蒋禄峰 常丽云 张晶 张梦茜 秦建华 赵月兰 包永占

摘要：将柔嫩艾美耳球虫（E.tenella）石家庄、沧州、保定、唐山分离株感染14日龄罗曼蛋公雏，每个地区设立5个用药组、1个感染不用药对照组和1个不感染不用药对照组，以POAA、RLS、ROP、ACI作为评定指标对该虫株对氯羟吡啶、莫能菌素、地克珠利、妥曲珠利、磺胺喹噁啉5种常用抗球虫药的抗药性进行了综合评定，分析了该地区球虫的抗药性及用药对策。

结果表明：E.tenella石家庄分离株对氯羟吡啶呈完全抗药性，对莫能菌素、妥曲珠利、磺胺喹嗯啉呈重度抗药，对地克珠利表现轻度抗药；E.tenella沧州分离株对氯羟吡啶、莫能菌素、地克珠利呈完全抗药性，对妥曲珠利、磺胺喹噁林呈中度抗药；E.tenella保定分离株对氯羟吡啶呈完全抗药性，对妥曲珠利呈重度抗药，对莫能菌素、地克珠利、磺胺喹嗯啉呈中度抗药；E.tenella唐山分离株对莫能菌素、妥曲珠利呈完全抗药性，对氯羟吡啶、地克珠利呈中度抗药，对磺胺喹噁林呈轻度抗药。

关键词：柔嫩艾美耳球虫；抗球虫药；耐药性；鸡

鸡球虫病是危害养鸡业的主要疾病之一，尤以柔嫩艾美耳球虫致病性最强，柔嫩艾美耳球虫寄生于鸡肠道上皮细胞内，引起腹泻、血便、生长迟缓、饲料转化率降低，常导致雏鸡大批死亡，即使发病耐过的鸡生長发育也比较迟缓。目前防治该病最主要的方法是应用化学性抗球虫药物，随着抗球虫药的长期使用而产生耐药性，导致抗球虫药物使用年限缩短，防治效果不佳甚至失败，引起临床或亚临床鸡球虫病，造成严重的经济损失。近年来新的抗球虫药物不断上市，但在使用中发现不同地区治疗效果不尽相同。为更好的利用药物，及时了解和评价抗球虫药对当地球虫的治疗效果，降低球虫病造成的经济损失，更好地指导生产，对鸡球虫病及球虫抗药性的调查、诊断、研究和分析是养鸡业发展的必要前提。本试验对河北省石家庄、沧州、保定、唐山地区分离的球虫株采用5种常见的抗球虫药进行了药敏对比检测，旨在为这些地区鸡球虫病的防控策略提供依据。

1 材料与方法

1.1 试验用的虫株

采自石家庄、沧州、保定、唐山的鸡盲肠内容物，按常规方法分离m球虫卵囊，加入2.5%重铬酸钾溶液，置于27～30℃恒温培养箱中，前18h每3h搅拌1次，以后每日搅拌4～5次，待85%以上卵囊孢子化后，收集保存于4℃冰箱备用。

1.2 试验动物

450只购自河北保定徐水大午禽业有限公司的1日龄罗曼蛋公雏，饲养环境在雏鸡购买前一周进行熏蒸消毒，确保在兀菌、无球虫状态下隔离饲养，饲料不添加任何抗球虫药物，饲料、饮水、食槽等用具均高温消毒。

1.3 单卵囊的分离与鉴定

1.3.1 琼脂块的制作

称取lg琼脂糖，置于三角烧瓶中，加入100mL蒸馏水，搅匀、煮沸，用吸管吸取琼脂液浇注于载玻片上，厚度2～3mm，静置凝固后，用刀片将琼脂糖切成约4mmx4mm的小块，再将小块分散排列到另一块载玻片上，待用。

1.3.2 单卵囊的分离

用牙签沾取初次分离备用的卵囊悬液于琼脂滴上，低倍镜下仔细观察为单个卵囊时调至高倍镜下观察，选择卵囊孢子化完全、形态、大小符合柔嫩艾美耳球虫形态学特征的做好标记，饲喂14日龄雏鸡。接种后的雏鸡单个隔离饲养于严格消毒的鸡笼中，感染后第5天起收集粪便镜检，镜下观察球虫的形态、大小一致并与祖代相吻合的，标记好收集培养。感染后第8天，全部扑杀，剖检所有鸡只，取盲肠内容物分离卵囊，培养至孢子化，置于4℃冰箱中备用。

1.4 试验药物用法与用量

共计5种，分别是：氯羟吡啶（粉剂，苏州某兽药股份有限公司，使用方法为每1kg饲料添加0.5g成品）；莫能菌素（粉剂，使用方法为每1kg饲料添加0.5g成品）；地克珠利（溶液，江苏某动物药业公司，使用方法为每1000mL水中添加0.2mL）；妥曲珠利（溶液，山东某兽药有限公司，使用方法为每1000mL水中添加0.5mL）；磺胺喹嗯啉（可溶性粉，上海某动物保健品有限公司，使用方法为每1000mL水中添加0.5g）。

1.5 试验设计

将试验用鸡于14日龄早晨逐只空腹称重，淘汰弱雏及体重过大过小者，并进行编号。然后根据体重离散度随机分组，四个地区虫株各分七组，5个给药组，1个阳性对照（感染不给药）组和1个阴性对照（不感染不给药）组，每组10只，总体重基本一致。分组完毕后，除阴性对照组外，其他各组鸡在14日龄用钝头注射器经口接种5×l0⁴个柔嫩艾美耳球虫石家庄、沧州、保定、唐山分离株孢子化卵囊，对5个给药组进行给药，直至试验结束。药物剂量和给药方式见1.4部分。攻虫后每天观察鸡的生长情况和发病情况，对血便出现情况和死亡情况进行统计，试验过程中对死亡鸡立即进行称重和剖检，确认是否死于球虫病，第8天时将所有鸡称重并扑杀，收集盲肠待检。

1.6 抗药性评定指标

选用最适抗球虫活性百分率（POAA）、病变记分减少率（RLS）、相对卵囊产量（ROP）和抗球虫指数（ACI）4项指标对抗药性进行综合判定。

POAA=[（感染用药组GSR-阳性组CJSR）÷（阴性组GSR-阳性组CJSR）]×100%，其中，GSR=末重÷始重。POAA> 50%，判为阴性；POAA≤50%，判为阳性。RLS=[（阳性组病变记分一感染用药组病变记分）÷阳性组病变记分]×100%。RLS≥50%，判为阴性；RLS<50%，判为阳性。ROP=（感染用药组卵囊数÷阳性组卵囊数）×100%。ROP<15%，判为阴性；ROP≥15%，判为阳性。ACI=（存活率+相对增重率）一（病变值+卵囊值）。ACI≥160，判为阴性；ACI<160，判为阳性。其中：存活率（%）=存活只数÷开始鸡数×100%；相对增重率（%）=阳性组或感染用药组增重率÷阴性组增重率×100%；病变值=每组平均病变记分×10；卵囊值：当阴性组或感染用药组OPCJ值与阳性组OPCJ值的比值分别为小于1%、1%～25%、26%～50%、51%～75%和76%～100%时，卵囊值分别为0，5，10，20和40。

1.7 抗药性判断标准

按黄兵等方法，以上4项指标中出现阳性指标的数量来确定药物的抗药程度，敏感（Sensitive，S）：ACI、RLS、ROP、POAA中4项指标均为阴性；轻度抗药（Light resistant，LR）：4项指标中有1项指标为阳性；中度抗药（Middle resistant，MR）：4项指标中有2项指标为阳性；重度抗药（serious resistant，SR）：4项指标中有3项指标为阳性；完全抗药（Completeresistant，CR）：4项指标全为阳性。

2 结果

2.1 临床症状和病理变化

各攻虫组试验鸡在攻虫后第4d时，临床上开始出现食欲不振、精神委顿、羽毛逆立、缩脖呆立、扎堆，排血便，甚至死亡，攻虫7d后症状有所缓解，死亡停止。

2.2 耐药性检测结果

由表1一表4可以看出，柔嫩艾美耳球蟲对所选的5种抗球虫药物均产生不同程度的抗药性，但根据POAA、RLS、ROP和ACI4项指标综合判断，E.tenella石家庄分离株对氯羟吡啶呈完全抗药性，莫能菌素、妥曲珠利、磺胺喹噁啉呈重度抗药，对地克珠利表现轻度抗药性（表1）；E.tenella沧州分离株对氯羟吡啶、莫能菌素、地克珠利呈完全抗药性，对妥曲珠利、磺胺喹嗯啉呈中度抗药（表2）；E.tenella保定分离株对氯羟吡啶呈完全抗药性，对妥曲珠利呈重度抗药，对莫能菌素、地克珠利、磺胺喹噁啉呈中度抗药（表3）；E.Tenella唐山分离株对莫能菌素、妥曲珠利呈完全抗药性，对氯羟吡啶、地克珠利呈中度抗药，对磺胺喹噁啉呈轻度抗药（表4）。

3 讨论与小结

鸡球虫几乎对所有抗球虫药物产生耐药性，因此使用抗球虫药物应有一个合理的用药方案，以确保药物的治疗效果，延缓鸡球虫耐药性的产生，从而有效地预防和控制鸡球虫病的发生。联合用药是在同一个饲养期内同时用2种或2种以上抗球虫药，通过药物间的协同作用，延缓耐药虫株的产生，增强药效，同时可扩大抗球虫谱。轮换用药，季节性地或定期变换用药，每隔3个月或半年改换一种抗球虫药，目的是避免耐药性虫株的m现，但不改变作用机理和作用峰期相同的药物，以免产生交叉耐药性或变换用药后效果不明显。

本试验检测4个不同地区4株柔嫩艾美耳球虫对5种抗球虫药的疗效对比情况，结果表明：E.tenella石家庄分离株对氯羟吡啶呈完全抗药性，对莫能菌素、妥曲珠利、磺胺喹噁啉呈重度抗药，对地克珠利表现轻度抗药性；E.tenella沧州分离株对氯羟吡啶、莫能菌素、地克珠利呈完全抗药性，对妥曲珠利、磺胺喹噁啉呈中度抗药；E.tenella保定分离株对氯羟吡啶呈完全抗药性，对妥曲珠利呈重度抗药，对莫能菌素、地克珠利、磺胺喹噁啉呈中度抗药；E.tenella唐山分离株对莫能菌素、妥曲珠利呈完全抗药性，对氯羟吡啶、地克珠利呈中度抗药，对磺胺喹噁呈轻度抗药。

氯羟吡啶是吡啶类抗球虫药，该药使用初期对球虫有较好的效果，但球虫对其极易产生抗药性，通常连续使用2～3年，其ACI就明显下降。本试验中4株E.tenella均已对氯羟吡啶产生不同程度的抗药性，尤以石家庄株、沧州株、保定株完全抗药，而唐山株中度抗药。故在石家庄、沧州和保定三地区应完全停止使用该药，在唐山地区应慎用该药。

地克珠利与妥曲珠利均属三嗪类抗球虫药，曾因高效低毒被广泛应用，然而长期用药已使鸡球虫产生了抗药性，本次采集的石家庄分离株对地克珠利轻度抗药，可配合其他抗球虫药继续使用；保定株和唐山株对地克珠利中度抗药，建议穿梭用药，短期使用或与其他抗球虫药交替使用；沧州株对地克珠利完全抗药，近期不宜使用。石家庄株、保定株、唐山株对妥曲珠利综合判定为完全抗药，不可选用妥曲珠利作为防治鸡球虫病药物；沧州株对妥曲珠利中度抗药，可穿梭用药或配合其他药物。

莫能菌素是聚醚类抗生素，具有促进离子通过细胞膜的能力，石家庄株、沧州株、唐山株对莫能菌素表现出完全抗药，不用其作为防治鸡球虫的药物；保定株对莫能菌素中度抗药，可配合其他药物或者中草药来防治鸡球虫病。

磺胺喹噁啉属于磺胺类化学抗球虫药，鸡球虫容易对其产生抗药性，治疗过程中必须使用足够剂量和连续用药，石家庄株对磺胺喹噁啉完全抗药，在这个地区应该停用此药，使敏感性得以恢复；沧州株、保定株对磺胺喹噁啉中度抗药，不宜作为主要抗球虫药使用；唐山株对磺胺喹噁啉轻度抗药，适宜继续使用。

该结果为当地防治鸡的球虫病，制定合理的用药方案提供了有效的依据，从而减少了盲目用药带来的经济损失。