中国药剂学杂志(网络版),2009(06).

[3]张洪德,朱熊,周炳生,吴增常.国产与进口格列吡嗪治疗非胰岛素依赖型糖尿病比较[J].中国新药与临床杂志,1993(03).

[4]任进民,樊德厚,杨宝通,蒋俊康,黄慧英,王春英.格列吡嗪片溶出度考察[J].中国医院药学杂志,1996(12).

[5]徐淑贞.两种测定格列吡嗪胶囊溶出度方法的比较[J].海峡药学,1998(04).

[6]陈燕忠,吕竹芬.格列吡嗪缓释胶囊在兔体内的药物动力学及相对生物利用度[J].上海医药,1998(08).

[7]黄圣凯,杨劲,黄开军.格列吡嗪胶囊剂的相对生物利用度和生物等效性评价[J].中国新药与临床杂志,1995(03).

[8]颜勤明,左红.格列吡嗪与格列齐特对控制餐后高血糖疗效的比较[J].实用医学杂志,1999(07).

[9]傅善基,刘向群,张健,王谦.人血清格列吡嗪高效液相色谱测定方法的研究[J].山东生物医学工程,2002(01).

[10]胡桂.格列本脲替代格列吡嗪:最小费用分析[J].药物流行病学杂志,1997(02).

[11]赵红燕.磺酰脲类降血糖药格列吡嗪控释片[J].国外医药.合成药.生化药.制剂分册,1998(04).

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