袁厅 华利忠 宦海琳 顾洪如 吴叙苏 邵国青

摘要：为了解各种抗生素对发酵床益生菌的影响，本研究采用纸片扩散法研究8种发酵床常用的益生菌单独培养及混合培养对50种常用抗生素对的敏感性。结果：单独培养的多数益生菌对氯霉素类、氨基糖苷类、喹诺酮类、四环素类及大环内酯类高度及中度敏感，但对青霉素类、头孢类以及林可霉素低敏感性或不敏感。混合培养菌对氯霉素类、氨基糖苷类、喹诺酮类、强力霉素、克林霉素高敏感；对四环素、美满霉素、林可霉素、阿莫西林、头孢曲松、头孢噻肟等中度敏感；对氨苄西林和头孢唑肟低敏感；对复方新诺明、多粘霉素B、青霉素、头孢克肟、头孢吡肟、头孢噻吩不敏感。

关键词：发酵床；抗生素；药敏试验：敏感性

发酵床养猪是利用发酵床专用菌种，按一定比例混合锯末、稻壳等农林生产下脚料，通过发酵床的分解发酵，使猪粪、尿中的有机物质得到充分的分解和转化，从而将猪舍垫料发酵床演变成微生态饲料加丁厂，创造一种零排放、兀污染的生态养猪模式。因此发酵床养殖最重要的是其中的活性微生物，即益生菌。所以人们普遍认为，发酵床养猪法猪舍内不能使用化学消毒药品和抗生素类药物，否则将杀灭和抑制益生菌，或抑制其繁殖，使得微生物的活性降低。如杨景辉等在富源县应用发酵床养猪过程中，开展了饲喂含抗生素和不含抗生素饲料、抗生素治疗病猪、发酵床表面消毒、猪群疫苗接种等对发酵床猪舍温度影响，结果发现含抗生素饲料以及用抗生素治疗发病猪会对发酵床床体产生影响，但疫苗免疫对其没有影响。敖梅英等也认为某些抗生素对对垫料中主要益生微生物生长均有不同程度的影响，应减少甚至停止使用抗生素作为饲料的添加剂。然而自20世纪50年代以来，抗生素作为疾病治疗剂和动物生长促进剂，发挥了重大作用。虽然发酵床养猪可以减少疾病的发生，却也不能保证绝不发病，如不使用抗生素及时治疗，也会产生一定的损失。为了解各种抗生素对发酵床益生菌的影响，本研究采用纸片扩散法研究8种发酵床常用的益生菌对50种常用抗生素对的敏感性，为发酵床养猪的临床用药提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌种所用8种菌株（纳豆芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、凝结芽胞杆菌、假卑孢菌杆菌、蜡样芽胞杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌）由江苏省农科院畜牧所提供。

1.1.2 主要药敏片所用药敏试纸片购自杭州微生物试剂有限公司，规格：直径6mm，执行标准：WS/T125-1999。

1.1.3 主要试剂及仪器LB液体培养基及LB固体培养基由实验室自配。超净工作台，恒温培养箱。

1.2 方法

1.2.1 细菌培养江苏省农业科学院畜牧所提供上述8益生菌，LB培养基复苏后，每种菌株挑取若干克隆配成0.5麦氏单位浓度的悬浊液，以500μL/块平板（直径90mm）的量均匀涂布LB琼脂平板。同时，取上述8种0.5麦氏单位浓度的菌液各3mL，混合均匀成一个混合菌，再按500μL/块平板涂布LB琼脂平板作为混合菌样本。

1.2.2 药敏试验采用纸片扩散法，细菌涂布好后，立即将纸片置于单独接种上述8种芽孢杆菌以及接种混合菌的LB琼脂平板上，每个培养皿中放五个药敏片，置于37℃温箱中培养。24h后，分度值为1mm的刻度尺量取抑菌圈的直径，根据药敏试验判断标准书，确定该菌对不同药物的敏感程度。如有些抑菌圈过大，无法量取抑菌圈大小，则重复上述实验，但将培养皿中的药敏片降为1个。

2 结果

2.1 8 种益生菌及其混合菌的药敏试验结果

采用50种抗生素对8种益生菌株進行药敏试验，测量抑菌圈直径，计算平均值。结果表明见表1。由表1可知，多数益生菌对多数抗生素（氯霉素类、氨基糖苷类、喹诺酮类、四环素类及大环内酯类）高度及中度敏感，但对青霉素类，头孢类以及林可霉素低敏感性或不敏感。

2.2 抗生素对8种益生菌敏感数统计

按敏感性统计各抗生素，发现混合培养菌对氯霉素类、氨基糖苷类、喹诺酮类、强力霉素，克林霉素高敏感；对四环素、美满霉素、林可霉素、阿莫西林、头孢曲松、头孢噻肟等中度敏感；对氨苄西林和头孢唑肟低敏感；对复方新诺明、多黏霉素B、青霉素、头孢克肟、头孢吡肟、头孢噻吩不敏感（表2）。

3 讨论

据发酵床的微生物作用原理，有益微生物及其产生的有益因子，在猪拱掘采食后，改善猪肠道菌群，大大降低肠道疾病的发病率。且由于发酵床养殖猪舍由于发酵床体中有益菌群发酵粪便，抑制了腐败菌等有害微生物的繁殖和有害气体的产生，从而减少空气中气载微生物的含量，对猪舍内空气环境的改善有一定积极的影响，但是仍然有潜在的危险，仍需要加强对某些细菌、病毒以及寄生虫的防控。所以抗生素的使用成为发酵床养猪法的争论的主要焦点之一。何鑫等利用益生菌高敏感的泰乐菌素和氟苯尼考，进行抗生素预防和治疗用量对发酵床床体的影响，发现在发酵床养殖过程中不是绝对不能使用抗生素类药物，而是要看其使用量是否合适。适当的药物使用是可行的，但如果猪群本身健康状况较差，则不一定适合在发酵床上进行长期用药治疗。说明发酵床益生菌敏感抗生素的使用需要把握药量，但该研究中的药物种类较少，也没有筛选出益生菌不敏感或低敏感的药物。本研究通过纸片扩散法研究8种发酵床中常用的益生菌对50种常用抗生素的敏感性，发现这些益生菌对青霉素类、头孢菌素类、林可霉素及多黏霉素B的敏感性较低，甚至不敏感，适合于发酵床应用，在用药方案制定中可不考虑对床体益生菌的影响，但其余敏感药物并不是一定不能用于发酵床，而是要注意用药方案的把握，尤其是用药量及用药过程的控制，避免药物影响益生菌的生长繁殖。此外曾艳等发现一些中药如蒲公英、茵陈、鱼腥草等对枯草芽孢杆菌、高温放线菌及产朊假丝酵母均无抑制作用，可选择这些中草药防治大肠杆菌及金黄色葡萄球菌。

由于疫苗免疫对发酵床床体没有影响，所以疫苗免疫是发酵床养猪模式下疫病防控的关键。华利忠等通过连续2年的流行病学调查对比了阜宁县发酵床和水冲圈模式下猪瘟，猪蓝耳病及猪口蹄疫血清抗体的差异，发现发酵床模式下猪蓝耳抗体阳性率比传统水冲圈高，这可能与发酵床能提高猪的免疫力有关。所以要根据本场或本地区疫病流行情况，制订合理的免疫程序，选择质量合格的疫苗，并且严格按照疫苗接种的使用说明、操作步骤，科学地接种疫苗。